INFLUÊNCIA DOS FATORES ABIÓTICOS NA COMPOSIÇÃO

Prévia do material em texto

Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4050S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
INFLUÊNCIA DOS FATORES ABIÓTICOS NA COMPOSIÇÃO
QUÍMICA DOS ÓLEOS ESSENCIAIS
Lilia Aparecida Salgado de Morais
Embrapa Meio Ambiente, Rodovia SP 340, Km 127,5 s/n, Bairro Tanquinho Velho, Jaguariúna – SP; CEP:13820-000
e-mail:lilia@cnpma.embrapa.br
RESUMO
Os óleos essenciais constituem um dos
mais importantes grupos de matérias primas
para as indústrias de alimentos, farmacêutica,
perfumaria e afins. São constituídos por uma
mistura complexa de diversas classes de
substâncias, dentre elas os fenilpropanóides,
mono e sesquiterpenos, pertencentes ao
metabolismo secundários das plantas. O
metabolismo secundário por sua vez pode ser
influenciado, dentre outros, por fatores
genéticos, climáticos (temperatura,
intensidade de luz, efeito sazonal, etc.) e
edáficos. Observa-se que, grande parte das
espécies popularmente utilizadas, encontra-
se próxima ao estado silvestre, mantendo forte
interação com o ambiente. Informações sobre
o efeito de condições ambientais no
MORAIS LAS. 2009. Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais. Horticultura Brasileira 27: S4050-
S4063.
metabolismo secundário de plantas provêm
principalmente de esforços da pesquisa para
maximizar a produção de constituintes ativos
de espécies medicinais e aromáticas. Como
aplicação prática, avanços no sentido de
compreender a influência dos fatores
ambientais na regulação de biossíntese de
metabólitos secundários, podem contribuir
para um aumento na produção de compostos
de interesse nestas espécies. Neste artigo
será abordada a ação de alguns fatores
abióticos no rendimento e composição de
óleos essenciais, com base nos dados da
literatura, sem a pretensão de esgotar este
extenso tema.
PALAVRAS-CHAVE: sazonalidade, estresse
hídrico, nutrição, época de coleta, plantas
medicinais e aromáticas.
INTRODUÇÃO
Óleos essenciais são misturas complexas de substâncias voláteis, lipofílicas, com baixo
peso molecular, geralmente odoríferas e líquidas, constituídos na maioria das vezes, por
moléculas de natureza terpênica. Frequentemente apresentam odor agradável e marcante.
São freqüentemente extraídos das partes vegetais através de arraste à vapor d’ água,
hidrodestilação ou expressão de pericarpo de frutos cítricos, porém há outros métodos de
extração como a enfleurage ou enfloração, extração por CO
2
 supercrítico (muito utilizado na
indústria) e por solventes orgânicos apolares (não apresentam valor comercial).
Em temperatura ambiente apresentam aspecto oleoso, tendo como principal
característica a volatilidade. Isto os diferencia dos óleos fixos, que são misturas de substâncias
lipídicas, geralmente provenientes de sementes (e.g.: óleo de rícino, manteiga de cacau e óleo
de linhaça). Apresentam-se geralmente incolores ou levemente amarelados, com sabor ácido
e picante, pouco estáveis em presença de luz, calor e ar, além de serem pouco solúveis em
água (Simões & Spitzer, 1999; Saito & Scramin, 2000).
4051Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
A composição química dos óleos essenciais é determinada por fatores genéticos, porém,
outros fatores podem acarretar alterações significativas na produção dos metabólitos
secundários. De fato, os metabólitos secundários representam uma interface química entre as
plantas e o ambiente. Os estímulos decorrentes do ambiente, no qual a planta se encontra,
podem redirecionar a rota metabólica, ocasionando a biossíntese de diferentes compostos.
Dentre estes fatores, podem-se ressaltar as interações planta/ microrganismos, planta/ insetos
e planta/ planta; idade e estádio de desenvolvimento, fatores abióticos como luminosidade,
temperatura, pluviosidade, nutrição, época e horário de coleta, bem como técnicas de colheita
e pós – colheita. É válido ressaltar que estes fatores podem apresentar correlações entre si,
não atuando isoladamente, podendo exercer influência conjunta no metabolismo secundário.
Em estudos de campo e com plantas anuais, os efeitos da sazonalidade podem ser confundidos
com alterações metabólicas, sob controle do processo de desenvolvimento hormonal,
controlado pela planta, devendo assim ser considerados em conjunto. A interferência de alguns
fatores abióticos no rendimento e na composição dos óleos essenciais será descrita a seguir.
TEMPERATURA E LUMINOSIDADE:
A temperatura e a luminosidade apresentam papel relevante na fotossíntese, pois a
interação destes fatores garante um ambiente ideal para o processo fisiológico (Souza et al.,
2008). Apesar de as espécies terem se adaptado ao seu habitat natural, os vegetais são
capazes de resistir a variações de temperatura. Estas variações são responsáveis pelas
alterações na produção de metabólitos secundários. Os óleos essenciais, na maioria das
vezes, apresentam um aumento em seu teor quando as plantas produtoras se encontram em
ambientes com temperatura elevada, porém, em dias muito quentes, pode-se observar perda
excessiva dos mesmos.
A intensidade luminosa é um fator que influencia a concentração bem como a composição
dos óleos essenciais. Como exemplo, o desenvolvimento dos tricomas glandulares (estruturas
vegetais que biossintetisam e armazenam o óleo essencial) de O. basilicum e T. vulgaris são
processos dependentes de luz.
Folhas de Mentha piperita (hortelã) apresentaram como compostos majoritários do óleo
essencial o mentol, a mentona e apenas traços de mentofurana, quando as plantas foram
submetidas a dia longo. Em dias curtos, o constituinte do óleo essencial foi a mentofurana,
composto quase ausente em dias longos (Voirin et al., 1990).
Hay & Svoboda (1993) definem tricomas glandulares como apêndices epidérmicos que
ocorrem em vários órgaos vegetais. Citam, na mesma obra, que os tricomas são responsáveis
pela síntese e armazenamento dos compostos terpênicos.
A radiação solar intervém diretamente sobre o crescimento e o desenvolvimento da
planta, e indiretamente, pelos efeitos no regime térmico, sendo fundamental à produção de
fitomassa.
É igualmente importante no condicionamento da evaporação e da
evapotranspiração. Tanto a temperatura do ar como a do solo, afetam os processos de
crescimento e de desenvolvimento para as plantas. Cada germoplasma apresenta limites
térmicos mínimos, máximos e ótimos, para cada estádio de desenvolvimento (fenologia)
(Ortolani & Camargo, 1987).
Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4052S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
A maior produção de metabólitos secundários sob altos níveis de radiação solar são
explicadas devido ao fato de que as reações biossintéticas são dependentes de suprimentos
de esqueletos carbônicos, realizados por processos fotossintéticos e de compostos energéticos
que participam da regulação dessas reações (Taiz & Zeiger, 2004).
