Imunofluorescência Direta e Indireta

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IMUNOFLUORESCÊNCIA
DIRETA E INDIRETA
Albert Coons
➢1942
➢ Demonstraram a 
marcação de 
anticorpos antipneu-
mococos com 
fluoresceína no tecido 
pulmonar.
A técnica de 
Imunofluorescência utiliza 
anticorpos marcados com 
corantes fluorescentes 
para revelar a formação 
de imunocomplexo vírus-
anticorpos.
Os anticorpos marcados 
com corante são 
chamados de conjugados.
Técnicas de 
imunofluorescência.
Imunofluorescência Direta (IFD):
Conhecida como técnica de camada simples, para detecção de 
antígenos em amostras clínicas, utilizando anticorpos marcados 
com corantes.
Imunofluorescência Indireta (IFI):
Conhecida como técnica dupla camada, onde primeiramente se 
aplica um anticorpo não fluorescente e depois aplica-se um 
anticorpo fluorescente no soro do paciente .
Rodamina
(TRICT)
Fluoresceína 
(FITC)
Corantes:
Etapas do IFD
1. Fixação de esfregaço 
da lâmina;
2. Tratamento com 
anticorpos marcados;
3. Incubação;
4. Lavagem para 
remover o excesso de 
anticorpos marcados 
não ligados;
5. Visualização no 
microscópio 
fluorescente.
Etapas do IFI
As etapas da IFI são 
diferentes para 
antígenos e 
anticorpos.
Etapas para 
antígenos:
1. Incuba-se células 
ou tecidos a ser 
pesquisados ;
2. Aplica-se o 
antígeno especifico 
obtida em uma 
célula animal ou 
monoclonal;
3. Formação de um 
Imuno-complexo;
4. Lavagem para 
ret irada dos 
anticorpos não 
ligantes excedentes.
5. Incubação com 
um conjugado anti-
imunoglobulina com 
fluorocromo 
produzidos em outra 
célula animal;
6. Observação em 
microscópio de 
fluorescência.
Etapas para anticorpos.
Fixar os antígenos 
padronizados na lâminas 
de v idro;
Diluir o soro do paciente, 
colocando o sobre o 
antígeno, para permitir a 
formação do complexo 
antígeno-anticorpo;
Lavagem para retirada 
dos anticorpos não 
ligados;
Incubação com o 
anticorpo conjugado, 
para ver se houve 
reação com os 
anticorpos específicos 
para com o antígeno;
Observação em 
microscópio de 
fluorescência.
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA
RESULTADOS:
Os resultados dos 
diagnósticos da IFD, ajudam 
na biópsia de pele nas 
diferentes dermatoses 
bolhosas;
auxiliando na revelação de 
doenças cutâneas tais 
como: pênfigos, penfigóide
bolhoso e o cicatrial e 
dermatite herpetiforme.
Os resultados dos 
diagnósticos da IFI são 
utilizados na detecção de 
doenças tais como Lúpus 
Eritenatoso sistêmico, 
Doença de chagas, Aids e 
as Hepatites.
IFI - Dermatoses bolhosas
IFI - Pênfigo paraneoplástico
IFD - Lúpus eritimatoso
IFD – Penfigoide bolhoso
OBRIGADO!
❖ Yasmin Muniz
❖ Danielle Peres
❖ Pamela Cupertino
❖ João Claudio
❖ Antonio Rubens
❖ Giovana Sangi
GRUPO: