RESUMO (IMUNOFLUORESCENCIA)

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A tecnica se baseia na ligação covalente de um 
complexo antigeno-anticorpo, a moleculas 
reveladoras (fluorocromos) onde esses 
absorvem a luz em comprimento de onda baixo 
(Luz Azul) e emitem um comprimento de onda 
com maior energia (luz verde) 
 
 
Fluoroimunoensaio 
 
Quando os componentes marcados são o 
antígeno ou uma anti-imunoglobulina 
(anti-Ig) para a pesquisa de anticorpo na 
amostra. 
 
Imunofluorimetria 
 
Ensaios em que o anticorpo é marcado para 
a pesquisa e a dosagem quantitativa de 
moléculas antigênicas na amostra. 
 
 Marcador: Isotiocianato de fluoresceína 
(FLUOROCROMOS): 
Substância que absorvem luz ultravioleta e 
emtitem luz visível, ou seja, ficam 
fluorescentes. 
 
 
 
 
IMUNOFLUORESCENCIA 
DERETA 
 
 
 Detecções de microorganismos 
em secreção, unrina, fezes, cortes de tecido, 
etc.
 Fenotipagem de células tumorais 
 Bacteriologia, identificação do streptococcus 
do Grupo A. 
IMUNOFLUORESCENCIA 
iNDERETA 
 
Essa técnica e utilizada para 2 anticorpos, um 
anticorpo primário (anticorpo monoclonal) e 
outros secundário anti-imunoglobulina (Anti-
Ig). A anti-Ig e marcado com fluorocromo 
formando um conjugado, que detectam 
anticorpos que estão ligados a anticorpos 
celulares: 
 
Imunofluorescência 
 
 
 
 
 
 
 
Leitura em 
Nicroscópio de 
Fluorescência 
Essa técnica e utilizada para 
detecção do antígeno em 
células ou tecidos. È colocado 
um anticorpo que se conjuga 
ao Fluorocromo. 
Onde o conjugado se fixa ao 
antígeno, formando um 
imunocomplexo esável. 
O antígeno e detectado 
diretamente pelo anticorpo. 
 
(Onde o antígeno 
e detectado 
indiretamente 
pelo anticorpo) 
 
 
 
 Diagnóstico sorológico de 
diversas doenças infecciosas: Doença de 
Chagas, AIDS, hepatites e complexos em 
doenças auto-imunes. 
 
 
FLUORESCENCIA POLARIZADA 
 
A polarização da fluorescência é o produto 
da reação entre: A orientação molecular e a 
absorção e emição de flurescência do 
flurocromo presente em solução. 
 
Onde, se o fluorocromo está ligado a 
molécula pequena, a polarização e mantida 
e quando ela não se liga, a polarização e 
desfeita. 
 
 
PLUERESCÊNCIA POLARIZADA (LIGAÇÃO 
COMPETITIVA): 
 Quando a antígeno na amostra: Os Ag se 
ligam ao Ac/ o marcador não se liga ao AC, 
emitindo baixa luminosidade. (F. 
polarizada/ Sem luz/ caracteriza se um teste 
positivo) 
 
 Quando NÂO antígeno: O Ac se liga ao 
Fluorocromo emitindo luz. (F. não 
polarizado/ caracteriza se teste Negativo) 
 
 
 
CITOMETRIA DE FLUXO 
 
E uma técnica utilizada para analisar células 
e partículas microscópicas, permitindo 
caracterizar tamanho relativo e 
complexidade interna de 0,2 A 100u, 
emitindo vesículas e organelas. 
 Utiliza se o marcador FLUOROCROMO; 
 
Pode ser utilizada para detecção de 
moléculas em solução (proteínas, DNA, 
RNA) pelo uso de partículas recobertas de 
anticorpos específicos para tais moléculas 
 
 
 
 Estudo de marcadores para diagnóstico e 
prognóstico de Leucemias e Linfomas. 
 Monitoramento de contagem de 
linfócitos TCD4+ de pacientes com HIV + 
 Detecção da produção de moléculas em 
soluções, como citocinas. 
E um processo automático (equipamento), 
onde a maioria dos Fluorocromos estão 
conjugados a antígenos monoclonais 
destinados á imunofenotipagem dos 
elementos dos elementos celulares, 
podendo identificar o fenótipo dessasd 
células, ou seja suas características. 
Existem 2 tipos de equipamentos utilizados: 
 C/ marcado de Fluorescência (limitada); 
 Acoplado com Espectrometria de massa. 
 
Nessa técnica e possível por exemplo 
identificar os diferentes tipos de células de 
acordo com suas características, assim como 
apresentado na imagem: 
Onde se utilizou um conjugado 
Fluorocomo-anticorpo CD19, que irá marcar 
os linfócitos B (que possui CD19 em sua 
estrutura). 
Conjugado Fluorocromo-anticorpos CD3, 
marcando linfócitos T (que possui CD3 em 
sua estrutura). 
Podendo assim diferenciá-los 
Outra aplicação: 
Avaliação da Proliferação celular por 
Citometria de Fluxo: 
 
 
IMUNO-HISTOQUMICA 
 
E uma técnica que utiliza o anticorpo com 
um marcador especifico, que capaz de ligar 
a um antígeno especifico, que se deseja 
identificar. 
Utilizado para detectar antígenos em 
amostras de tecido biopsiado – De forma 
Qualitativa. 
Segue os princípios parecidos com os das 
reações de imunofluoresecência e dos 
ensaios de ELISA. 
 
 
 
 
 Requisitos da técnica: 
 O antígeno deve permanecer no seu lugar 
original, insolúvel e disponível. O 
Anticorpo deve reconhecer o Antigeno, se 
ligando a ele: 
 
 Conhecer os elementos teciduais de 
ligação do antígeno: 
 
 Conhecer a sequência de ligação Ag-Ac, 
além de conhecer as características do 
Anticorpo: 
 
 Deve ser utilizado um marcador intenso 
para visualização desses componentes. 
Esses são: Marcadores Enziamaticos, 
Fluorescentes, Metálicos ou Radioativos. 
 
1°Passo: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2°Passo: 
Processos seguintes e análises: