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Sumário 
Microscopia ..................................................................................................................................................... 3 
Microscópio óptico composto (MO) .............................................................................................................. 3 
Preparação de amostras para microscopia óptica ........................................................................................ 3 
Corantes básicos ......................................................................................................................................... 4 
Corantes ácidos ........................................................................................................................................... 4 
Coloração negativa ...................................................................................................................................... 4 
Coloração simples........................................................................................................................................ 4 
Colorações diferenciais ................................................................................................................................ 4 
Coloração de Gram ...................................................................................................................................... 4 
Coloração acidorresistente ........................................................................................................................... 5 
Técnica de coloração de Ziehl-neelsen ........................................................................................................ 6 
Coloração negativa para cápsulas ............................................................................................................... 6 
Coloração para endósporos (esporos) ......................................................................................................... 6 
Coloração dos flagelos ................................................................................................................................. 7 
Microscópio de campo escuro ...................................................................................................................... 7 
Microscópio de contraste de fase ................................................................................................................. 7 
Microscopia de contraste com interferência diferencial (CID) ....................................................................... 8 
Microscopia de fluorescência ....................................................................................................................... 8 
Microscopia confocal .................................................................................................................................... 8 
Microscopia de dois fótons (MDF) ................................................................................................................ 9 
Microscopia acústica de varredura (MAV) .................................................................................................... 9 
Microscopia eletrônica ................................................................................................................................. 9 
Microscópio eletrônico de transmissão (MET) ............................................................................................ 10 
Microscópio eletrônico de varredura (MEV)................................................................................................ 10 
Nomes científicos .......................................................................................................................................... 11 
 
 
 
Microscopia 
Microscópio óptico composto (MO) 
Possui uma série de lentes. 
Luz visível – fonte de iluminação. 
Ampliação: 
Obtida quando os raios de luz de um 
iluminador – fonte de luz passa através de 
um condensador que possui lentes que 
direcionam os raios de luz através da 
amostra. 
A seguir, os raios de luz passam para as 
lentes objetivas, as lentes mais próximas 
da amostra. 
Imagem da amostra: Ampliada novamente 
pelas lentes oculares, ou simplesmente 
objetivas. 
_____________________________________ 
Preparação de amostras para microscopia 
óptica 
 
Fixação  Coloração. 
Esfregaço. 
Filme delgado de material contendo 
microrganismos. 
Espalhado sobre a superfície de uma 
lâmina. 
Lâmina 
Fixada pela passagem – 5x – sobre a chama 
de um bico de Bunsen. 
Lado do esfregaço para cima. 
Recobre a lâmina com metanol por um 
minuto. 
Coloração é aplicada, então, lavada com 
água. 
Depois lâmina é seca com papel 
absorvente. 
Cor dos corantes 
Corantes básicos – Está no cátion 
Corantes ácidos – Está no ânion. 
Bactérias são levemente carregadas 
negativamente em pH 7, 
Cátion colorido em um corante básico é 
atraído pela célula bacteriana carregada 
negativamente. 
Corantes básicos 
 
Mais utilizados que os corantes ácidos. 
_____________________________________
_ 
Corantes ácidos 
Não são atraídos pela maioria dos tipos de 
bactérias 
 
_____________________________________ 
Coloração negativa 
 
Preparação de bactérias incolores contra um 
fundo colorido. 
Observação de: 
Formas da célula, 
Tamanhos, 
Cápsula. 
Distorções no tamanho e na forma da célula 
são minimizadas já que a fixação e coloração 
não são necessária. 
_____________________________________ 
Coloração simples. 
Objetivo primário destacar todo o 
microrganismo, para que as formas celulares e 
as estruturas básicas fiquem visíveis. 
Solução aquosa ou alcoólica de um único 
corante básico  Destaca todo o 
microrganismo. 
Mordente: 
Substância química que adicionada à 
solução para intensificar a coloração. 
Aumenta afinidade de uma coloração por 
uma amostra biológica. 
Revesti uma estrutura para torná-la mais 
espessa. 
Corantes simples: 
Azul de metileno 
Carbolfucsina 
Cristal violeta 
Safranina. 
 
_____________________________________ 
Colorações diferenciais 
Reagem de forma diferente com diferentes 
tipos de bactérias – podem ser utilizadas para 
realizar a distinção entre elas. 
 
_____________________________________ 
Coloração de Gram 
 
Contracorantes 
Corantes como safranina. 
Possuem uma cor contrastante com a 
coloração primária. 
 
Bactérias gram-positivas 
Violeta – azulada. 
Destruídas mais facilmente por penicilinas e 
cefalosporinas. 
Cristal 
violeta
Azul de 
metileno
Verde de 
malaquita 
Safranina
Eosina
Fucsina 
ácida 
Nigrosina
Coloração de 
gram
Coloração 
acidorresistente
Possuem parede celular de peptideoglicano 
mais espessa (dissacarídeos e 
aminoácidos) do que as bactérias gram-
negativas. 
Bactérias gram-negativas 
Rosa – vermelha 
Mais resistentes - antibióticos não podem 
penetrar a camada de lipopolissacarídeo. 
Contêm uma camada de lipopolissacarídeo 
(lipídeos e polissacarídeos) como parte de 
sua parede celular.
 
