Determinação De Gordura Pelo Método De Bligh-Dyer

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INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA GOIANO 
CAMPUS MORRINHOS 
CURSO DE BACHARELADO EM AGRONOMIA 
BIOQUÍMICA – 3º PERÍODO 
PROF.ª. DR.ª. CARLA DE MOURA MARTINS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
DETERMINAÇÃO DE GORDURA PELO MÉTODO DE BLIGH-DYER 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
MORRINHOS – GO 
2019 
 
Guilherme Augusto Matias Nunes 
João Vitor Gomes Paulino Carvalho 
Leonardo Eleutério da Costa 
Mariana Assunção da Silva 
 
 
 
 
 
DETERMINAÇÃO DE GORDURA PELO MÉTODO DE BLIGH-DYER 
 
 
 
 
 
 
 
 
Relatório apresentado ao Curso de 
Bacharelado em Agronomia, do Instituto 
Federal Goiano – Campus Morrinhos (GO), 
como exigência parcial para aprovação na 
disciplina de Bioquímica (3º Período), 
ministrada pela Prof.ª. Dr.ª. Carla de Moura 
Martins. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Morrinhos – GO 
2019 
 
SUMÁRIO 
 
1 INTRODUÇÃO ........................................................................................................................ 1 
2 OBJETIVO ............................................................................................................................... 2 
3 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS ............................................................................. 2 
3.1 Materiais & Reagentes .......................................................................................................... 2 
3.2 Procedimentos Experimentais .............................................................................................. 3 
4 RESULTADOS & DISCUSSÃO ............................................................................................. 4 
5 CONSIRAÇÕES FINAIS ........................................................................................................ 8 
REFERÊNCIAS .......................................................................................................................... 9 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
1 
 
1 INTRODUÇÃO 
Os lipídeos biológicos são um grupo de compostos quimicamente diversos, cuja 
característica em comum que os define é a insolubilidade em água. Os mesmos são 
macromoléculas constituídas basicamente por carbono, hidrogênio e oxigênio (NELSON; 
COX, 2014), como mostra a Figura 01 abaixo. 
 
Figura 01 – Estrutura geral de um lipídeo. 
 
Fonte: (PINHEIROS; PORTO; MENEZES, 2005). 
 
Os lipídios servem principalmente como fornecedores de energia e podem ser 
degradados nas células durante a respiração celular. São muito abundantes nas células e 
juntamente com as proteínas formam as estruturas fundamentais das membranas celulares 
(PINHEIROS; PORTO; MENEZES, 2005). 
Os lipídeos podem ser sólidos ou líquidos, sendo que os lipídeos considerados 
gorduras têm origem animal e são sólidos enquanto que as gorduras líquidas são 
conhecidas como óleos, e têm origem vegetal. Como características principais dos 
lipídios, podemos citar a coloração que pode ser branca ou levemente amarelada como, 
por exemplo, óleo de soja e o óleo de coco, e são gordurosos ao tato, insolúveis em água, 
mas emulsionáveis nela. Os óleos e gorduras são constituídos de ésteres de ácidos graxos 
de alto peso molecular e glicerol, os quais podem ser saturados ou insaturados, 
apresentando diferentes solubilidades à temperatura ambiente (BRUICE, 2006). 
A extração de lipídios é uma determinação importante em estudos bioquímicos, 
fisiológicos e nutricionais dos mais diversos tipos de alimentos e, portanto, deve ser 
realizada com precisão (BRUM; ARRUDA; REGITANO-D’ARCE, 2009). Um dos 
procedimentos de extração mais versáteis e efetivos é a metodologia de Bligh & Dyer, o 
qual é uma versão simplificada do procedimento clássico usando clorofórmio-metanol 
proposto por Folch. Assim, o objetivo da referente prática foi extrair e quantificar a fração 
lipídica do óleo vegetal presente em amendoins brancos industrializado da marca Sinhá, 
comparando com a informação nutricional do produto empregando o método de Bligh-Dyer. 
Onde R, R1 e 
R2, podem ser 
iguais ou 
diferentes. 
2 
 
2 OBJETIVO 
 Determinar o teor de lipídeos totais de matéria-prima vegetal pelo método de 
Bligh-Dyer. 
 
3 PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS 
3.1 Materiais & Reagentes 
 Balança analítica; 
 2 Espátulas; 
 Amendoim; 
 01 Almofariz; 
 01 Pistilo; 
 01 Erlenmeyer de 100 mL com tampa; 
 01 Proveta de 20 mL; 
 03 Provetas de 10 mL; 
 Clorofórmio; 
 Metanol; 
 01 Pisseta com água destilada; 
 Agitador rotativo para erlenmeyers; 
 01 Cronômetro digital; 
 Solução aquosa de sulfato de sódio 1,5%; 
 01 Funil de separação; 
 01 Funil de vidro; 
 01 Bastão de vidro; 
 01 Suporte universal; 
 01 Argola; 
 01 Tubo de ensaio de 30 mL; 
 Sulfato de sódio anidro. 
 Papel filtro; 
 Pera ou pipetador; 
 01 Pipeta de 5 mL; 
 Béquer de 50 mL; 
 Estufa; 
 Dessecador. 
3 
 
