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estar entre 30 e 300. Erros na contagem (pág 137) Se o período de incubação for pequeno as células depositadas no meio sólido não originarão colônias a uma mesma velocidade, gerando um número abaixo do real. OBS: a contagem de viáveis é frequentemente expressa em termos de unidades formadoras de colônia, obtidas em vez de número de células viáveis (uma unidade formadora de colônias pode conter uma ou mais células). Medidas indiretas do crescimento microbiano: turbidez (pág 138) Uma suspensão celular tem aspecto turvo porque as células dispersam a luz que atravessa a suspensão. Quanto maior o número de células presentes, maior a quantidade de luz dispersa, portanto mais turva a suspensão. A turbidez pode ser medida com o auxílio de um fotômetro ou de um espectrofotômetro. Cultura contínua: o quimiostato (pág 138) O quimiostato é um dos equipamentos mais usados para obtenção de culturas contínuas; controla a densidade populacional e a taxa de crescimento da cultura. Dois fatores são importantes no controle de um quimiostato: a taxa de diluição e a concentração de um nutriente limitante. A taxa e a eficiência de crescimento podem ser controladas de como independente em um quimiostato, pelo ajuste da taxa de diluição e pela variação da concentração limitantes, respectivamente. Usos experimentais de um quimiostato (pág 140) Uma vantagem prática do quimiostato é o fato de a população poder ser mantida na fase exponencial de crescimento por longos períodos; uma vez que células em fase exponencial são desejáveis em experimentos fisiológicos, a utilização do quimiostato permite a obtenção desse tipo de célula a qualquer momento. Efeitos ambientais no Crescimento microbiano Temperaturas cardeais (pág 141) Cada organismo apresenta uma temperatura mínima (abaixo da qual é incapaz de crescer), ótima (em que o crescimento ocorre rapidamente) e uma temperatura máxima (acima da qual o crescimento torna-se impossível). A essas três temperaturas damos o nome de temperaturas cardeais, geralmente características de cada tipo de organismo. Classes térmicas de organismos (pág 142) Refere-se a temperaturas ótimas de crescimento: Psicrófilos =om ótimo situado em baixas temperaturas Mesófilos =com ótimo em temperaturas medianas Termófilos = com ótimo em altas temperaturas Hipertermófilos =com ótimo correspondendo a T muito elevadas. Microrganismos psicrófilos e psicrotolerantes (pág 143) Os psicrófilos correspondem a um grupo de organismos cuja T ótima de crescimento situa-se de 15oC ou inferior, temperatura máxima situada abaixo de 20oC e mínima de 0oC. Os psicrotolerantes são capazes de crescer a 0oC, mas com ótimo entre 20oC e 40oC. Crescimento microbiano em altas temperaturas (pág 145) A vida microbiana acontece muito facilmente em ambientes de altas temperaturas, inclusive em água fervente, acima de 650C, apenas as formas de vida procarióticas sobrevivem, mas mesmo nessa T, uma enorme diversidade de bactéria e Archea é encontrada. Crescimento microbiano em pH baixo ou alto (pág 147) A maioria dos ambientes naturais apresenta valores de pH variando entre 5 e 9, sendo os organismos cuja faixa de pH corresponde a esses valores os maus comuns. Apenas algumas espécies são capazes de crescer em pHs inferiores a 2 ou superiores a 10. Organismos que crescem em pHs baixos são considerados extremófilos, sendo denominados acidófilos; os fungos tendem a ser mais tolerantes que as bactérias. Existem bactérias que são acidófilas obrigatórias, porem o grande problema desse tipo de organismo é que se levado a um pH próximo a neutralidade, a membrana citoplasmática se dissolve e as células morrem em decorrência de sua lise, sugerindo que altas concentrações de íons hidrogênio são necessárias à estabilidade. pH intracelular (pág 148) Embora alguns microrganismos necessitem de valores de pH específicos para seu crescimento, o pH ótimo representa apenas o meio externo, o pH intracelular deve permanecer próximo a neutralidade, evitando a destruição de macromoléculas sensíveis aos ácidos ou bases. Efeitos osmóticos no crescimento microbiano Atividade de água, osmose e halófilos(pág 148) A atividade de água (aw) corresponde à razão entre a pressão de vapor do ar em equilíbrio com uma substancia ou solução em relação à pressão de valor da água pura. No processo de osmose, a água se difunde a partir de uma região onde está em alta concentração (baixa concentração de soluto) para uma região de menos concentração (maior concentração de soluto). Na maioria dos casos, o citoplasma apresenta concentrações de soluto superiores às do meio externo, um estado chamado equilíbrio aquoso positivo, com a água tendendo a entrar na célula. Organismos halotolerantes suportam certo grau de redução na aw ambiental. Solutos compatíveis (pág 149) Quando um organismo cresce em um meio com baixa aw , esta pode ser obtida do meio ambiente ou pelo aumento da concentração de solutos internos. O soluto utilizado no interior da célula, para o ajuste da atividade de água citoplasmática, não deve ser inibitório aos processos químicos intracelulares, tais compostos são denominados solutos compatíveis. Oxigênio e crescimento microbiano (pág151) • Aeróbios: capazes de crescer em grandes tensões de oxigênio • Microaerófilos: são aeróbios que utilizam o O2 apenas quando este se encontra em níveis inferiores ao do ar, devido a sua capacidade limitada de respirar. • Aeróbio facultativo: podem crescer tanto na presença quanto na ausência de oxigênio. • Anaeróbios: não são capazes de respirar oxigênio. • Anaeróbios aerotolerantes: toleram e crescem na presença de O2 embora sem utilizá-lo. • Anaeróbios obrigatórios: são inibidos ou mortos na presença de O2. Formas tóxicas do oxigênio (pág 152) O oxigênio é um poderoso oxidante e um excelente aceptor de elétrons durante a respiração. Em seu estado normal, o O2 é referido oxigênio tripleto(3O2). Uma das principais formas tóxicas é denominada oxigênio singleto (1O2); outras formas tóxicas incluem o ânion superóxido (O2-) o peróxido de hidrogênio (H2O22) e o radical hidroxil (OH). Enzimas que destroem o oxigênio tóxico (pág 153)