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UNIVERSIDADE POTIGUAR – UNP ESCOLA DE SAÚDE BACHARELADO EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Discente: Maria Eduarda dos Santos Medeiros; 201906916 Turma: BIOB3MA Docente: Ariane Ferreira Lacerda Processos moleculares e genéticos Natal/RN 2020 Atividade prática supervisionada (APS) Respostas em negrito 1-Qual seria o fluxo em um laboratório de biologia molecular para se obter o resultado de um paciente que está realizando uma pesquisa de bactéria por PCR? Extração de DNA ==> PCR ==> Eletroforese 2- A reação da PCR consiste em amplificar um fragmento (região específica) de DNA milhões de vezes, para que isso ocorra precisamos preparar a reação previamente. Que reagentes são necessários para a montagem de uma reação de PCR? Água, solução tampão, DNA polimerase taq e nucleotídeo de DNA. 3- Quais as etapas que constituem a reação em cadeia da polimerase (PCR)? 3.1-Desnaturação- O DNA genômico contendo a sequência a ser amplificada é desnaturado por aquecimento a cerca de 95°C por cerca de 30 segundos. A dupla fita é aberta (desnaturada), tornando-se uma fita única. 3.2- Anelamento ou hibridização- Após a separação das fitas, um par de iniciadores ou primers (uma fita de DNA específica para o gene que se quer estudar) complementam a fita oposta da sequência de DNA a ser amplificada. Ou seja, um deles é complementar à sequência em uma fita da dupla-hélice de DNA e o outro é complementar à sequência na outra fita. O molde é determinado pela posição dos iniciadores que se anelam a fita. Essa etapa ocorre a uma temperatura de 60°C. 3.3- Extensão ou polimerização- Com o molde já identificado, a enzima DNA-polimerase adiciona as bases complementares, formando uma nova fita e então tem-se novamente a duplicação da fita de DNA. Esse processo acontece a uma temperatura de 72°C.
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