SAZONALIDADE
A composição química e o teor de óleo essencial pode sofrer alterações durante as
estações do ano. Colheitas de O. gratissimum realizadas na Índia, durante a estação úmida e
quente, proporcionaram incremento na produção de fitomassa, quando comparadas às
colheitas realizadas no período mais frio e seco (Choudhury et al., 1986). Estudos realizados
por Czepac (1996), nos quais avaliaram-se as freqüências de corte de Mentha arvensis,
demonstraram que os menores rendimentos de fitomassa foram obtidos nos cortes efetuados
no inverno. Pesquisas avaliando o efeito da sazonalidade associada à época de colheita na
produção de fitomassa de L. alba, destacaram que os maiores rendimentos foram obtidos nos
cortes realizados na primavera e no verão, sendo os menores obtidos no corte realizado no
inverno (Castro, 2001).
Em estudos realizados com Salvia officinalis, no qual se avaliou a influência da
sazonalidade no rendimento e na composição química do seu óleo essencial, Putievsky et al.
(1986) concluíramque o maior rendimento de óleo essencial foi obtido no primeiro ano de
cultivo, em corte realizado no verão. Com relação à composição do óleo essencial, este
apresentou maior teor de constituintes majoritários (tujona e cânfora), no segundo ano de cultivo,
em corte realizado na primavera.
Avaliando os efeitos da evolução sazonal na composição do óleo essencial de Virola
surinamensis, Lopes et al. (1997), concluíram que não houve variação no rendimento do óleo
essencial nas diferentes estações do ano e horários de coleta avaliados, porém, a proporção
relativa dos componentes do mesmo alterou significativamente.
Amostras de folhas de O. selloi, cultivadas em Botucatu-SP, colhidas em junho de 2000
e janeiro de 2001, apresentaram como compostos majoritários o metilchavicol (24,14% e
29,96%), cis-anetol, (3,95% e 2,96%) e trans-anetol, com proporção relativa de 45,42% e
58,59% respectivamente (Moraes et al., 2002).
Chaves (2002) avaliou o efeito da época de corte (outono, inverno, primavera e verão)
na composição do óleo essencial de folhas e inflorescências de alfavaca-cravo (Ocimum
gratissimum).
Os resultados obtidos demonstraram que houve interferência na composição do óleo
essencial em função da variação climática, apresentando as folhas como componente
majoritário, o eugenol no verão, e o b - selineno e trans-cariofileno no inverno. As
inflorescências apresentaram o 1,8-cineol como principal composto, com níveis baixíssimos
de eugenol, sendo o teor do primeiro menor no outono.
Bezerra et al. (2008), observaram alterações nos teores de acetato de trans-pinocarveíla,
acetato de mirtenila e b-pineno, componentes majoritários do óleo essencial de macela,
apresentaram alterações quando extraídos de capítulos florais provenientes de diferentes
épocas de colheita.
4053Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
Ao destilarem folhas de Eucalyptus citriodora Hk. durante um ano, a intervalos mensais,
Kapur et al. (1982) verificaram que a produção de óleo essencial foi mínima durante os meses
de inverno (junho e julho), mas após as monsões aumenta gradualmente e permanece assim
até os meses de setembro, outubro e novembro e alcança o máximo de produção durante os
meses mais quentes (dezembro a fevereiro). Observaram que houve um pequeno declínio nos
meses de março e abril. O teor de citronelal foi baixo em maio e junho, mas permaneceu alto
nos outros meses do ano.
Silva et al. (2005), com o objetivo de verificar a influência da época e do horário de
coleta no rendimento e composição do óleo essencial de manjericão (Ocimum basilicum),
realizaram cortes às 8h e 16 h, em agosto de 1999 e janeiro de 2000. Os autores concluíram
que a época de colheita influenciou o teor final do óleo essencial, apresentando o óleo essencial
colhido em Janeiro maior rendimento (2,26%) que o óleo essencial colhido em Agosto (1,06%).
Não houve influência do horário de coleta em relação à composição do óleo essencial, que
apresentou como compostos majoritários o eugenol e o linalol, porém, observou-se redução
do teor de linalol no corte efetuado em janeiro (21,24%) quando comparado ao corte de agosto
(25,03%).
ESTÁDIO DE DESENVOLVIMENTO
A idade e o estádio de desenvolvimento da planta podem influenciar não apenas a
quantidade total de metabólitos secundários produzidos, mas a proporção relativa destes
compostos. Tecidos mais jovens geralmente apresentam grande atividade biossintética,
aumentando a produção de vários compostos, dentre estes, os óleos essenciais.
Silva et al. (2003) avaliaram a relação entre o estádio de desenvolvimento e o teor de
óleo essencial em plantas de Ocimum basilicum. Foram realizadas duas colheitas, sendo uma
aos cinco e a outra aos dez meses após o plantio. Os autores relataram maior produtividade
na colheita realizada aos dez meses após o plantio.
Nemeth et al. (1993) estudando espécies selvagens de Achillea crithmifolia sob diferentes
condições ambientais e fases de desenvolvimento da espécie, verificaram que a proporção
de cânfora no óleo essencial decresceu à medida que a planta avançou nas suas fases
fenológicas, quando a mesma se encontrava em ambiente quente ou frio. Para 1,8-cineol, o
comportamento observado foi o contrário. Tavares et al. (2005) analisaram o óleo essencial de
três quimiotipos de Lippia alba, provenientes de regiões diferentes, cultivados em condições
semelhantes, avaliando-se, dentre outros fatores, a influência do período reprodutivo (floração)
no rendimento e composição química dos óleos essenciais. A extração foi realizada quando
as plantas se encontravam em crescimento vegetativo e durante a floração.
A análise dos óleos essenciais mostrou que não houve variação na composição do
óleo essencial com relação aos componentes majoritários (geranial e neral) nos dois estádios
de desenvolvimento da planta (análise qualitativa). Já a análise quantitativa destes elementos
mostra que a percentual de citral (geranial + neral) carvona e linalol sofreu uma ligeira diminuição
durante a época de floração, observando-se aumento no percentual do limoneno. Os autores
concluíram que a extração de óleo essencial de L. alba para a obtenção de citral, carvona e
linalol deve ser efetuada em plantas em fase de crescimento vegetativo, estádio em que o
rendimento do óleo e os teores dos componentes majoritários são maiores.
Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4054S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
Sanda et al. (2001) verificaram que o rendimento de O. gratissimum em folhas frescas
permaneceu relativamente constante, em torno de 0,16 %, durante 05 meses de cultivo. Até os
03 meses p-cimeno (23,0 %) foi o principal constituinte, enquanto nos dois últimos meses timol
(27-30 %) foi o constituinte majoritário.
Para O. basilicum até o 4
o
 mês o teor de óleo foi 0,26 %, mas decresceu drasticamente
para 0,14 %, do último mês de estudo. O principal constituinte foi o estragol que permaneceu
praticamente constante durante a pesquisa (81-83 %).