_____________________________________ 
Coloração acidorresistente 
Se liga fortemente apenas às bactérias que 
apresentam material ceroso em suas paredes 
celulares. 
Identificação de todas as bactérias do gênero 
Mycobacterium 
Mycobacterium tuberculosis - 
Tuberculose 
Mycobacterium leprae - Hanseníase 
Nocardia – bactériaas aeróbicas, gram-
positivas, parcialmente álcool-ácido 
resistentes, filamentosas e ramificadas 
(Beaman & Beaman 1994). 
Processo 
 
 
 
Corante vermelho 
carbolfucsina 
•Aplicado a um esfregaço 
fixado
Lâmina é aquecida 
levemente por vários 
minutos
Lâmina é resfriada e 
lavada com água.
Esfregaço é tratado com álcool-ácido
•Descolorante
•Remove o corante vermelho das bactérias que 
não são acidorresistentes.
Esfregaço corado 
com o 
contracorante
•Azul de metileno.
Técnica de coloração de Ziehl-neelsen 
Permite visualizarmicobactérias - grupo restrito 
de bactérias que possuem sua parede celular 
constituída de grande concentração de lipídeos, 
devido à presença de ceras e ácidos graxos 
(ácidos micólicos). 
 
Microrganismos acidorresistentes 
Retêm a cor vermelha ou rosa 
Carbolfucsina – mais solúvel nos lipídeos da 
parede celular do que no álcool-ácido 
Células não acidorresistentes 
Azuis após a aplicação do contracorante. 
BAAR (BACILOS ÁLCOOL-ÁCIDO 
RESISTENTES) 
Bacilos álcool-ácido resistentes, 
Se coram em vermelho pelo método de Ziehl-
Neelsen, sendo representados pelo 
Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium 
leprae. 
_____________________________________ 
Colorações especiais 
 
______________________________________ 
Coloração negativa para cápsulas 
Cápsula - Cobertura gelatinosa. 
Demonstração da presença de uma cápsula é 
modo de determinar virulência do organismo. 
Coloração da cápsula – Mais difícil do que outros 
procedimentos de coloração. 
Materiais capsulares são solúveis em água e 
podem ser desalojados ou removidos durante 
a lavagem rigorosa. 
Demonstração de cápsulas 
Mistura de bactérias em uma solução 
contendo uma fina suspensão coloidal de 
partículas coradas geralmente com 
Tinta da Índia ou nigrosina  A fim de 
fornecer um fundo contrastante e assim 
corar as bactérias com uma coloração 
simples como safranina. 
Devido à composição química, as cápsulas não 
reagem com a maioria dos corantes, como a 
safranina. 
Aparecem como halos circundando cada 
célula bacteriana. 
 
_____________________________________ 
Coloração para endósporos (esporos) 
 
Endósporo – Estrutura resistente, dormente. 
Formada dentro de uma célula que protege a 
bactéria de condições ambientais adversas. 
Relativamente incomuns nas células 
bacterianas – Podem ser formados por alguns 
gêneros de bactérias. 
Coloração 
negativa para 
cápsulas
Coloração para 
endósporos 
(esporos)
Coloração dos 
flagelos
Não podem ser corados pelos métodos 
comuns. 
Coloração de endósporos de Schaeffer-
Fulton mais comum para endósporos 
Processo: 
 
Endósporos são altamente refráteis: 
Podem ser detectados utilizando microscópio 
óptico quando não corados 
Sem uma coloração especial não podem ser 
diferenciados das inclusões de material 
armazenado. 
_____________________________________ 
Coloração dos flagelos 
Flagelos bacterianos - Estruturas de 
locomoção muito pequenas para serem vistas 
ao microscópio óptico sem coloração. 
Mordente é o corante carbolfucsina. 
Aumenta os diâmetros dos flagelos até que 
eles se tornem visíveis ao microscópio óptico 
Número e o arranjo dos flagelos é auxiliar de 
diagnóstico. 
_____________________________________ 
 
 
 
Microscópio de campo escuro 
 
Análise de microrganismos vivos – 
Invisíveis ao microscópio óptico comum que 
não podem ser corados pelos métodos 
tradicionais, ou que são tão distorcidos pela 
coloração que suas características não 
podem ser identificadas. 
Utilizada para examinar microrganismos não 
corados suspensos em líquido. 
Aplicação da microscopia de campo escuro: 
Análise de espiroquetas muito finas – 
Treponema pallidum – causador da sífilis. 
_____________________________________ 
Microscópio de contraste de fase 
 