3.2 Procedimentos Experimentais 
 Pesou-se em balança analítica cerca de 2,507 g de amendoim triturados com o uso 
de um almofariz e pistilo. 
 Transferiu-se a amostra de amendoim triturada e devidamente pesada para um 
erlenmeyer de 100 mL. 
 Adicionou-se ao erlenmeyer, contendo a amostra, cerca de aproximadamente 10 
mL de clorofórmio, 20 mL de metanol e 8 mL de água destilada. 
 Tapou-se o erlenmeyer e em seguida levando-o ao agitador rotativo por 30 
minutos. 
 Após a agitação adicionou-se ao erlenmeyer 10 mL de clorofórmio e 10 mL da 
solução de sulfato de sódio 1,5%. 
 Tapou-se o erlenmeyer e levou-o novamente ao agitador rotativo por 2 minutos. 
 Após a agitação separou-se as camadas de forma natural em um sistema de funil 
de separação. 
 Coletou-se em tubo de ensaio de 30 mL cerca de 15 mL da camada inferior e 
descartou-se a camada superior. 
 Adicionou-se ao coletado uma espátula de sulfato de sódio anidro, tampando-se e 
agitando-se manualmente para remoção de trações de água. 
 Filtrou-se a solução em papel filtro. 
 Pesou-se em balança analítica o béquer de 50 mL vazio para futuras considerações 
de rendimento. 
 Pipetou-se cerca de 5 mL do filtrado no mesmo béquer ao qual foi pesado. 
 Levou-se o béquer contendo a solução para uma estufa a 80 ºC para evaporação 
do solvente. 
 Em seguida, resfriou-se o béquer contendo a gordura em dessecador. 
 Pesou-se o béquer contendendo a gordura para futuras considerações de 
rendimento. 
 
 
 
 
 
 
4 
 
4 RESULTADOS & DISCUSSÃO 
4.1 Apresentar e discutir os dados obtidos por seu grupo. 
Os lipídeos são compostos orgânicos altamente energéticos os quais contém 
ácidos graxos essenciais ao organismo e atuam como transportadores das vitaminas 
lipossolúveis (BRUICE, 2006). Como presenciado em prática, os lipídeos são substâncias 
insolúveis em água, porém, solúveis em solventes orgânicos, tais como o clorofórmio. 
Este solvente apolar, o clorofórmio, teve a função de extrair a fração neutra que 
inclui ácidos graxos livre, mono, di e triacilglicerois da amostra em estudo. Assim, todos 
os solventes orgânicos são usados na determinação de gordura por extração. 
Em casos de alimentos, nem sempre é possível extrair diretamente a gordura, pois 
se a amostra estiver úmida se faz necessário proceder uma secagem, pois a água impede 
a penetração total do solvente e quando os lipídeos se encontram ligados a proteínas ou 
açúcares deve-se realizar uma hidrólise prévia. Em alguns casos, em vez da combinação 
de hidrólise e extração, é suficiente tratar a amostra com uma mistura de clorofórmio e 
metanol, o que se resume em método de Bligh-Dyer, o qual foi realizado em prática. 
O método utilizado em prática foi à extração com solvente a frio, e a amostra 
utilizada foram grãos de amendoins macerados. 
Segundo Cecchi (2003), em 1959 sugeriram um método para extrair gordura a frio 
que utiliza uma mistura de três solventes: clorofórmio, metanol e água, seguido de 
agitação contínua, como mostra a Figura 02 abaixo. 
 
Figura 02 – Misturade solventes em erlenmeyers em processo de agitação. 
 
Fonte: (os autores). 
 
Através da mistura dos três solventes em diferentes proporções houve a formação 
de duas fases distintas, uma fase inferior de clorofórmio e outra fase superior de metanol 
e água. A fase de clorofórmio foi então separada num funil de separação para a gordura 
extraída ser quantificada, como mostra a Figura 03 a seguir. 
5 
 
Figura 03 – Separação da fase orgânica e aquosa. 
 
Fonte: (os autores). 
 
No funil de separação obtivemos: a camada inferior orgânica de clorofórmio 
contendo a gordura extraída e a camada superior aquosa de metanol e água contendo 
outros compostos não lipídicos. 
A Figura 04 abaixo registra a gordura extraída dos grãos de amendoins após 
execução dos devidos procedimentos experimentais estabelecidos. 
 
Figura 04 – Gordura extraída. 
 