HORÁRIO DE COLETA
Ao longo do dia, pode-se observar que o aroma característico de cada planta torna-se
mais acentuado, sendo possível acreditar que a concentração de óleos essenciais seja maior
naquele período, ou que esteja ocorrendo alteração na proporção relativa entre os componentes
deste mesmo óleo essencial. Assim, o horário de coleta das plantas torna-se um aspecto
relevante na produção de óleos essenciais.
A colheita torna-se o ponto crítico, pois se faz necessário que se defina o momento ideal
para a mesma. Todas as pesquisas na área de metabólitos secundários de plantas medicinais
deveriam ter como o principal objetivo, coincidir o momento de maior expressão de princípio
ativo, neste caso, dos óleos essenciais, com o momento de maior rendimento de fitomassa,
obtendo-se assim, o tão esperado sucesso (Mattos, 1996).
Em ensaios realizados com Melissa officinalis em dois horários de coleta, Blank et al.
(2005) concluíram que houve inversão no percentual de compostos majoritários do óleo
essencial, obtendo-se 49,0% de neral e 34,4% de geranial às 9h, e 34,1% e 50,8% às 15h
para neral e geranial, respectivamente. Esta alteração na composição do óleo essencial pode
ocasionar respostas diferenciadas em ensaios com fitopatógenos, pois, o composto
responsável provavelmente pela atividade biológica, pode ter sua concentração no óleo
essencial alterada, devido a coletas em horários diferentes.
Nascimento et al., (2006) verificaram o efeito do horário de corte sobre o rendimento do
óleo essencial do capim-limão (Andropogon sp.), bem como sobre o teor de citral, componente
majoritário do seu óleo essencial.
Os horários de corte pesquisados foi 7, 9, 11, 13, 15 e 17 horas. Houve diferença
estatística entre os horários de corte, sendo o corte realizado às 7 h o que apresentou maior
rendimento (5,06 mL/kg). O maior percentual de citral ocorreu por ocasião do corte realizado
às 13 horas(91,7%), porém, este é o horário de menor produção de óleo essencial.
Carvalho-Filho et al. (2006) investigaram a interferência do horário de coleta (8h, 12h e
16h), associado à diferentes temperaturas de secagem (40° C, 50°C e 60°C), na composição
do óleo essencial de folhas de manjericão (Ocimum basilicum cultivar Fino Verde). Os
compostos majoritários deste óleo essencial são linalol e eugenol.
Foi observado um aumento na concentração de linalol proveniente do óleo essencial
extraído do manjericão colhido às 16 horas e seco a 40?C, porém, a maior concentração de
eugenol foi observada no óleo essencial extraído de folhas frescas, colhido às 16 horas (Tabela
1). Estas alterações na composição química do óleo essencial podem ser explicadas pela
conexão entre a variação de temperatura com a atividade metabólica das plantas.
4055Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
ÁGUA
Por ser a água essencial à vida e ao metabolismo das plantas, pressupõe-se que em
ambientes mais úmidos a produção de metabólitos secundários seja maior, Porém, isto nem
sempre ocorre.
O fator hídrico afeta significativamente o crescimento e desenvolvimento da planta como
um todo. A freqüência e a intensidade do estresse hídrico constituem fatores de suma
importância para a limitação da produção agrícola mundial (Ortolani & Camargo, 1987). Sua
falta e seu excesso causam efeitos desastrosos no desenvolvimento vegetal (Haag, 1987).
Vários fatores fisiológicos como abertura e fechamento de estômatos, fotossíntese, crescimento
e expansão foliar podem sofrer alterações quando o vegetal é submetido a estresse hídrico, o
que pode gerar, conseqüentemente, alterações no metabolismo secundário.
As culturas consomem durante o seu ciclo de desenvolvimento um grande volume de
água, porém, 98% deste volume, apenas passa pela planta, perdendo-se posteriormente pelo
processo de transpiração (Haag, 1987).
Existem limites ótimos de umidade para o desenvolvimento da planta. A retirada de
água pelo sistema radicular pressupõe que, no equilíbrio hídrico do sistema solo-raiz, encontra-
se um dos problemas fundamentais da agricultura. O excesso de água no solo pode alterar
processos químicos e biológicos, limitando a quantidade de oxigênio e acelerando a formação
de compostos tóxicos à raiz. Por outro lado, a percolação intensa da água provoca a remoção
de nutrientes e inibição do crescimento normal da planta. Os excedentes hídricos, embora
importantes, causam menos problemas que a seca. A deficiência hídrica, caracterizada por
diferentes formas e intensidades, é a principal causa de perda de produtividade (Ortolani &
Camargo, 1987), porém, apresenta correlação direta na concentração de metabólitos
secundários, havendo relatos na literatura de que o estresse hídrico geralmente induz um
aumento na produtividade de alguns terpenoides.
Estudos realizados com o intuito de avaliar a influência do estresse hídrico sobre a
composição do óleo essencial de Ocimum basilicum demonstraram que, sob condições de
estresse, houve redução no rendimento de massa seca total, ocorrendo, porém, um rendimento
de óleo essencial duas vezes maior. Os componentes do óleo essencial apresentaram
alterações significativas, havendo redução no percentual de sesquiterpenos e aumento no
percentual de linalol e metilchavicol (Simon et al., 1992).
Em ensaios realizados em casa de vegetação com diferentes acessos de Polygonum
punctatum, Lopes et al. (2001) avaliaram a influência de regimes hídricos (ambiente úmido,
moderadamente úmido e seco) na produção de óleo essencial.
Os autores observaram maior rendimento do mesmo no ambiente seco que nos demais
ambientes. Este resultado demonstra que o aumento na biossíntese do óleo essencial pode
funcionar como resposta adaptativa ao estresse hídrico, relacionando-se alguma resposta
fisiológica às variações ambientais.
Um dos fatores relevantes na alteração do rendimento e composição química dos óleos
essenciais é a precipitação. Chuvas intensas e constantes podem resultar na perda de
substâncias hidrossolúveis presentes principalmente nas folhas e flores. Recomenda-se
aguardar aproximadamente três dias após o cessar das chuvas para realizar a coleta, para
que os teores de óleo essencial possam voltar ao normal.
Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4056S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
NUTRIÇÃO
De acordo com Corrêa Jr et al. (1994), Malavolta (1979) e Haag (1987), as plantas
superiores necessitam de energia solar, armazenadas na forma de compostos de energia,
como ATP e NADPH, CO
2
, água, e de nutrientes. Hoje em dia, são conhecidos dezessete
elementos essenciais ao crescimento dos vegetais, pois desempenham funções vitais no o
desenvolvimento das plantas, sendo estes o carbono, o oxigênio e o hidrogênio, provenientes
do ar e da água, e os nutrientes: nitrogênio, fósforo, potássio, cálcio, magnésio e enxofre
(macronutrientes), boro, cloro, cobre, cobalto, ferro, manganês, molibdênio e zinco
(micronutrientes). Todos estes nutrientes provém do solo, com exceção do nitrogênio, que,
primeiramente, passa pelo processo de fixação. As funções de cada nutriente nas plantas
estão descritas na Tabela 2.
