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Replicação, transcrição e tradução Profª Thaysse Leite thaysse.leite@estacio.br Disciplina: Bases da Biologia Celular e Genética O DNA pode se replicar e dar origem a novas moléculas de DNA, pode ainda ser transcrito em RNA, e este por sua vez traduz o código genético em proteínas. Dogma Central da Biologia Molecular Replicação do DNA 1. Capacidade de se produzir infinitas réplicas de DNA a partir de uma única dupla-hélice; 2. As pontes de hidrogênio entre as fitas complementares que compõe a dupla-hélice podem ser rompidas, e as ligações restauradas a partir de novos nucleotídeos. 5 Replicação semiconservativa 1. Modelo de Watson & Crick; 2. Implica na síntese de duas moléculas-filhas de DNA, sendo que: a) a fita original da molécula mãe, que foi utilizada como molde, é mantida; b) a segunda fita, complementar, corresponde à fita-filha, sintetizada a partir do molde. https://djalmasantos.wordpress.com/2010/10/31/duplicacao-do-dna/ A replicação do DNA começa na origem da replicação. E. coli: uma única OR Eucariotos: várias ORs em cada cromosoma OR: open reading / origem de replicação Procarionte Eucarionte 8 DNA polimerase a) Incorpora nucleotídeos a partir de nucleotídeos já existentes na molécula de DNA, utilizando a hidroxila livre na posição 3´; b) Dessa forma, é dependente de um iniciador (primer), já que não é capaz de adicionar um novo nucleotídeo se não houver uma hidroxila livre; c) A orientação da síntese é sempre 5´-> 3´, respeitando a especificidade do pareamento de bases com a fita molde, de acordo com o modelo de Watson & Crick. 5’- 3’ Proteínas (SSB ou PCNA) evitam que o DNA se reagrupe. Helicase liga-se às sequências de DNA (O.R.) e abre as cadeias de DNA 5’ 3’ 5’ 3’ Primase fabrica um pequeno segmento de RNA complementar ao DNA (primer). 3’5’ 5’3’ Sentido da replicação 5’3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’5’ A enzima DNA polimerase adiciona nucleotídeos ao primer de RNA. A enzima DNA polimerase adiciona nucleotídeos ao primer de RNA. 5’ 5’ Sentido da replicação 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 3’ A DNA polimerase corrige (proofreads) as bases adicionadas substituindo os nucleotídeos incorretos. 5’ 5’3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ Sentido da replicação A síntese da leading strand continua no sentido 5’ para 3’. 3’5’ 5’ 5’3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ Sentido da replicação Okazaki fragment A síntese da leading strand continua no sentido 5’ para 3’. Síntese descontinua produz segmentos de DNA, 5’ para 3’ (fragmentos Okazaki). 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’3’ A síntese da leading strand continua no sentido 5’ para 3’. Síntese descontínua produz segmentos de DNA, 5’ para 3’ (fragmentos Okazaki). 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’3’ A síntese da leading strand continua no sentido 5’ para 3’. Síntese descontínua produz segmentos de DNA, 5’ para 3’ (fragmentos Okazaki). 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ A atividade de exonuclease da DNA polimerase I remove os primers de RNA. A atividade de polimerase da DNA polimerase I preenche os espaços. A Ligase forma ligações entre o sugar-phosphate backbone. 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 3’ 5’ Helicase separa a dupla hélice parental Proteínas (SSB ou PCNA) Estabilizam as cadeias A DNA polimerase liga a nucleotideos formando novas cadeias Ligase junta fragmentos de Okazaki e sela o sugar-phosphate backbone Primase adiciona um primer à cadeia template DNA polimerase I (Exonuclease) remove o primer de RNA inserindo as bases corretas Enzimas envolvidas na replicação do DNA DNA polimerases Bactérias Três tipos de DNA polimerase em E. coli : I, II and III. DNA polimerase I preenche os espaços entre os fragmentos de DNA da lagging strand. DNA polymerase II é codificada pelo gene PolB, e está envolvida em resposta a danos no DNA. A replicação do DNA é fundamentalmente realizada pela DNA polimerase III. Eucariotos Há 5 tipos de DNA polimerases em células eucariotas: a, b, g, d, e e. A subunidade g localiza-se na mitocôndria e é responsável pela replicação do mtDNA. As outras subunidades localizam-se no núcleo. Funções: a: sintese da lagging strand. b: Reparação do DNA. d: sintese da leading strand. e: Reparação do DNA. Figure. The structure formed by two b subunits of the E. coli DNA polymerase III . A replicação é bi-direcional Características da replicação do DNA Bidirecional ◦ Dois garfos de replicação movendo-se em direções opostas Semiconservativa - Cada cadeia de DNA alvo é copiada Semidescontínua ◦ A cadeia leading copia-se continuamente ◦ A cadeia lagging copia-se em segmentos ( fragmentos de Okazaki) que são unidos O DNA é o principal armazenador da informação genética. Esta informação é copiada ou transcrita para moléculas de RNA, cujas as sequências de nucleotídeos contém o “código” para a ordenação específica de aminoácidos. As proteínas são então sintetizadas num processo que envolve a tradução do RNA. Transcrição é o processo através do qual se sintetiza uma molécula de RNA mensageiro, a partir de um molde de DNA. A reação é catalisada pela RNA polimerase e ocorre sempre na direção 5'-3'. À cadeia de dupla hélice de DNA que é transcrita dá-se o nome de cadeia antisenso. A sequência da molécula de RNA sintetizada é uma cópia desta, sendo a timina substituída pela uracila. A outra cadeia de DNA designa-se por cadeia molde. Transcrição 26 Transcrição a) Precursores são ribonucleosídeos trifosfato; b) Somente uma das fitas é utilizada como molde; c) Substituição da timina por uridina; d) Não existe a necessidade de um iniciador para a incorporação do primeiro nucleotídeo; e) O primeiro nucleotídeo é incorporado na forma de trifosfato, enquanto os demais são incorporados na forma de monofosfato. 