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MAPA/SDA/CGAL 
Laboratório Nacional Agropecuário - LANAGRO/RS 
Laboratório de Análises para Classificação Vegetal 
Método de Ensaio – MET 
Código: MET LACV/10/03/01 
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Emissão: 30/05/2014 
DETERMINAÇÃO DE PROTEINA BRUTA – Método Kjeldahl Mo dificado 
 
 
 
1 Escopo 
 
Determina o teor de proteína em farinhas, grãos e cereais coadjuvantes, cujo parâmetro está 
relacionado à qualidade do produto segundo a Instrução Normativa nº 8, de 02/06/2005 que 
aprova o Regulamento Técnico de Identidade e Qualidade da Farinha de Trigo. 
 
2 Fundamentos 
 
Método Kjeldahl modificado onde o CuSO4 é usado como catalisador. O método determina o 
nitrogênio total em material livre de nitrato em farinhas, grãos e cereais coadjuvantes. A 
amostra é digerida em H2SO4 e o N é convertido em NH3, a qual é destilada e titulada. 
 
3 Reagentes, padrões e materiais 
 
� H2SO4, Ácido Sulfúrico concentrado (95-98%); 
� Padrão H2SO4, 0,1 N; 
� NaOH, Hidróxido de Sódio 50%; 
� NaOH, Hidróxido de Sódio 0,1N; 
� Pastilha catalítica (K2SO4 + CuSO4 + 5H2O) ou Mistura Catalítica; 
� Papel indicador 
� Solução de Vermelho de Metila 0,2%; 
� Papel manteiga livre de nitrogênio; 
� Frascos Kjeldahl com capacidade adequada; 
� Frasco Erlenmeyer, capacidade 300 mL; 
� Barra magnética; 
� Buretas ou Dispensador de 50 mL. 
 
4 Equipamentos 
 
� Balança analítica; 
� Bloco Digestor; 
� Destilador de Nitrogênio; 
� Agitador magnético. 
 
5 Precauções analíticas 
 
� Controle de qualidade do procedimento: 
- a cada uso verificar o estado de calibração da balança analítica; 
- a cada uso verificar a temperatura do bloco digestor; 
- o item de ensaio deve ser ensaiado em duplicata. 
- controlar a digestão com papel indicador 
 
� As condições ambientais devem atender o POP LACV/03. 
� A área de digestão e destilação deve estar provida de adequada ventilação e exaustão. 
� A alíquota de trabalho do item de ensaio deve ser mantida em frasco de vidro, 
hermeticamente fechado com o número de protocolo correspondente ao registro do produto 
até o término dos ensaios. 
 
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DETERMINAÇÃO DE PROTEINA BRUTA – Método Kjeldahl Mo dificado 
 
 
 
� Usar luvas descartáveis, óculos de segurança e jaleco. 
 
� O sulfato de cobre é recomendado como catalizador devido ao menor grau de 
insalubridade com relação ao mercúrio e ao selênio ou seus compostos. 
� As amostras desclassificadas e com análise complementar devem ser tratadas conforme a 
IT LACV/08. 
 
6 Procedimentos 
 
� Pesar em duplicata 0,5 g da amostra em tubo de digestão (a amostra pode ser pesada em 
papel livre de N para prevenir a aderência nas paredes do tubo). 
� Adicionar 1 pastilha catalíticas ou 3,5 g da mistura catalítica e 10 mL de ácido sulfúrico 
concentrado. 
� Aquecer os tubos no bloco digestor, gradativamente, até 100ºC por 30. 
� Elevar a temperatura a 240º C por 30 minutos, após elevar a temperatura até 380ºC 
� Em todas as etapas de elevação da temperatura observar se não haverá transbordamento 
da amostra caso contrário diminuir a temperatura e reiniciar a elevação da temperatura, 
gradativamente, até que a amostra se estabilize e que a fumaça branca e clara apareça no 
bulbo do balão. 
� Proceder à digestão por 90 minutos. 
� Controlar a completa digestão com papel indicador. 
� Adicionar 2 – 3 gotas de silicone para reduzir a formação de espuma, se necessário. 
� Após a digestão resfriar os tubos, aproximadamente, 15 min, adicionando pequena porção 
de água destilada para não cristalizar. 
� Adicionar lentamente 25 mL da solução de NaOH 50% e 25 mL de água deionizada, 
conectar ao condensador. 
� Em frasco de 300 mL adicionar 25 mL de H2SO4 0,1N, adicionar 50 mL de água destilada 
e imergir a ponta do tubo do condensador na solução receptora. 
� Ferver até a completa destilação da amônia, recolhendo no mínimo 75 mL do destilado. 
� Titular o destilado com solução de NaOH 0,1N usando vermelho de metila como indicador 
(VL). 
� Correr e titular uma prova em branco (VB). 
 