Segundo Martins et al. (1995), dentre todos os fatores que podem interferir nos princípios
ativos de plantas, a nutrição é um dos que requerem maior atenção, pois o excesso ou a
deficiência de nutrientes pode estar diretamente correlacionado à variação na produção de
substâncias ativas. Alguns exemplos destas variações foram descritos pelos autores: o déficit
de nitrogênio pode provocar redução no teor de alcalóides em lobélia (Lobellia inflata), sendo
observada ação inversa para papoula (Papaver somniferum) e beladona (Atroppa belladona),
as quais apresentaram aumento no teor de morfina e atropina. O fósforo também contribui
para o aumento da concentração de atropina, assim como do teor de óleos essenciais em
coentro (Coriandrum sativum) e funcho (Foeniculum vulgare), porém, o seu déficit no solo reduz
a concentração de cumarinas em chambá (Justicia pectoralis var stenophilla), tendo como
efeito mais prejudicial, a redução na produção de fitomassa, gerando uma redução na produção
global do princípio ativo. Corrêa Jr. et al. (1994), afirmam que, a deficiência de magnésio pode
causar uma sensível diminuição na formação de princípios ativos de um modo geral, devido à
diminuição da clorofila e, conseqüentemente, da taxa de fotossíntese.
Avaliando a influência da nutrição mineral no rendimento e composição do óleo essencial
de Ocimum basilicum (manjericão), Coriandrum sativum L. (coentro), Antethum graveolens L.
(endro) e Mentha piperita L. (menta), Hornok (1983), relatou a ocorrência de variações em
função dos quatro níveis de NPK utilizados (N: 0; 80; 160 e 240 kg/ ha; P: 0; 50; 100 e 150 kg/
ha; K: 0; 60; 120 e 180 kg/ha). Com o aumento do nível de fósforo, houve um aumento no
teor de óleo essencial de menta e manjericão e redução no teor de óleo essencial e de
fitomassa de endro. O aumento dos níveis de nitrogênio também incrementou o óleo essencial
da menta e do manjericão, ocorrendo, porém, redução no percentual de mentol e linalol. Ainda
em relação aos níveis de nitrogênio, os autores observaram aumento na produção de biomassa
verde de endro e coentro, mas não de sementes. Houve incremento nos teores de mentol (em
menta), linalol e estragol (no manjericão), à medida que os níveis de potássio foram elevados.
De acordo com Paulus et al. (2008), plantas de menta japonesa (Mentha arvensis) em
cultivo hidropônico, submetidas a diferentes concentrações da solução nutritiva, apresentaram
diferentes teores de mentol e mentona, compostos majoritários do óleo essencial. Isto demonstra
que estes compostos são diretamente influenciados pela nutrição mineral.
Prakasa Rao et al. (2000) avaliaram o efeito de doses de nitrogênio (0; 50 e 100kg N/
ha) no rendimento e na qualidadedo óleo essencial de Tagetes minuta L. Maior rendimento de
fitomassa aérea foi obtido com a maior dose de nitrogênio aplicada. Quando a aplicação do
4057Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
nitrogênio ocorreu no momento em que as plantas se encontravam em pleno florescimento,
houve discreta redução na concentração do óleo essencial. Notou-se aumento no percentual
de cis - b-ocimeno, com o aumento da idade da planta em todos os tratamentos, sendo maior
(26%) no tratamento sem aplicação de nitrogênio nas plantas que se encontravam em fase de
produção de sementes (mais velhas). Houve diferença significativa, para a composição do
óleo apenas quando as plantas se encontravam no início da floração, sendo a maior dose de
dihidrotagetona (33,6%) observada no tratamento com ausência de nitrogênio e, a maior
concentração de cis - b - ocimeno (8,5%), observada na maior dose de nitrogênio aplicada.
PÓS- COLHEITA
A composição do óleo essencial sofre alterações durante os processos de colheita e
pós-colheita. Estas alterações ocorrem devido a conversões espontâneas, que ocorrem
continuamente, acarretando mudanças na composição do óleo essencial. Com base nestes
fatos, a comercialização torna-se um problema, já que a composição do óleo essencial deve
ser pré-estabelecida como demanda de mercado.
Carvalho-Filho et al. (2006), avaliaram o rendimento e a composição do óleo essencial
de Ocimum basilicum cultivar Fino Verde (manjericão) submetido a diferentes temperaturas
de secagem. Folhas e inflorescências foram secas em estufa com circulação de ar forçada,
em período de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 13 e 16 dias após a colheita, bem como da planta
fresca. A extração do óleo essencial foi feita por hidrodestilação em aparelho tipo Clevenger.
A composição relativa do óleo essencial de folhas e inflorescências de manjericão foi
diferente durante o processo de secagem. A maior concentração de linalol, composto majoritário,
foi obtida no quinto dia de secagem (86,8%), quando comparada à composição do óleo
essencial extraído de material fresco (45,2%) (Tabela 3). Nas inflorescências, a maior
concentração do linalol ocorreu no décimo primeiro dia (92,6%), contrastando com o material
fresco (80,7%), o menor número de compostos do óleo essencial de folhas foi observado a
partir do quinto dia de secagem. Não observaram a presença de cânfora na composição do
óleo essencial de inflorescências de O. basilicum cultivar Fino Verde, sendo este um fato
importante, já que este composto é importante na classificação aromática desta espécie.
Guimarães et al. (2008) investigaram a estabilidade do óleo essencial de Cymbopogon
citratus perante a luz e a temperatura, visando condições de armazenamento capazes de manter
a qualidade final do óleo essencial. Inicialmente, foram avaliados os teores de citral e mirceno,
compostos majoritários do óleo essencial de C. citratus, presentes em óleos essenciais
submetidos a diferentes temperaturas (geladeira - 6°C ± 1; temperatura ambiente - 18°C ; e
estufa – 37,5°C ± 2,5) e presença e ausência de luz. As avaliações foram realizadas a cada
quinze dias, por um período de 120 dias após a extração. Os componentes citral e mirceno
sofreram degradação durante o período de armazenamento, tanto em presença quanto em
ausência de luz. Com relação à temperatura, esta contribuiu para a degradação do mirceno,
não se observando mesmo para o citral. Isto demonstra que este composto não sofre influência
da temperatura no processo de degradação. Os autores concluíram que, por ser o citral o
composto majoritário do óleo essencial de C. citratus, e de maior interesse pela indústria, o
mesmo deve ser armazenado ao abrigo da luz, não necessitando porém de temperaturas
muito baixas (Guimarães et al. 2008).
Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4058S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
De acordo com Solomons (2001), em presença de luz, compostos orgânicos podem
gerar radicais devido à quebra homolítica de reações químicas, que podem reagir com outras
moléculas, gerando novos radicais, bem como com o oxigênio atmosférico, gerando peróxidos,
hiper-peróxidos, que são compostos instáveis capazes de serem transformados em novos
radicais ainda mais reativos.
CONSIDERAÇÕES FINAIS
A alteração dos compostos majoritários nos óleos essenciais, seja por fatores genéticos,
técnicos (coleta, estabilização e armazenamento), bióticos ou abióticos, pode influenciar
diretamente na qualidade e, consequentemente, nos resultados de tratamentos e de testes
biológicos sobre patógenos humanos ou fitopatógenos. Pode-se observar que alguns autores
relatam divergência entre resultados provenientes de ensaios realizados com as mesmas
espécies vegetais e patógenos. Vale ressaltar que os produtos químicos aos quais foram
submetidos os diferentes isolados testados, também podem gerar diferenças nas respostas.
Para minimizar estes equívocos nos resultados e evitar que dados não conclusivos sejam
publicados, o ideal é que, juntamente com os ensaios para verificação da atividade biológica,
seja realizada a análise química do(s) óleo(s) essencial(ais) avaliado(s), para que se possa
obter a caracterização fitoquímica deste(s). Assim, pode-se conhecer qual o composto
majoritário do óleo essencial, bem como a composição química como um todo, responsável
por conferir a ação positiva do óleo essencial sobre determinado agente patogênico. Estes
resultados mais concretos evitam que plantas com grande potencial de uso no controle de
doenças de culturas relevantes possam ser descartadas ou, que plantas com pouco ou nenhum
potencial, virem alvo de estudos desnecessariamente. A identificação destas interferências,
bem como da relação entre as mesmas, favorecerá a obtenção de matérias-primas vegetais
de melhor qualidade, o que possibilitará a obtenção de óleos essenciais com composição
química mais constante, acarretando resultados de atividades biológicas mais confiáveis.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
BLANK AF; FONTES SM; OLIVEIRA AS; MENDONÇA MC; SILVA-MANN R.; ARRIGONI-
BLANK MF. 2005. Produção de mudas, altura e intervalo de corte em melissa. Horticultura
Brasileira 3: 780-784.
BEZERRA AME; MEDEIROS-FILHO S; OLIVEIRA, LDM; SILVEIRA ER. 2008. Produção e
composição química da macela em função da época de colheita. Horticultura Brasileira 26: 26-29.
CARVALHO FILHO JLS; ALVES PB; EHLERT PAD; MELO AS; CAVALCANTI SCH; ARRIGONI-
BLANK MF; SILVA-MANN R; BLANK AF. 2006. Influence of the harvesting time, temperature
and drying period on basil (Ocimum basilicum L.) essential oil. Revista Brasileira de
Farmacognosia 16: 24-30.
CASTRO DM. 2001. Efeito da variação sazonal, colheita selecionada e temperaturas de
secagem sobre a produção de biomassa, rendimento e composição de óleos essenciais de
folhas de Lippia alba (Mill.)N. E. Br ex Britt. & Wilson (Verbenaceae). Botucatu: UNESP. 132 p.
(Tese Doutorado).
4059Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
CHAVES FCM. 2002. Produção de biomassa, rendimento e composição de óleo essencial
de alfavaca-cravo (Ocimum gratissimum L.) em função de adubação orgânica e épocas de
corte. Botucatu: UNESP. 144 p. (Tese Doutorado).
CHOUDHURY SM; BORDOLOI DN. 1988. Effect of sowing on the growth, yield and oil quality
of Ocimum gratissimum Linn. Indian Perfum 30: 25-60.
CORRÊA-JUNIOR C; MING LC; SCHEFFER MC. 1994. Cultivo de plantas medicinais,
condimentares e aromáticas. 2
a
. ed. Jaboticabal: FUNEP. 162 p.
CZEPAC MP. 1996. Produção de óleo bruto e mentol cristalizável em oito freqüências de colheita
da menta (Mentha arvensis L). Piracicaba, ESALQ – USP. 45 p. (Dissertação Mestrado).
EVANS WC. 1990. Pharmacognosy. 14. ed. London: WB Saunders.
GUIMARÃES LGL; CARDOSO MGC; ZACARONI LM; LIMA RK; PIMENTEL FA; MORAIS AR.
2008. Influência da luz e da temperaturasobre a oxidação do óleo essencial de capim-limão
(Cymbopogon citratus (D.C.) STAPF). Química Nova 31: 1476-1480.
HAAG HP. 1987. A nutrição mineral e o ecossistema. In: CASTRO, R. C. et al. Ecofisiologia da
produção agrícola. Piracicaba: Associação Brasileira para Pesquisa da Potassa e do Fosfato.
p. 49-69.
HAY RKM; SVOBODA KP. 1993. Botany. In: HAY RKM.; WATERMAN PG.. Volatile oil crops:
their biology, biochemistry and production. Essex: Longman Group. p. 5-19.
HORNOK L. 1983. Influence of nutrition on the yield and content of active compounds in some
essential oil plants. Acta Horticulturae 132: 239-247.
KAPUR KK; VASHIST VN; ATAL CK. 1982. Variability and utilization studies on Eucalyptus
citriodora Hook. grown in India. In: ATAL CK; KAPUR BM. (eds). Cultivation and utilization of
aromatic plants. Jammu-Tawi: Regional Laboratory Council of Scientific and Industrial Research.
p. 603-606.
LOPES NP; KATO MJ; ANDRADE EH; MAIA JGS; YOSHIDA MY. 1997. Circadian and seasonal
variation in the essential oil from Virola surinamensis leaves. Phytochemistry 6: 689-693.
LOPES RC; CASALI VWD; BARBOSA LCA; CECON PR. 2001. Influência de três regimes
hídricos na produção de óleo essencial em sete acessos de Polygonum punctatum Ell. Revista
Brasileira de Plantas Medicinais 3: 7-10.
MALAVOLTA E; VITTI G.C; OLIVEIRA SA. 1979. Avaliação do estado nutricional das plantas:
princípios e aplicações. 2. ed. rev. e atual. Piracicaba: POTAFOS. 319p.
MARTINS ER; CASTRO DM; CASTELLANI DC; DIAS JE. 1995. Plantas medicinais. Viçosa:
UFV, Imprensa universitária. 22p.
MATTOS JKA. 1996. Plantas medicinais: aspectos agronômicos. Brasília: Edição do autor.
51 p.
Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4060S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
MORAES LAS; FACANALI R; MARQUES MOM; MING LC; MEIRELES MAA. 2002.
Phytochemical characterization of essential oil from Ocimum selloi. Anais da Academia Brasileira
de Ciências 74:183-186.
NASCIMENTO IB; INNECCO R; MATOS SH; BORGES NSS; MARCO CA. 2006. Influência do
horário de corte na produção de óleo essencial de capim santo (Andropogum sp.). Revista
Caatinga 19: 123-127.