27 RNAs ❑ Existem três tipos principais de RNAs, os quais são sintetizados pela mesma enzima RNA polimerase: a) RNAm: leva a informação armazenada no genoma para ser decodificada em um polipeptídeo; b) RNAt: responsável pelo transporte de aminoácidos ativados até os ribossomos, o que possibilita a síntese proteica; c) RNAr: componente dos ribossomos, estrutura na qual ocorre a síntese proteica. Transcrição • INÍCIO – quando ocorre reconhecimento de sequência específica no DNA; •ALONGAMENTO – quando os ribonucleotídeos são sucessivamente incorporados; •TERMINAÇÃO – quando sequências no DNA são reconhecidas e a síntese é interrompida. Em procarioto, uma RNA polimerase é responsável por todo o processo de transcrição e tradução; Em eucarioto, três RNAs polimerases são responsáveis por todo o processo de transcrição e tradução Genes sequências reguladoras PROMOTORES motivos Onde inicia a transcrição??? Procariotos: Sequência Pribnow box Eucariotos: Sequência TATA box • Reconhecer o promotor; • Desnaturar o DNA expondo a sequência a ser copiada; • Manter as fitas de DNA separadas na região da síntese; • Manter o híbrido DNA:RNA estável; • Renaturar o DNA na região imediatamente posterior à síntese; Funções da RNA polimerase Iniciação Constituição de um ribossoma funcionalmente competente em que um mRNA foi posicionado corretamente de modo a que o codón de iniciação se encontra no P- site e é emparelhado com o tRNA iniciador. No entanto… Mecanismo de iniciação difere entre procariotas e eucariotas Sítio de ligação do ribossomo e códon de iniciação 5’ ...AGGAGGxxxxxxxAUG...3’ Sequência Shine delgarno Códon de iniciação PROCARIOTOS Procariotos Eucariotos Processamento Pós-Transcricional 36 Splicing do mRNA Uma das características do genoma de eucariotos é que os genes podem ser fragmentados. O que significa isto? ◦ Num segmento do DNA, correspondente a um gene que codifica uma determinada proteína, são encontradas ◦ Regiões codificadoras (exons) alternando-se com regiões não-codificadoras (introns) ◦ O transcrito resultantenão é funcional e só poderá ser traduzido se for devidamente montado, descartando-se os introns e unindo-se os exons em seqüência ordenada ◦ Este tipo de modificação do transcrito primário é denominado "splicing" (cortar e colar; montagem) ◦ Ocorre dentro do núcleo ◦ O transcrito processado e pronto para migrar para o citoplasma, recebe o nome de RNA mensageiro RNA → Proteina: Tradução: conceitos básicos ❑ Ribossomas e RNA de transferência (tRNA) percorrem o mRNA, decodificando codón por codón e sintetizando uma cadeia crescente de aminoácidos (“peptídeo”) ❑Os tRNAs tem anti-codóns, que são complementares aos codóns do mRNA, determinando o aminoácido a ser incorporado 39 Expressão Gênica – Tradução T G C A G C T C C G G A C T C C A T . . . RNA Polimerase promotor Transcrição A C G U C G A G G C C U G A G G U A . . . DNA mRNA Tradução His Ribossomo A C G códon 40 Expressão Gênica – Tradução T G C A G C T C C G G A C T C C A T . . . RNA Polimerase promotor Transcrição A C G U C G A G G C C U G A G G U A . . . DNA mRNA Tradução Ribossomo His LeuGli Ser Ser Cis 41 POR QUE ESTE PROCESSO SE CHAMA TRADUÇÃO? O que ocorre é a conversão da informação “escrita” na linguagem de um ácido nucléico em linguagem de uma proteína. Esta conversão só é possível devido à existência de um código genético que, relaciona a sequência de bases constituintes da molécula de DNA (ou mRNA) com a sequência dos aminoácidos que formam a proteína 42 DNA, RNA e proteínas. Representação das estruturas das três principais moléculas envolvidas no fluxo da informação genética 43 Código Genético Código Genético mapeamento dos códons nos aminoácidos ◦ 64 códons ◦ 20 aminoácidos ◦ 3 códons de parada aminoácidos mapeados por mais de um códon Degeneração do código genético Código Genético U C A G U Phe Phe Leu Leu Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Parada Parada Cys Cys Parada Trp U C A G C Leu Leu Leu Leu Pro Pro Pro Pro His His Gln Gln Arg Arg Arg Arg U C A G A Ile Ile Ile Met Thr Thr Thr Thr Asn Asn Lys Lys Ser Ser Arg Arg U C A G G Val Val Val Val Ala Ala Ala Ala Asp Asp Glu Glu Gly Gly Gly Gly U C A G 1 a b as e n o c ó d o n 2a base no códon 3 a b ase n o có d o n Código Genético Visto que o código genético tem redundância, é possível que diferentes sequências nucleotídicas codifiquem a mesma sequência de aminoácidos ◦ Essas diferenças limitam-se a uma ou, quando muito, a duas posições da trinca de uma dado códon Leu Pro ArgLisIle UUA CCU AUU AAA CGG CUG CCG AUA AAG CGA 46 Indústria de Informação A Fábrica A Célula O Manual de Instruções DNA O Dogma Central DNA-RNA- Proteínas Os Operários Proteínas Erros de Programação Doenças 47 O Dogma Central e os Moldes Estes novos conhecimentos permitiram que o dogma central se ampliasse sem, contudo, perder a unidirecionalidade, ou seja, de ácido nucléico para proteína
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