AV1 - BIOTECNOLOGIA DA REPRODUÇÃO ANIMAL

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1.NOME
2.MATRÍCULA
3.Monte DOIS protocolos de sincronização de estro em tempo fixo em ovelhas . Inseminação em tempo fixo para dia 18 de junho de 2020 às 18 horas e às 13 horas, respectivamente. USAR PROTOCOLOS DIFERENTES.
D0 (02/06) 11:00HRS - esponja vaginal MAP, início da fase luteal. 
D14 (16 /06) 11: 00HRS- retirada da esponja, aplicação de eCG. 
Inseminação artificial entre 55-60 após a retirada. Fase de crescimento folicular e estro.
I.A.T.F. 18/06/2020 ÀS 18 HORAS
D0 (09 /06 ) 06:00 HRS - esponja vaginal CIDR, início da fase luteal.
D7 (16 / 06) 06:00 HRS- retirada da esponja vaginal, aplicação eCG e PGF2α.
Inseminação artificial entre 55-60 horas. Fase de crescimento folicular e estro.
I.A.T.F 18/06/2020 ÀS 13 HORAS
4.Monte DOIS protocolos de sincronização de estro em tempo fixo em VACAS. Inseminação em tempo fixo para dia 26 de agosto de 2020 às 10 horas e às 15 horas, respectivamente. USAR PROTOCOLOS DIFERENTES.
D0 (16 /08) 02:00 HRS - aplicação de progestágeno e estrógeno.
D8 (24 /08) 02:00 HRS- retirada do dispositivo de progestágeno, aplicação de PGF²α e eCG. 
D9 (25 /08 ) 02:00 HRS - aplicação de estrógeno.
Após 32 horas, I.A.T.F.
(26 /08) 10:00 HRS
D0 (16 / 08) 23:00 HRS - aplicação de GnRH.
D7 (23 /08) 23:00 HRS- aplicação de PGF²α.
D9 (25 /08) 23:00 HRS- aplicação de GnRH.
Após 16 horas, I.A.T.F.
I.A.T.F. 26/08/2020 ÀS 15:00 HORAS
5.Descreva a inseminação artificial em bovinos, desde a contenção, montagem do aplicador e inseminação artificial propriamente dita. 
Após a observação do cio, iremos para as etapas da inseminação artificial. Deve-se realizar a contenção da fêmea no brete, a fim de diminuir os riscos de acidentes e facilitar o processo de inseminação; deve-se vestir uma luva de palpação retal e fazer o esvaziamento do reto; Em seguida, fazer palpação da cérvix e higienização do reto e da vulva com água, enxugando a região com papel toalha ou papel higiênico; com um pinça, devemos retirar a palheta de sêmen do interior do botijão de nitrogênio de forma mais rápida possível, evitando uma evaporação excessiva (medir regularmente o nível de nitrogênio do botijão). Posteriormente, deve-se realizar o descongelamento do sêmen em água a 37ºC durante 25 segundos; após o descongelamento, deve-se secar a palheta com papel toalha ou papel higiênico (nunca entrar em contato direto para não ocorrer transferência de calor). Em seguida, devemos realizar um corte no lacre da palheta de sêmen; após retirar o lacre da palheta, devemos acoplar a bainha na extremidade sem o lacre da palheta, até que essa se firme. Em seguida, devemos acoplar a bainha no aplicador, de forma com que a bainha fique bem fixa ao aplicador; com o aplicador preparado, devemos recolocar a luva de palpação retal. Com uma das mãos, devemos manipular o cérvix por via retal e com a outra, iremos introduzir o aplicador pela via vaginal. Para facilitar a introdução do aplicador na vagina, a abertura desta pode ser feita por outra pessoa. O aplicador deve ser introduzido em diagonal ascendente até alcançar a cérvix, devemos ultrapassar os anéis cervicais com o aplicador e inseminar no interior do útero. Após retirar o aplicador, deve-se realizar uma massagem na vulva a fim de estimular a movimentação dos espermatozoides pela liberação de estrógeno. 
6.Descreva a avaliação microscópica do sêmen no espermograma em touros
Iremos avaliar microscopicamente o turbilhão, a percentagem de espermatozoides móveis, vigor e a percentagem de espermatozoides normais e anormais.
Para visualizar o turbilhão, será posto 10 µL de sêmen em lâmina no aumento de 10x. 
Para avaliar a percentagem de espermatozoides móveis, será posto 10µL de sêmen puro e fresco em lâmina e lamínula na objetiva de 40x. 