NÉMETH É; BERNÁTH J; HÉTHELYI É. 1993. Diversity in chemotype reaction affected by
ontogenetical and ecological factors. Acta Horticulturae 344:178-187.
ORTOLANI AA; CAMARGO MBP. 1987. Influência dos fatores climáticos na produção. In:
CASTRO RC et al. Ecofisiologia da produção agrícola. Piracicaba: Associação Brasileira para
Pesquisa da Potassa e do Fosfato. p. 71-81.
PAULUS D; MEDEIROS SLP; SANTOS OS; PAULUS E. 2008. Solução nutritiva para produção
de menta em hidroponia. Horticultura Brasileira 26: 61-67.
PRAKASA RAO EVS; PUTTANNA K; RAMESH S. 2000. Effect of nitrogen and harvest stage
on the yield and oil quality of Tagetes minuta L. in tropical India. Journal of Herbs, Spices &
Medicinal Plants 7: 19-24.
PUTIEVSKY E; RAVID U; DUDAI N. 1986. The influence of season and harvest frequency on
essential oil and herbal yields from a pure clone of sage (Salvia officinalis L.), grown under
cultivated conditions. Journal of Natural Products 29: 326-329.
SAITO ML; SCRAMIN S. 2000. Plantas aromáticas e seu uso na agricultura. Jaguariúna:
Embrapa Meio Ambiente. 48 p. (Série Documentos, n. 20).
SANDA K; KOBA K; AKPAGANA K; TCHEPANT T. 2001. Content and chemical composition
of the essential oil of Ocimum basilicum L and Ocimum gratissimum L. at different harvesting
dates after planting. Rivista Italiana EPPOS 31: 3-7.
SILVA F; SANTOS RHS; DINIZ ER; BARBOSA LCA; CASALI VWD; LIMA RR. 2003. Teor e
composição do óleo essencial de manjericão (Ocimum basilicum L.) em dois horários e duas
épocas de colheita. Revista Brasileira de Plantas Medicinais 6: 33-38.
SILVA F; SANTOS RHS; ANDRADE NJ; BARBOSA LCA; CASALI VWD; LIMA RR;
PASSARINHO RVM. 2005. Basil conservation affected by cropping season, harvest time and
storage period. Pesquisa Agropecuária Brasileira 40: 323-328.
SIMÕES CMO; SPITZER V. 1999. Óleos voláteis. In: SIMÕES CMO. et al. Farmacognosia: da
planta ao medicamento. Porto Alegre: Ed. Universidade-UFRGS; Florianópolis: Ed. da UFSC.
p. 387-415.
SIMON JE; REISS P; BUBENHEIM D; JOJY RJ et al. 1992. Water stress-induced
alterations in essential oil content and composition of sweet basil. Journal of Essential
Oil Research 4: 71-75.
4061Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
SOLOMONS TWG.. 2006. Química orgânica. 7ª. Ed. Rio de Janeiro: Editora Livros Técnicos e
Científicos. v.1.
SOUZA JRP; MORAIS H; CARAMORI PH; JOJANNSSON LAPS; MIRANDA LV. 2008.
Desenvolvimento da espinheira-santa sob diferentes intensidades luminosas e níveis de poda.
Horticultura Brasileira 26: 40-44.
TAIZ L; ZEIGER E. 2004. Fisiologia vegetal. 3ª ed. Rio de Janeiro: Ed. Artmed. 720 p.
TAVARES ES; JULIÃO LS; LOPES D; BIZZO HR; LAGE CLS; LEITÃO SG. 2005. Análise
do óleo essencial de folhas de três quimiotipos de Lippia alba (Mill.) N. E. Br.
(Verbenaceae) cult ivados em condições semelhantes. Revista Brasileira de
Farmacognosia 15: 1-5.
VOIRIN B; BRUN N; BAYET C. 1990. Effects of day length on the monoterpene composition of
leaves of M. x piperita. Phytochemistry 29: 749-755.
Tabela 1. Composição do óleo essencial de folhas de Ocimum basilicum cultivar Fino Verde coletado às 8, 12
e 16 horas e submetido a três temperaturas de secagem (40 °C, 50°C e 60°C).
Horário de coleta Linalol Eugenol
Folhas frescas 8 horas 42,7 29,4
12 horas 43,0 39,4
16 horas 45,2 41,2
Folhas secas a 40°C 8 horas 64,3 14,4
12 horas 60,1 13,75
16 horas 69,3 10,9
Folhas secas a 50°C 8 horas 62,7 14,0
12 horas 61,7 14,2
16 horas 60,5 15,1
Folhas secas a 60°C 8 horas 63,1 9,9
12 horas 59,6 10,4
16 horas 45,3 9,5
Fonte: Carvalho-Filho et al., 2006 (Adaptado)
Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009 4062S
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
Ta
b
el
a 
2.
 F
un
çã
o 
do
s 
m
ac
ro
 e
 m
ic
ro
nu
tr
ie
nt
es
 n
as
 p
la
nt
as
N
ut
rie
nt
e
F
un
çã
o
M
ac
ro
nu
tr
ie
nt
es
N
itr
og
ên
io
Im
po
rt
an
te
 n
o 
m
et
ab
ol
is
m
o 
co
m
o 
co
m
po
st
o.
 R
es
po
ns
áv
el
 p
el
o 
cr
es
ci
m
en
to
 d
a 
pa
rt
e 
aé
re
a 
(f
as
e 
ve
ge
ta
tiv
a)
F
ós
fo
ro
A
rm
az
en
am
en
to
 e
 tr
an
sf
er
ên
ci
a 
de
 e
ne
rg
ia
. R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
flo
ra
çã
o 
e 
fr
ut
ifi
ca
çã
o 
(f
as
e 
re
pr
od
ut
iv
a)
P
ot
ás
si
o
A
be
rt
ur
a 
e 
fe
ch
am
en
to
 d
os
 e
st
ôm
at
os
, s
ín
te
se
 e
 e
st
ab
ili
da
de
 d
e 
pr
ot
eí
na
s,
 re
la
çõ
es
 o
sm
ót
ic
as
 e
 s
ín
te
se
 d
e 
ca
rb
oi
dr
at
os
.
R
es
po
ns
áv
el
 p
el
o 
cr
es
ci
m
en
to
 d
o 
si
st
em
a 
ra
di
cu
la
r e
 re
si
st
ên
ci
a 
às
 d
oe
nç
as
.
C
ál
ci
o
A
tiv
aç
ão
 e
nz
im
át
ic
a,
 a
bs
or
çã
o 
de
 ío
ns
, f
or
m
aç
ão
 d
a 
pa
re
de
 c
el
ul
ar
 e
 p
er
m
ea
bi
lid
ad
e 
(m
an
ut
en
çã
o 
da
 in
te
gr
id
ad
e 
da
 m
em
br
an
a
pl
as
m
át
ic
a)
. R
es
po
ns
áv
el
 p
el
o 
cr
es
ci
m
en
to
 d
as
 ra
íz
es
 e
 p
el
a 
fe
cu
nd
aç
ão
.
