Relatório prática_ Biologia Molecular_02 (2)

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD
	
AULA 2
	
	
	DATA:
23/11/2019
VERSÃO:01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: 
 UNIVERSIDADE UNAMA;
Disciplina Biologia molecular;
	NOME: Dalila Martin Bastos
	MATRÍCULA: 04036398
	CURSO: Farmacia
	POLO: Porto velho RO
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Luan
	ORIENTAÇÕES GERAIS: 
· O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
· concisa;
· O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
· Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
· Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
· Espaçamento entre linhas: simples;
· Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado).
	
	
	TEMA DE AULA: ELETROFORESE
RELATÓRIO:
1. Identificar todos os equipamentos e reagentes necessários para a realização da eletroforese
Eletroforese é um termo usado para descrever a migração de uma partícula carregada sob a influência de um campo elétrico, permite a separação de proteína sérica ou plasmática. Nas condições da carga corrente elétrica constante. A força de deslocamento de uma partícula é resultado da carga efetiva. Há o campo negativo, e o campo positivo, a migração e em direção a carga positiva, e ou vice-versa.
 
Os componentes da eletroforese são:
- campo elétrico (cuba de eletroforese).
- Matriz de migração: que é formado por um material poroso e inerte, fornece o meio pelo qual as moléculas podem migrar e ser separadas de acordo com o seu tamanho e forma.
- Tampão: Manter o PH do sistema, o que é importante para definir o estado de ionização das moléculas que estão sendo separada, sua viscosidade influencia também a facilidade com que as moléculas migrarão.
De forma geral, as amostras são aplicadas em uma das extremidade de um gel e migram normalmente em concentração de 1 a 3%, sua forma de preparação se da com água destilada e aquecida ate forma um liquido claro, após isto colocada no recipiente certo e aguardar o resfriamento ate formar o gel
O gel poliacrimida, denominada de PAGE
SDS-PAGE: é o método mais utilizado quando se quer anasile qualitativa de proteínas
- corante fluorescente
-TAQ polimerase
-Tubos de cor
-Termociclador 
-transulador
2. Descrever cada etapa dessa metodologia
Verificar se esta funcionando a cuba de eletroforese, depois após pesagem e com espátula, misturar num béquer, com água destilada e aquecer ate formação límpida e clara da solução, após colocar no recipiente molde junto com o pente de tamanho que ser quer trabalha os canais por onde vão percorrer as partículas, ao colocar o molde pente, verificar se não há presença de bolhas.
Nos poços feitos pelo pente molde, colocar o DNA diluído, e misturado com a solução azul de Bromeferol, colocar o molde com extremo cuidado em cada poço, de forma que não perfure o tampão, após preencher todos os poços, cobrir com a tampa da cuba, e conectar os eletrodos de maneira que ao ligar a cuba, o DNA migre do pólo negativo para o positivo, ajustar a voltagem e o tempo e visualizar as bandas com o auxilio de lux ultravioleta.
Lembrando de usar todos os EPIs, necessários para a técnica de eletroforese, seguindo as normas de segurança para laboratórios e agentes biológicos
A porcentagem utilizada é medida em PESO/VOLUME
O gel de poliacrimida: Page, monômetro de acrilamida com bis acrilamida separa ácidos nucléicos apenas ate uma faixa de tamanho limitado, Mas apresenta um maior capacidade de resolução
3. Justificar a aplicação das diferentes concentrações dos géis. 
A porcentagem utilizada é medida em PESO/VOLUME
O gel de poliacrimida: Page, monômetro de acrilamida com bis acrilamida separa ácidos nucléicos apenas ate uma faixa de tamanho limitado, Mas apresenta um maior capacidade de resolução
	
	
	TEMA DE AULA: REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE
RELATÓRIO:
1. Descrever cada uma das etapas da PCR, explicando detalhadamente cada uma. 
A PCR permite a amplificação exponencial das sequencias-alvo, moléculas do DNA são amplificadas em milhares ou milhões de novas copias, por isso de uma reação in vitro muito rápida que a técnica de clonagem de DNA em organismo hospedeiros, o método permite a síntese de copias idênticas de sequencias especificas de DNA.
- A amostra precisa estar em bom estado de conservação e sem a presença de impurezas ( como proteínas, lipídios e reagentes químicos utilizados na extração)
 ETAPAS PARA UM BOM PCR
As enzimas de restrição são as polimerases.
ETAPA 1 EXTRAÇÃO:
O primeiro passo é pegar o material genético a ser utilizado, que no caso é o DNA. Ele não pode ser alterado e nem contaminado por algum outro reagente que cause um resultado diferente do que se espera da combinação final. Essa extração vai ser aquecida a ponto de ser desnaturada juntamente com a região que precisa ser amplificada.
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ETAPA 2 DESNATURAÇÃO:
A desnaturação é dividida em duas partes. Para que essa etapa da técnica de PCR funcione, o manipulador deve adicionar uma base nitrogenada composta por um três fosfato, os oligonucleotídeos (conhecidos como primers, que são as fitas do DNA A,T, C e G) e a polimerase que será usada para promover a reação. A mistura deve ser feita para que o DNA consiga se adequar à consistência e absorva adequadamente as informações genéticas dos outros três materiais.
Em seguida, o manipulador deve pôr a mistura em um aparelho chamado termociclador. Esse aparelho vai promover variações de temperatura específicas na solução tampão em que se encontra o DNA e a mistura. Essa instabilidade na temperatura ajuda a transformar as fitas de DNA em uma única estrutura, em caráter desnaturado. O aquecimento vem primeiro, com temperatura máxima de 95° para que as fitas se separem. Depois vem o resfriamento, com o termociclador apresentando uma temperatura de 50°. E aí entra a fase de anelamento.
ETAPA 3 O ANELAMENTO:
Das etapas da PCR, o anelamento é a que vai ocorrer a união das fitas de DNA (primers) em cada lado complementar.  A partir daí, o trabalho de amplificação começa, uma vez que o molde da nova molécula cresce por conta da combinação dessas complementações. O anelamento ocorre durante o resfriamento no termociclador e, após esse período, o aparelho volta a se aquecer para que a polimerase atue na composição.
ETAPA 4 A POLIMERIZAÇÃO:
É a extensão definitiva do DNA. Na técnica de PCR, essa fase já apresenta a polimerase adicionando as bases nitrogenadas. Para que essa extensão ganhe força e consiga reproduzir uma nova molécula, a mistura precisa estar aquecida a uma temperatura de no máximo 72°.
Para se chegar a uma amplificação com nível considerável, são necessárias várias repetições desse processo, com até 30 ciclos refeitos para que a nova molécula se estruture corretamente.
2. Realizar o cálculo para 10 reações da PCR