Fonte: (os autores). 
 
 
 
 
6 
 
4.2 Calcular a % de lipídeos totais da amostra. 
Para determinação do teor em porcentagem dos lipídeos totais extraídos em 2,507 
g de grãos de amendoins macerados os seguintes procedimentos foram executados: 
I. Pesou-se em balança analítica um béquer de 50 mL vazio, resultando em uma 
massa de aproximadamente 20,425 g. 
II. Após extração dos lipídeos, pesou-se novamente o mesmo béquer de 50 mL 
contendo os lipídeos em balança analítica, resultando em uma massa de 20,694 g. 
 
Desta maneira, foi possível fazer a diferença destas seguintes massas para obter a 
massa somente da gordura extraída a partir da equação abaixo: 
𝐦𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 = 𝐦𝐛é𝐪𝐮𝐞𝐫 𝐜𝐨𝐦 𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨 − 𝐦𝐛é𝐪𝐮𝐞𝐫 𝐯𝐚𝐳𝐢𝐨 
𝐦𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 = 𝟐𝟎, 𝟔𝟗𝟒𝐠 − 𝟐𝟎, 𝟒𝟐𝟓𝐠 
𝐦𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 = 𝟎, 𝟐𝟔𝟗𝐠 
 
Com a massa dos lipídeos extraídos conhecida, pode-se enfim, determinar o teor 
em porcentagem dos lipídeos totais extraídos de 2,507 g dos grãos de amendoins. O 
cálculo para o teor se deu através da seguinte equação abaixo, onde p é o peso dos lipídeos 
contidos em 5 mL (0,269g) e g é o peso da amostra (2,507g). 
%𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐢𝐬 =
𝐩 × 𝟒
𝐠
× 𝟏𝟎𝟎 
%𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐢𝐬 =
𝟎, 𝟐𝟔𝟗𝐠 × 𝟒
𝟐, 𝟓𝟎𝟕𝐠
× 𝟏𝟎𝟎 
%𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐢𝐬 = 𝟎, 𝟒𝟐𝟗 × 𝟏𝟎𝟎 
%𝐥𝐢𝐩í𝐝𝐞𝐨𝐬 𝐭𝐨𝐭𝐚𝐢𝐬 ≅ 𝟒𝟑% 
 
4.3 Pesquise os dados da Tabela de Composição de Alimentos e compare os resultados, 
e se houver diferença entre esses valores, explicar porque isso ocorreu. 
A comparação entre o resultado obtido experimentalmente e o resultado tabelado 
em tabela de composição dos alimentos, que se apresenta em Figura 05, foi realizada 
mediante expressão abaixo: 
𝚫% =
(𝑽%𝒍𝒊𝒑í𝒅𝒆𝒐𝒔 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒊𝒔 − 𝑽𝒕𝒂𝒃𝒆𝒍𝒂𝒅𝒐)
(𝑽%𝒍𝒊𝒑í𝒅𝒆𝒐𝒔 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒊𝒔)
× 𝟏𝟎𝟎 
 
 
7 
 
Figura 05 – Tabela de composição dos alimentos – Amendoim 
 
Fonte: (UNICAMP – TACO, 2011). 
 
Efetuando o cálculo com os respectivos valores conhecidos, obtemos: 
𝚫% =
(𝟒𝟑 − 𝟒𝟑, 𝟗)
(𝟒𝟑, 𝟗)
× 𝟏𝟎𝟎 
𝚫% = 𝟐, 𝟎𝟗𝟑 
 
A variação na porcentagem nos diz que em exatos 2,093g de amendoim seria 
possível extrair cerca de 43% dos lipídeos totais presentes. Se comparado com a massa 
pesada em prática de 2,507g há uma diferença de 0,414g. 
Como justificativa de valores distintos podemos citar alguns possíveis erros 
cometidos em execução da prática, como: 
 Mau uso das vidrarias à disposição; 
 Reagentes contaminados; 
 Balança analítica não tão precisa. 
 
4.4 Quais as diferenças entre a determinação de gorduras pelo método de Bligh & Dyer 
e pelo método de extração por Soxhlet, quanto às vidrarias, solventes, temperatura, 
amostra, produto de extração, tempo, facilidade de operação? 
Tanto no método de Soxhlet quanto no método de Bligh-Dyer a gordura é 
quantificada através de métodos gravimétricos, onde se realiza a coleta do solvente com 
o lipídeo num frasco definido e finalizando com a remoção do solvente por aquecimento 
8 
 