M
ag
né
si
o
A
tiv
aç
ão
 e
nz
im
át
ic
a 
(c
o-
fa
to
r d
e 
vá
ria
s 
en
zi
m
as
),
 e
st
ab
ili
da
de
 d
os
 ri
bo
ss
om
os
, f
ot
os
sí
nt
es
e 
e 
fa
z 
pa
rt
e 
da
 c
om
po
si
çã
o 
da
 c
lo
ro
fil
a.
E
nx
of
re
G
ru
po
 a
tiv
o 
de
 e
nz
im
as
 e
 c
o-
en
zi
m
as
. R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
sí
nt
es
e 
da
 c
lo
ro
fil
a 
e 
ab
so
rç
ão
 d
o 
gá
s 
ca
rb
ôn
ic
o.
M
ic
ro
nu
tr
ie
nt
es
B
or
o
T
ra
ns
po
rt
e 
de
 c
ar
bo
id
ra
to
s 
e 
co
or
de
na
çã
o 
de
 fe
nó
is
. R
es
po
ns
áv
el
 p
el
o 
de
se
nv
ol
vi
m
en
to
 d
e 
ra
íz
es
, f
ru
to
s 
e 
se
m
en
te
s.
C
lo
ro
R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
de
co
m
po
si
çã
o 
da
 á
gu
a 
na
 fo
to
ss
ín
tese
.
C
ob
re
E
nz
im
as
 e
 fo
to
ss
ín
te
se
. R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
re
sp
ira
çã
o,
 s
ín
te
se
 d
a 
cl
or
of
ila
.
C
ob
al
to
R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
ab
so
rç
ão
 d
o 
ni
tr
og
ên
io
 n
a 
fix
aç
ão
 s
im
bi
ót
ic
a 
(F
ix
aç
ão
 d
e 
N
2)
Fe
rr
o
G
ru
po
 a
tiv
o 
em
 e
nz
im
as
 e
 tr
an
sp
or
ta
do
re
s 
de
 e
lé
tr
on
s.
 R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
re
sp
ira
çã
o,
 s
ín
te
se
 d
e 
cl
or
of
ila
 e
 fi
xa
çã
o 
do
 n
itr
og
ên
io
.
M
an
ga
nê
s
F
ot
os
sí
nt
es
e,
 m
et
ab
ol
is
m
o 
de
 á
ci
do
s 
or
gâ
ni
co
s.
 R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
ab
so
rç
ão
 d
o 
gá
s 
ca
rb
ôn
ic
o.
M
ol
ib
dê
ni
o
R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
fix
aç
ão
 d
o 
N
2 
e 
pe
la
 re
du
çã
o 
do
 N
O
3-
Z
in
co
E
nz
im
as
. R
es
po
ns
áv
el
 p
el
a 
pr
od
uç
ão
 e
 m
at
ur
aç
ão
 d
e 
se
m
en
te
s.
F
on
te
: M
al
av
ol
ta
 (1
97
9)
; C
or
rê
a 
Jr
. e
t a
l. 
(1
99
4)
 a
da
pt
ad
o.
4063Hortic. bras., v. 27, n. 2 (Suplemento - CD Rom), agosto 2009
Influência dos fatores abióticos na composição química dos óleos essenciais
S
Tabela 3. Teor de linalol em folhas e inflorescências de Ocimum basilicum cultivar Fino Verde submetidas a
diversos dias de secagem em estufa a 40° C.
Tempo de secagem (dias de secagem) Folhas Inflorescências
%
Fresco 45,18 80,7
Primeiro 65, 6 75,3
Segundo 68,9 78,4
Terceiro 59,6 82,7
Quarto 70,9 89,6
Quinto 86,8 90,3
Sétimo 72,3 82,8
Nono 67,2 81,7
Décimo primeiro 73, 6 92,6
Décimo terceiro 74,9 86,2
Décimo sexto 68,9 84,6
Fonte: Carvalho-Filho et al., 2006 (Adaptado)
<<
 /ASCII85EncodePages false
 /AllowTransparency false
 /AutoPositionEPSFiles true
 /AutoRotatePages /All
 /Binding /Left
 /CalGrayProfile (Dot Gain 20%)
 /CalRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
 /CalCMYKProfile (U.S. Web Coated \050SWOP\051 v2)
 /sRGBProfile (sRGB IEC61966-2.1)
 /CannotEmbedFontPolicy /Warning
 /CompatibilityLevel 1.4
 /CompressObjects /Tags
 /CompressPages true
 /ConvertImagesToIndexed true
 /PassThroughJPEGImages true
 /CreateJDFFile false
 /CreateJobTicket false
 /DefaultRenderingIntent /Default
 /DetectBlends true
 /DetectCurves 0.0000
 /ColorConversionStrategy /LeaveColorUnchanged
 /DoThumbnails false
 /EmbedAllFonts true
 /EmbedOpenType false
 /ParseICCProfilesInComments true
 /EmbedJobOptions true
 /DSCReportingLevel 0
 /EmitDSCWarnings false
 /EndPage -1
 /ImageMemory 1048576
 /LockDistillerParams false
 /MaxSubsetPct 100
 /Optimize true
 /OPM 1
 /ParseDSCComments true
 /ParseDSCCommentsForDocInfo true
 /PreserveCopyPage true
 /PreserveDICMYKValues true
 /PreserveEPSInfo true
 /PreserveFlatness true
 /PreserveHalftoneInfo false
 /PreserveOPIComments false
 /PreserveOverprintSettings true
 /StartPage 1
 /SubsetFonts true
 /TransferFunctionInfo /Apply
 /UCRandBGInfo /Preserve
 /UsePrologue false
 /ColorSettingsFile ()
 /AlwaysEmbed [ true
 ]
 /NeverEmbed [ true
 ]
 /AntiAliasColorImages false
 /CropColorImages true
 /ColorImageMinResolution 300
 /ColorImageMinResolutionPolicy /OK
 /DownsampleColorImages true
 /ColorImageDownsampleType /Bicubic
 /ColorImageResolution 300
 /ColorImageDepth -1
 /ColorImageMinDownsampleDepth 1
 /ColorImageDownsampleThreshold 1.50000
 /EncodeColorImages true
 /ColorImageFilter /DCTEncode
 /AutoFilterColorImages true
 /ColorImageAutoFilterStrategy /JPEG
 /ColorACSImageDict <<
 /QFactor 0.15
 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
 >>
 /ColorImageDict <<
 /QFactor 0.15
 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
 >>
 /JPEG2000ColorACSImageDict <<
 /TileWidth 256
 /TileHeight 256
 /Quality 30
 >>
 /JPEG2000ColorImageDict <<
 /TileWidth 256
 /TileHeight 256
 /Quality 30
 >>
 /AntiAliasGrayImages false
 /CropGrayImages true
 /GrayImageMinResolution 300
 /GrayImageMinResolutionPolicy /OK
 /DownsampleGrayImages true
 /GrayImageDownsampleType /Bicubic
 /GrayImageResolution 300
 /GrayImageDepth -1
 /GrayImageMinDownsampleDepth 2
 /GrayImageDownsampleThreshold 1.50000
 /EncodeGrayImages true
 /GrayImageFilter /DCTEncode
 /AutoFilterGrayImages true
 /GrayImageAutoFilterStrategy /JPEG
 /GrayACSImageDict <<
 /QFactor 0.15
 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
 >>
 /GrayImageDict <<
 /QFactor 0.15
 /HSamples [1 1 1 1] /VSamples [1 1 1 1]
 >>
 /JPEG2000GrayACSImageDict <<
 /TileWidth 256
 /TileHeight 256
 /Quality 30
 >>
 /JPEG2000GrayImageDict <<
 /TileWidth 256
 /TileHeight 256
