Roteiro de aula prática - células vegetais

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Roteiro de aula prática 
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Extração de DNA de células vegetais 
 
Material 
 
 1 cebola grande (+/- 200g) 
 3 g de sal de cozinha (NaCl) 
 10 ml de detergente neutro 
 Álcool etílico 95% gelado 
 Gelo 
 Papel filtro, Tubos de ensaio, funil, balança, banho maria a 60˚C 
 
Metodologia 
 
1) Pique a cebola em pedaços pequenos, bata no liquidificador e reserve 25g. 
2) Prepare 100ml da solução de extração (ou de lise) misturando 3g de sal + 10 ml 
de detergente, e complete com água destilada até 100 ml. 
3) Junte a cebola com a solução de extração em um frasco e deixe em banho-maria 
a 60˚C durante 15 minutos. Em seguida resfrie colocando o recipiente em gelo. 
4) Coe a mistura em papel filtro e recolha o filtrado em um tubo de ensaio. 
5) Despeje delicadamente o etanol 95% gelado no tubo de ensaio. 
 
O DNA aparece como uma “névoa” precipitando-se no etanol onde é insolúvel, 
ficando preservado e visível. 
 
Questões a serem discutidas no relatório: 
1) Quais são as funções do detergente e do sal na solução de lise? 
2) Por que a amostra homogeneizada deve ser incubada a 60˚C? 
3) O que ocorre quando o etanol gelado é adicionado na amostra? 
4) Por que a solubilidade do DNA é diferente na água e no etanol se os dois solventes 
são polares?