Resumo 4 Imunologia

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Resumo Imunologia
Aula 4
Ensaios de imunoprecipitação
Teste usado para detectar Ac específicos em fluídos corporais;
 Formação de Imunocomplexo permite a visualização do teste; 
Vantagens: Boa especificidade, e fácil execução;
As técnicas de Imunoprecipitação permitem identificar e até quantificar precipitados resultantes da interação antígeno-anticorpo, ambos inicialmentesolúveis;
 Ocorre sedimentação.
 Fatores interferentes:
São utilizados meios líquidos e meios gelificados (fácil leitura e redução de volumes utilizados, mas aumento o tempo para haver interação).
Materiais usados
· Placas depetri, laminasou placas de poliestireno contendo o gel que conterá o Ag;
· Gel composto por agarose (mais comum) 
· O gel é preparado na placa e colocado o Ag ou Ac (perfuração). E se difundiração, onde os Ac ou Ag se encontrarem ocorre a precipitação (zona de precipitação)---LINHA, indicando a positividade da amostra
Imunodifusão
· Baseia-se na difusão de substâncias solúveis por movimentos moleculares ao acaso em meio gelificado; 
· Enquanto as moléculas estão livres continua havendo difusão, até que se formam imuno complexos de elevado peso molecular e que devido ao tamanho, fica imimobilizados no gel, permitindo a visualização nítida do imunocomplexo como turvação (imunoprecipitado).
· Simples – um dos componentes (Ag ou Ac) está fixado no gel enquanto o outro migra para formar o imunocomplexo;
· Dupla – ambos os componentes (Ag ou Ac) migram simultaneamente, um em direção ao outro; 
· Linear ou unidimensional – com o movimento direcionado para uma direção por corrente elétrica ou pela gravidade e forma de aplicação; 
· Radial – com o movimento ao acaso em todas as direções, a partir do orifício no qual se coloca a amostra.
Imunodifusão simples e linear
· Ac é incorporado ao meio gelificado e a mistura é colocada em um tuboatéatingircercade40mmdealtura. 
· Após gelificação, coloca-se o Ag no topo da coluna, em concentração superior ao Ac, para induzir a difusão.
· Os tubos são selados em mantidos a temperatura constante.
· Após uma semana, os tubos são observados quanto à formação da linha de precipitação na área de equivalência.
· A concentração do Ag é proporcional à espessura da linha de ppt e à distância percorrida pelo Ag até formar o imunocomplexo.
Linear 
Imunodifusão Simples Radial
•[Ac] padronizada é incorporada ao meio gelificado. 
•O Ag se difunde no meio de acordo com seu tamanho molecular e encontra o Ac imobilizado no gel, formando o imunocomplexo. 
•Dependendo do tamanho da molécula e de sua concentração não haverá mais difusão, independente do tempo. 
•O coeficiente de difusão das moléculas é variável (IgM até 96h; IgG 24hparamigração). 
•O diâmetro (D) do halo formado é medido, e a área desse halo é diretamente proporcional à[Ag].
Imunodifusão Dupla Radial
Ambos os componentes, Ag e o Ac, difundem-se radialmente em todas as direções, a partir de orifícios no meio gelificado, e se encontram formando linhas ou arcos de precipitação correspondentes aos imunocomplexos;
O método é semiquantitativo, de baixa sensibilidade, requerendo o uso de extratos antigênicos em concentração elevada (mg/dL) e soros policlonais de elevada avidez
Eletroforese é a migração de partículas carregadas em um solvente condutor sob a influência de um campo elétrico. Ânodo(+) e Cátodo(-).
Suportes para eletroforese: papel de filtro, acetato de celulose, gel de ágar ou agarose e poliacrilamida 
Fatores atuam na migração: carga, tamanho, forma, concentração, força iônica, pH do solvente, temperatura e a intensidade do campo elétrico.
Imunoeletroforese
· Combina eletroforese e difusão dupla em meio gelificado; 
· Permite a discriminação de um número maior de componentes da mistura de um extrato antigênico ou material biológico, utilizando a especificidade dos anticorpos para cada uma das subfrações por diferenças na carga elétrica. 
• É um método qualitativo que permite a caracterização de proteínas com confiabilidade, detectando anormalidades estruturais (padrão de mobilidade) e alterações nas concentrações (espessura do arco). Para isso, é necessário usar uma amostra padrão para fins comparativo. 
• USO: diagnóstico de gamopatias (mieloma múltiplo)
A caracterização das substâncias é feita pelas características eletroforéticas (mobilidades diferentes devido a cargas e pela difusibilidade (velocidade diferente de difusão do antígeno devido à concentração e ao tamanho da molécula).
· Os Ag são separados pela aplicação de uma corrente e eletrica;
· Moléculas+ migram para o eletrodo negativo e viceversa;
· Uma caneleta é preenchida como Ac que difundem e formam os arcos de precipitação.
Mieloma múltiplo
Câncer de um tipo de células da medula óssea chamadas de plasmócitos, responsáveis pela produção de anticorpos. No mieloma múltiplo, os plasmócitos são anormais e se multiplicam rapidamente, comprometendo a produção das outras células do sangue. Por isso, os pacientes podem ter anemia e ficam sujeitos a infecções.