ÁGAR CHOCOLATE PRINCÍPIO

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ÁGAR CHOCOLATE PRINCÍPIO 
Meio de Ágar Chocolate é amplamente utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes, embora cresçam neste meio quase todos os tipos de microrganismos. � À base do meio, é adicionado sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes. 
Observação: se utilizar sangue de carneiro ou coelho no lugar do sangue de cavalo, adicionar os suplementos a base de NAD (coenzima I) e cisteína após resfriar a base achocolatada à aproximadamente 50ºC.
 UTILIDADE 
Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp. 
FÓRMULA / PRODUTO 
 -Meios comerciais: BHI Ágar *, Columbia Ágar Base, Blood Ágar Base, Mueller Hinton Ágar. 
-Sangue de cavalo, carneiro ou coelho desfibrinado. 
-Recomenda-se o uso da base de BHI Ágar, por apresentar melhor crescimento das cepas exigentes, principalmente cepas de Haemophilus spp.
 PROCEDIMENTOS 
-Pesar e hidratar o meio conforme instruções do fabricante; 
-Esterilizar em autoclave; 
-Esfriar a base à temperatura de aproximadamente 80ºC; 
-Adicionar 5 ml de sangue desfibrinado de cavalo para cada 100 ml de base; 
-Homogeneizar bem até lisar totalmente as hemácias e o meio apresentar uma cor castanho escuro (chocolate); 
-Distribuir em placas de Petri de 90 mm de diâmetro. CONTROLE DE QUALIDADE 
-Crescimento bom a excelente: Haemophilus influenzae ATCC 10211. 
CONSERVAÇÃO E VALIDADE 
Conservar de 4 a 10°C por 4 meses.
 INOCULAÇÃO 
-Estriar a superfície do meio, usando a técnica de semeadura para isolamento; 
- Incubar a 35ºC por 24 horas.
 INTERPRETAÇÃO 
-Cor original do meio: castanho escuro (chocolate). 
-Colônias de tamanho pequeno a médio, com pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp, Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. 
- Colônias pequenas e delicadas, com pigmento creme claro: sugestivo de Haemophilus spp. RECOMENDAÇÕES
 Lembrar que é um meio rico e crescem vários tipos de microrganismos. Mod IV - 7 
- Fazer esfregaço de todas as colônias suspeitas e corar pela técnica de Gram, para confirmar se trata-se ou não de Neisseria spp., Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp. (cocos Gram negativos reniformes) ou Haemophilus spp. (bacilos Gram negativos delicados e pleomérficos). -Não usar sangue de cavalo vencido. 
-Por ser um meio rico, o crescimento a partir de materiais biológicos em geral costuma ser abundante. Sempre que necessário, isolar a colônia em estudo para os procedimentos de identificação, para não correr o risco de trabalhar com cepas misturadas.