Para avaliar vigor, será posto 10 µL de sêmen diluído em proporção necessária (até ser possível ver cada um de forma individual) e coloca-se em lâmina e lamínula. O vigor é classificado de 0 a 5. A classificação é 0: sem MP; 1: movimento oscilatório; 2: movimento circular; 3: MP retilíneo; 4: MP retilíneo e linear; 5: MP vigoroso e veloz. Será observado em aumento de 40x.
 Para avaliar a percentagem de normais e anormais, o profissional pode realizar duas técnicas: um esfregaço com 10 µL de sêmen utilizando um corante (azul de metileno, violeta genciana, vermelho congo) ou colocar 10 µL de sêmen num tubo eppendorf (10µL de sêmen) com mais 10 µL de rosa bengala 3% e 10 µL de formol salina e adicionando uma gota da mistura em lâmina e lamínula, visualizando no aumento de 40x para as duas técnicas. No material iremos avaliar a percentagem de espermatozoides normais e anormais bem como a morfologia dos espermatozoides: formato da cabeça, conformação da cauda e localização da gota citoplasmática. É importante salientar caso seja observado alguma patologia e não passar de 15% de espermatozoides patológicos (não é o ideal para ser usado). Na avaliação de concentração espermática, vamos diluir 10 µL de sêmen em 2ml de formol salino e encaminharemos para a câmara de Neubauer, utilizando uma pipeta e lamínula. A contagem será realizada em L nos 5 quadrados dos 25 presentes em objetiva de 40x e aplicaremos a fórmula. A fórmula é concentração espermática =(N)/(1/D x 1/10 x 1/5) onde N equivale a soma dos espermatozoides contados nos 5 quadrados e D o valor correspondente ao diluidor em µL, utilizamos 200 pois usamos 2 mL no preparo da câmara. Ao final, multiplicar o valor por mil, para poder encaixar na unidade mL. Os parâmetros para um bom reprodutor bovino é 1 a 2 x 10⁹, valores abaixo dessa referência caracteriza o animal como produtor ruim e valores acima podem ser considerado ótimo ou excelente reprodutor. Importante esperar 5 minutos para iniciar a contagem e contar 2 compartimentos. Caso haja disparidade, fazer nova amostra.
 
7.Explique o mecanismo de ação hormonal de um protocolo de sincronização da QUESTÃO 3 (sincronização em ovelha) e outro da QUESTÃO 4(sincronização em vaca)
Mecanismo de ação hormonal de sincronização de ovelha - Exemplo das 13:00 HRS. Os progestágenos (esponjas vaginais) são agentes análogos à progesterona. Sua função é prolongar a duração do ciclo, mimetizando a ação do corpo lúteo prolongando a duração do período em todas as fêmeas. Temos progestágenos sintéticos (MAP - acetato de medroxiprogesterona, FGA - acetato de fluorogestona, Norgestomed - implante auricular subcutâneo) e naturais (CIDR). Aplica-se o progestágeno no dia 0 para promover o bloqueio do ciclo. 
O eCG (gonadotrofina coriônica equina) é um agente análogo ao FSH e LH, vai estimular o crescimento folicular e ovulação, o que vai levar a maior exatidão para o momento de inseminar, alinhando o tamanho dos folículos. Aplica-se o eCG para estimular o crescimento folicular no dia 7. 
A PGF²α (prostaglandina F²α) é um agente que provocará a destruição do corpo lúteo ativo, encurtando a duração do ciclo. Nós utilizamos para ''reiniciar'' o ciclo. Aplica-se no dia 7 para destruir algum possível corpo lúteo e retira-se o progestágeno para desbloquear o ciclo. A inseminação é feita após 55 a 60 horas. 
Mecanismo de ação hormonal de sincronização de vaca - Exemplo das 15:00 HRS. Usamos o GnRH (hormônio liberador de gonadotrofina) no protocolo de Ovsynch que age estimulando toda a cascata endócrina do ciclo estral, resultando na ovulação. Aplica-se o GnRH no dia 0 que irá resultar em ovulação e início de uma nova onda folicular. Aplica-se novamente no dia 9 para estimular ovulação e espera-se 16 horas para realizar a inseminação 
A PGF²α como já foi dito, provoca a luteólise. Aplica-se no dia 7 levando a destruição do corpo lúteo e reiniciando o ciclo de todas as fêmeas simultaneamente.