7 Resultados 
 
- Para o cálculo do resultado se considera a média das duplicatas. 
 
% Proteína = (VB - VL) x N x 1,4007 x f 
 PA (g) 
 
 
 Deve ser expresso em base seca: % Proteína em base seca = % Proteína x 100 
 100 – Umidade% 
 
 
 
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Onde: 
VB = mL gastos de NaOH 0,1N na titulação da prova branco; 
VL = mL gastos de NaOH 0,1N na titulação da amostra; 
N = normalidade da solução de NaOH usado na titulação; 
1,4007= peso molecular do Nitrogênio em miligramas; 
F = 5,70 = fator de conversão de nitrogênio para farinha de trigo; 
PA = peso da amostra. 
 
Exemplos de fatores empíricos de conversão de nitrogênio: 
 
 
Os dados brutos dos ensaios devem ser registrados no Anexo - Ficha de Análise do POP 
LACV/02 “Informe de Resultados” específica à matriz. 
Os resultados dos ensaios devem ser emitidos no Anexo - Laudo de Análise do POP LACV/02 
“Informe de Resultados” específico à matriz. 
 
8 Arquivamento dos registros 
 
As Fichas de Análises de Classificação devem ser arquivadas na pasta FICHAS/LACV. 
Os Laudos de Classificação devem ser arquivados na pasta LAUDOS/LACV. 
 
9 Referências 
 
BRASIL. MAPA - Instrução Normativa nº 8, de 02/06/2005 que aprova o Regulamento Técnico 
de Identidade e Qualidade da Farinha de Trigo. 
BRASIL. MAPA - Instrução Normativa nº 31 de 18/10/2005; AACC Method 46-13. 
AACC 46-11 A, Crude Protein- Improved Kjeldahl Method, Copper Catalyst Modification. 
Alimento Fator 
Empírico 
Alimento Fator 
Empírico 
Farinha de centeio 5,83 Farinha de trigo 5,70 
Farinha de Soja 6,25 Amendoim 5,46 
Aveia 5,83 Castanha do Pará 5,46 
Cevada 5,83 Arroz 5,95 
Coco 5,30 Gelatina 5,55 
Outros alimentos 6,25 
 
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AOAC Internacional. 1996. Official Methods of analysis of AOAC, 16th ed. 2nd rev.Method 
984.13. 
 
 
 
 
 
10 Anexos 
 
Não aplicável. 
 
11 Alterações 
 
Alterado o item 7 Resultados: inclusão do cálculo em base seca, registro de dados e emissão 
de resultados adequada ao escopo. 
 
12 Responsabilidades 
 
O Responsável Técnico é responsável por assegurar que de todo o pessoal que utilizar o MET 
tenha sido treinado e habilitado para sua execução e que esteja sendo corretamente seguido. 
 
 
 
 
 
Elaboração/Revisão: Aprovação: Verificação: 
Marta Severo - LACV 
Letícia Fonseca - LACV 
Neusa Luiza Perizzollo - LACV 
João Mathias Becker - LACV Juliana Kich - UGQ 
Data: 16/05/2014 Data: 30/05/2014 Data: 30/05/2014