Doseamento por CLAE

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CONTROLE DE QUALIDADE DE 
MEDICAMENTOS E COSMÉTICOS
Doseamento por Cromatografia a Líquido 
de Alta Eficiência - CLAE
Prof. André Lima de Oliveira Costa
CROMATOGRAFIA
Cromatografia é a técnica de separação dos
componentes de uma mistura entre duas fases
imiscíveis: móvel e estacionária.
Mecanismos de separação:
– Adsorção
– Partição
– Troca iônica
– Exclusão molecular
– Afinidade
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA
Separação de misturas por interação diferencial dos
seus componentes com uma fase estacionária (líquido
ou sólido) e uma fase móvel líquida.
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE 
FASE NORMAL
A fase estacionária apresenta um caráter polar.
Exemplo: partículas sólidas de sílica
Os compostos mais polares são mais adsorvidos.
Estrutura da sílica
CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE 
FASE REVERSA
A fase estacionária apresenta um caráter apolar.
Exemplo: partículas sólidas de sílica ligadas 
quimicamente a um grupo hidrofóbico.
Exemplos:
Coluna ODS
C18 (Octadecilsilano)
Coluna C8
(Octilsilano)
Os compostos mais apolares são mais retidos.
ODS
OUTRAS FASES QUIMICAMENTE LIGADAS
Outras fases quimicamente ligadas Interações
CN
NH2
Dipolo/Dipolo
O
H
Si N
H
H
Si
N
O
H
C
Ligação de 
hidrogênio
Fenil
Si
Van der Waals
FASE MÓVEL
Eluição isocrática: realizada com um único solvente
ou uma mistura constante de solventes.
Exemplo: Metanol e água (62:38).
Eluição por gradiente: realizada com quantidades
crescentes de um solvente B ao solvente A, para criar
um gradiente contínuo.
Exemplo:
FASE MÓVEL
CROMATÓGRAFO
PRINCIPAIS DETECTORES 
DETECTOR UV-VIS: absorvância na região do ultravioleta e do visível.
DETECTOR DE ARRANJO DE DIODOS (DAD): media simultânea de
absorvância em vários comprimentos de onda.
DETECTOR DE FLUORESCÊNCIA: emissão fluorescente após excitação
com luz.
DETECTOR DE ÍNDICE DE REFRAÇÃO: Mudança no índice de refração
da fase móvel.
DETECTORES ELETROQUÍMICOS: Oxidação ou redução em potencial
fixo.
DETECTORES POR ESPECTROETRIA DE MASSAS (EM): Separam os
íons em fase gasosa com diferentes razões massa/carga (m/z).
CROMATOGRAMAS
CROMATOGRAMAS 
CROMATOGRAMA
APLICAÇÕES EM ANÁLISES 
FARMACÊUTICAS 
• Identificação e doseamento de fármacos na matéria-prima
e no produto acabado.
• Separação e doseamento dos diferentes componentes de
uma formulação farmacêutica.
• Separação e doseamento de impurezas presentes na
matéria-prima e no produto acabado.
• Doseamento de fármacos nos testes de dissolução e
uniformidade de conteúdo.
• Detecção de produtos de degradação nos estudos de
estabilidade de preparações farmacêuticas.
ANÁLISE QUALITATIVA
Comparar o tempo de retenção do padrão com a amostra.
Cromatograma da solução padrão 
de ácido ascórbico
Cromatograma da solução amostra 
ANÁLISE QUANTITATIVA
A área do pico é diretamente proporcional à concentração.
ADEQUABILIDADE DO SISTEMA
• Fator de cauda do pico
• Resolução entre picos 
• Número de pratos teóricos da coluna
• Desvio-padrão relativo de injeções do padrão
DOSEAMENTO DE ALBENDAZOL 
EM COMPRIMIDOS
DOSEAMENTO DE ALBENDAZOL 
EM COMPRIMIDOS
DOSEAMENTO DE ALBENDAZOL 
EM COMPRIMIDOS
Albendazol Parbendazol
DOSEAMENTO DE ALBENDAZOL 
EM COMPRIMIDOS
SOLUÇÃO PADRÃO
SOLUÇÃO AMOSTRA