 /Quality 30
 >>
 /AntiAliasMonoImages false
 /CropMonoImages true
 /MonoImageMinResolution 1200
 /MonoImageMinResolutionPolicy /OK
 /DownsampleMonoImages true
 /MonoImageDownsampleType /Bicubic
 /MonoImageResolution 1200
 /MonoImageDepth -1
 /MonoImageDownsampleThreshold 1.50000
 /EncodeMonoImages true
 /MonoImageFilter /CCITTFaxEncode
 /MonoImageDict <<
 /K -1
 >>
 /AllowPSXObjects false
 /CheckCompliance [
 /None
 ]
 /PDFX1aCheck false
 /PDFX3Check false
 /PDFXCompliantPDFOnly false
 /PDFXNoTrimBoxError true
 /PDFXTrimBoxToMediaBoxOffset [
 0.00000
 0.00000
 0.00000
 0.00000
 ]
 /PDFXSetBleedBoxToMediaBox true
 /PDFXBleedBoxToTrimBoxOffset [
 0.00000
 0.00000
 0.00000
 0.00000
 ]
 /PDFXOutputIntentProfile ()
 /PDFXOutputConditionIdentifier ()
 /PDFXOutputCondition ()
 /PDFXRegistryName ()
 /PDFXTrapped /False
 /Description <<
 /CHS <FEFF4f7f75288fd94e9b8bbe5b9a521b5efa7684002000500044004600206587686353ef901a8fc7684c976262535370673a548c002000700072006f006f00660065007200208fdb884c9ad88d2891cf62535370300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c676562535f00521b5efa768400200050004400460020658768633002>
 /CHT <FEFF4f7f752890194e9b8a2d7f6e5efa7acb7684002000410064006f006200650020005000440046002065874ef653ef5728684c9762537088686a5f548c002000700072006f006f00660065007200204e0a73725f979ad854c18cea7684521753706548679c300260a853ef4ee54f7f75280020004100630072006f0062006100740020548c002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e003000204ee553ca66f49ad87248672c4f86958b555f5df25efa7acb76840020005000440046002065874ef63002>
 /DAN <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>
 /DEU <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>/ESP <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>
 /FRA <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>
 /ITA <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>
 /JPN <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>
 /KOR <FEFFc7740020c124c815c7440020c0acc6a9d558c5ec0020b370c2a4d06cd0d10020d504b9b0d1300020bc0f0020ad50c815ae30c5d0c11c0020ace0d488c9c8b85c0020c778c1c4d560002000410064006f0062006500200050004400460020bb38c11cb97c0020c791c131d569b2c8b2e4002e0020c774b807ac8c0020c791c131b41c00200050004400460020bb38c11cb2940020004100630072006f0062006100740020bc0f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e00300020c774c0c1c5d0c11c0020c5f40020c2180020c788c2b5b2c8b2e4002e>
 /NLD (Gebruik deze instellingen om Adobe PDF-documenten te maken voor kwaliteitsafdrukken op desktopprinters en proofers. De gemaakte PDF-documenten kunnen worden geopend met Acrobat en Adobe Reader 5.0 en hoger.)
 /NOR <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>
 /PTB <FEFF005500740069006c0069007a006500200065007300730061007300200063006f006e00660069006700750072006100e700f50065007300200064006500200066006f0072006d00610020006100200063007200690061007200200064006f00630075006d0065006e0074006f0073002000410064006f0062006500200050004400460020007000610072006100200069006d0070007200650073007300f5006500730020006400650020007100750061006c0069006400610064006500200065006d00200069006d00700072006500730073006f0072006100730020006400650073006b0074006f00700020006500200064006900730070006f00730069007400690076006f0073002000640065002000700072006f00760061002e0020004f007300200064006f00630075006d0065006e0074006f00730020005000440046002000630072006900610064006f007300200070006f00640065006d0020007300650072002000610062006500720074006f007300200063006f006d0020006f0020004100630072006f006200610074002000650020006f002000410064006f00620065002000520065006100640065007200200035002e0030002000650020007600650072007300f50065007300200070006f00730074006500720069006f007200650073002e>
 /SUO <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>
 /SVE <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>
 /ENU (Use these settings to create Adobe PDF documents for quality printing on desktop printers and proofers. Created PDF documents can be opened with Acrobat and Adobe Reader 5.0 and later.)
 >>
 /Namespace [
 (Adobe)
 (Common)
 (1.0)
 ]
 /OtherNamespaces [
 <<
 /AsReaderSpreads false
 /CropImagesToFrames true
 /ErrorControl /WarnAndContinue
 /FlattenerIgnoreSpreadOverrides false
 /IncludeGuidesGridsfalse
 /IncludeNonPrinting false
 /IncludeSlug false
 /Namespace [
 (Adobe)
 (InDesign)
 (4.0)
 ]
 /OmitPlacedBitmaps false
 /OmitPlacedEPS false
 /OmitPlacedPDF false
 /SimulateOverprint /Legacy
 >>
 <<
 /AddBleedMarks false
 /AddColorBars false
 /AddCropMarks false
 /AddPageInfo false
 /AddRegMarks false
 /ConvertColors /NoConversion
 /DestinationProfileName ()
 /DestinationProfileSelector /NA
 /Downsample16BitImages true
 /FlattenerPreset <<
 /PresetSelector /MediumResolution
 >>
 /FormElements false
 /GenerateStructure true
 /IncludeBookmarks false
 /IncludeHyperlinks false
 /IncludeInteractive false
 /IncludeLayers false
 /IncludeProfiles true
 /MultimediaHandling /UseObjectSettings
 /Namespace [
 (Adobe)
 (CreativeSuite)
 (2.0)
 ]
 /PDFXOutputIntentProfileSelector /NA
 /PreserveEditing true
 /UntaggedCMYKHandling /LeaveUntagged
 /UntaggedRGBHandling /LeaveUntagged
 /UseDocumentBleed false
 >>
 ]
>> setdistillerparams
<<
 /HWResolution [2400 2400]
 /PageSize [612.000 792.000]
>> setpagedevice