em estufa e pela diferença do peso do frasco contendo a gordura extraída com o frasco 
devidamente vazio. 
Soxhlet é um método de extração a quente que trabalha com um refluxo 
descontínuo e intermitente de solvente com a vantagem de evitar a temperatura alta de 
ebulição do solvente, pois a amostra não fica em contato direto com o solvente quente, 
evitando assim a decomposição da gordura na amostra. Os dois solventes mais utilizados 
são o éter de petróleo e o éter etílico (CECCHI, 2003). O método de Soxhlet é um método 
bastante eficiente para amostras secas onde é possível determinar ácidos graxos e 
fosfolipídios, porém se gasta um grande volume de solvente que pode acarretar na 
saturação do solvente que fica em contato com a amostra antes de ser sifonado. 
Bligh e Dyer, em 1959, sugeriram um método para extrair gordura a frio que 
utiliza uma mistura de três solventes: clorofórmio, metanol e água. Através da mistura 
dos três solventes em diferentes proporções são formadas duas fases distintas uma de 
clorofórmio onde tem se os lipídeos e outra de metanol e água contendo os compostos 
não lipídicos. A fase de clorofórmio é então separada num balão para a gordura ser 
quantificada (CECCHI, 2003). Esse método apresenta diversas vantagens, como: 
 Extrai todas as classes de lipídeos; 
 Pode ser usado em amostras úmidas ou secas; 
 Preservação dos lipídeos, pois não usa calor; 
 Simplicidade de aparatos e reagentes. 
Porém o método apresenta uma grande probabilidade de erros devido à grande 
quantidade de manipulação na amostra. Bligh-Dyer também pode ser usado em escala 
micro, isto é, a análise é feita em tubos de ensaio com a vantagem de proporcionar uma 
maior precisão na análise e reduzir gastos de solvente. 
 
5 CONSIRAÇÕES FINAIS 
Sabendo-se que a determinação de lipídeos é de suma importância para o 
conhecimento da composição nutricional dos alimentos, o objetivo desta prática foi 
determinar a porcentagem do teor de lipídeos totais de matéria-prima vegetal, amendoim, 
pelo método de Bligh-Dyer, e consequentemente avaliar a eficiência deste método. 
Assim, o teor de lipídeos totais em 2,507 g resultou-se em 0,269 g de gorduras extraídas, 
equivalendo a aproximadamente 43%. Em qualquer análise de alimentos, o que se busca 
é a exatidão e a precisão da análise, por este motivo, a escolha de um método que atenda 
9 
 
esses requisitos é de fundamental importância. O método de Bligh & Dyer é sugerido por 
muita das vezes pelo simples motivo de fazer uso de uma metodologia de quantificação 
da fração lipídica ao tratar a frio a amostra na qual será submetida a extração, sendo assim 
um método simples e rápido, e com menor risco para o analista e de baixo custo, 
apresentando vantagens quando comparado ao método de Soxhlet. Porém, o método 
utilizado não apresenta boa precisão, sendo viável para extrações e não quantificações. 
Para o método apresentar uma melhor precisão o recomendado seria utilizar o método 
micro, que além de reduzir o custo da análise, reduz a probabilidade de erros 
quantitativos. 
 
REFERÊNCIAS 
BRUICE, P. Y. Química Orgânica. 4ª.ed. v.2. São Paulo, SP: Pearson Prentice Hall, 
2006. 
 
BRUM, A. A. S; L. F. ARRUDA; M. A. B. REGITANO-D´ARCE. Métodos de extração 
e qualidade da fração lipídica de matérias-primas de origem vegetal e animal. 
Química Nova, São Paulo, vol. 32, n. 4, p.849-854, 2009. 
 
CECCHI, H. M. Fundamentos teóricos e práticos em análise de alimentos. 2ª. ed. – 
Campinas, SP; Editora Unicampi, 2003. 
 
NELSON, D. L.; COX, M. M. Princípios De Bioquímica De Lehninger. 6ª.ed. Porto 
Alegre, RS: Artmed, 2014. 
 
PINHEIRO, D. M.; PORTO, K. R. A.; MENEZES, M. E. S. A química dos alimentos: 
carboidratos, lipídeos, vitaminas e minerais. Maceió: EDUFAL, 2005. 52 p. 
Disponível em: <http://www.usinaciencia.ufal.br/multimidia/livros-digitais-cadernos-
tematicos/A_Quimica_dos_Alimentos.pdf>. Acesso em: 09/04/2019. 
 
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS - UNICAMP. Tabela brasileira de 
composição de alimentos - TACO. 4. ed. rev. e ampl.Campinas: UNICAMP/NEPA, 
2011. 161 p. Disponível em: 
<http://www.unicamp.br/nepa/taco/tabela.php?ativo=tabela> Acesso em: 16/04/19. 
http://www.usinaciencia.ufal.br/multimidia/livros-digitais-cadernos-tematicos/A_Quimica_dos_Alimentos.pdf
http://www.usinaciencia.ufal.br/multimidia/livros-digitais-cadernos-tematicos/A_Quimica_dos_Alimentos.pdf
http://www.unicamp.br/nepa/taco/tabela.php?ativo=tabela