Estruturas internas se tornam mais 
nitidamente definidas. 
Permitindo um exame detalhado dos 
microrganismos vivos. 
Não é necessária fixação: 
Fixar os micróbios à lâmina microscópica ou 
coloração da amostra poderia distorcer e 
destruir os microrganismos. 
_____________________________________ 
 
Verde malaquita
•Coloração primária
•Aplicado a um esfregaço 
fixado com calor e aquecido 
em vapor por cerca de 
cinco minutos.
Preparação é lavada por 
cerca de 30 segundos com 
água
•Remove o verde malaquita 
de todas as partes da célula
•Exceto dos endósporos. 
Safranina
•Contracorante, é aplicada 
ao esfregaço para corar as 
porções da célula que não 
os endósporos. 
Endósporos aparecem 
em 
•Verde dentro de células 
vermelhas ou rosadas.
Microscopia de contraste com interferência 
diferencial (CID) 
Resolução de um microscópio CID - Maior 
que a de um microscópio de contraste de fase. 
Imagem: Em cores brilhantes e quase 
tridimensional. 
 
____________________________________ 
Microscopia de fluorescência 
Usa fluorescência – Capacidade das 
substâncias de absorverem curtos 
comprimentos de onda (ultravioleta) e 
produzirem luz em um comprimento de onda 
maior (visível). 
Se a amostra não fluorescer naturalmente, 
Pode ser corada com um grupo de corantes 
fluorescentes – fluorocromos 
Aplicação da microscopia de fluorescência: 
Técnica diagnóstica – técnica do anticorpo 
fluorescente (AF), ou imunofluorescência 
Detectar bactérias e outros microrganismos 
patogênicos 
Mesmo dentro de células, tecidos ou 
outras amostras clínicas. 
Imunofluorescência – Diagnóstico da sífilis 
e da raiva. 
 
______________________________________ 
Microscopia confocal 
 
Técnica na microscopia óptica – Reconstrói 
imagens tridimensionais. 
Amostras são coradas com fluorocromos para 
que emitam, ou devolvam, a luz. 
Microscópios confocais são utilizados em 
conjunto com computadores para construir 
imagens tridimensionais. 
Os planos examinados de uma amostra, que 
lembram um arquivo de imagens - São 
convertidos a um formato digital 
Pode ser utilizado por um computador para 
construir uma representação tridimensional. 
As imagens reconstruídas podem ser movidas e 
visualizadas em qualquer orientação. 
Técnica usada para obter imagens 
tridimensionais de células inteiras e de 
componentes celulares 
 
 
 
_____________________________________ 
Microscopia de dois fótons (MDF) 
Amostras são coradas com fluorocromo. 
Forma imagens de células em detalhes somente 
a uma espessura menor que 100 μm; 
Comprimento de onda mais longo tem menor 
probabilidade de formar o oxigênio singleto 
que danifica as células. 
Utilizada - rastrear a atividade das células em 
tempo real. 
Células do sistema imune foram observadas 
respondendo a um antígeno. 
 
______________________________________ 
Microscopia acústica de varredura (MAV) 
Resolução é de cerca de 1 μm. 
Utilizada: Estudo de células vivas aderidas a 
outra superfície, como células cancerígenas, 
placas ateroscleróticas e biofilmes bacterianos 
que 
obstruem equipamentos 
 
_____________________________________ 
Microscopia eletrônica 
Objetos menores do que 0,2 μm, como vírus ou 
estruturas internas de células devem ser 
analisados com um microscópio eletrônico. 
Utiliza Feixe de elétrons. 
 
Mitocondria. 
______________________________________ 
Microscópio eletrônico de transmissão 
(MET) 
 
Feixe de elétrons precisamente focalizado, 
Oriundo de um canhão de elétrons passa 
através de um corte ultrafino da amostra, 
especialmente preparado 
Amostra normalmente é colocada sobre tela de 
cobre. 
A imagem final – microfotografia eletrônica de 
transmissão 
Aparece como muitas áreas iluminadas e 
escuras, dependendo do número de elétrons 
absorvidos pelas diferentes áreas da amostra 
 
______________________________________ 
Microscópio eletrônico de varredura (MEV) 
 
Fornece imagens tridimensionais notáveis das 
amostras 
Utilizada – Estudo de estruturas de superfície 
de células intactas e vírus. 
Imagem final – microfotografia eletrônica de 
varredura 
. 
 
 
Nomes científicos 
Dois nomes 
Itálico 
Sublinhados – discursivo 
1 
Gênero 
Sempre iniciado maiúscula 
2 
Epíteto específico 
Nome das espécies 
Sempre letra minúscula. 
 
Após um nome científico ser mencionado 
uma vez 
Pode ser abreviado com a inicial do 
gênero seguida pelo epíteto específico 
Staphylococcus aureus 
S. aureus 
____________________________________