ENTENDENDO AS AULAS PRATICAS DE MICROBIOLOGIA I

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ENTENDENDO AS AULAS PRATICAS DE MICROBIOLOGIA I
Aula pratica – coloração de gram:
Objetivos: aprender a técnica de coloração de gram; identificar a classificação de gram das 4 culturas pré-estabelecidas (A, B, C e D); classificar a morfologia das culturas (identificação da parede celular, de acordo com o tipo tem a gram positivo com coloração violeta e a gram negativa com coloração roxa). Através da microscopia optica de 1000x , observou-se a cultura D como gram negativa e as outras gram positivas. Posteriormente, tentou-se identificar cocos e bacilos, a A era gram negativa e tinha morfologia bacilos. A B e C era gram negativa e tinha morfologia bacilos é um tipo de enterobacterias (ex: salmonela). A D era gram positiva de morfologia cocos em arranjos de caixo de uva, portanto de classificação de estafilacocos. 
Aula pratica - meios de cultivos diferenciais e seletivos: 
A diferença entre selecionar (cresce ou não, através do meio de cultivo que impedi o crescimento de um tipo de bactéria e favorece o crescimento de outra) e diferenciar (crescimento de formas diferentes).
Objetivos: introduzir teorias de cultivo, isolamento e identificação presuntiva de diferentes espécies bacterianas. E introduzir o conceito de “meio seletivo” e “meio diferencial”. 
O BHI não é diferencial e nem seletivo, é usado para somente ter o crescimento bacteriano. 
A inoculação acontecia por esgotamento dividindo o meio de inoculação em três tipos. 
Obs: cepa, quantidade de células idênticas dentro de um mesmo meio. 
O MacConkey, meio que consegue selecionar e diferenciar através do componentes cristal violeta que impede o crescimento das bactérias gram positiva. Uma segunda característica desse meio é que ele contem lactose e algumas bactérias tem a enzima lactase e vai quebrar a lactose e mudar a cor do meio, por exemplo se a coloração é rosa muda para amarelo. Portanto, se cresceu é gram negativa e se mudou de cor é classificada pela presença de lactase chamada de lac + .
O Manitol é um sal, meio inverso do maccokey, favorece o crescimento de gram positiva e impedi o crescimento gram negativa. Ele é do tipo seletivo e diferencial. Se a bactéria crescer nesse meio e mudar de cor é dito que a bactéria é do tipo Stafilacocos aurus.
A cultura C estava contaminada. 
O E M B, meio seletivo para bactéria ennterobacterias (salmonela, ecoli e outros bacilos gram negativos). Especifico para cultura de Ecoli, quando cresce nesse meio ela fica verde, mudando a cor da cultura e não do meio. 
Por fim, afirmou-se que na cultura A...
Já na cultura B era gram negativa de morfologia bacilo e seu crescimento se deu no e m b, que por conclusão que ela é bactéria ECOLi. A bactéria C é gram negativa e morfologia bacilo e seu crescimento se deu no BHI, MACCOKEY E E M B, concluindo que é uma enterobacteria. Já na D, é gram positiva, estafilococos e seu crescimento se da no BHI e manitol, concluindo que é staphylococus aurus. 
Aula pratica - identificação de cocos gram positivos (ESTUDAR PELO RELATORIO)***
Objetivos: identificar cocos gram positivos através de provas bioquímicas (prova de catalase, teste de coagulase e teste de hemolisina). 
Identificação de cocos gram positivos: 5ª cultura E; a D já sabemos que era sthapilacocos aurus. Poderia ser staphylacoccus, estreptococos ou enterobacterias. 
A partir dos testes identificamos os tipos que poderia ser.
1º teste: prova da catalase - peroxido de hidrogênio (agua oxigenada), colocou a bactéria. E quanto ela tem a enzima catalase quebra a agua oxigenada em agua e gas oxigênio. H2O2 H2O + O2 (g). ou seja, será observado bolhas, se tiver a produção de bolha a catalise é positiva e se não tiver é negativa. Resultando em catalise negativa. As bactérias que dão negativas são, streptococos ou enterobacterias.
A D deu catalise positivo é um staphilococus.
2º teste: teste da coagulase – placa de inoculação de agar sangue. Com o plasma sanguíneo, inoculou-se no D e E. Porem no E não ia dar positivo, ou seja, ia dar branco sempre negativo. O plasma sanguíneo foi inoculado e depois de 4 horas se a bactéria D for capaz de coagular ela é do tipo de stafilococus aurus.
 O outro teste que comprovam o estafilacocos aurus é esse e o crescimento de agar manitol.
 A E foi feito o cultivo no agar sangue, e observou-se a hemólise branda é classificada como alfa e a hemólise severa beta. Streptococos é hemolítica em alfa ou beta e stafilacocos é não hemolítica. A E produziu hemólise, porem não sabia dizer se era beta ou gama, porem após 48 horas pareceu alfa hemolítica. A E então era estreptococos. 
Aula pratica: identificação de bacilos gram negativos
A, B e C.
B é ecoli.
Caracterização da família enterobacterias: são bacilos gram negativos, não esporulados, com motilidade variável, oxidase negativos, e que crescem em meios básicos (caldo peptona), meios ricos (agas sangue e agar chocolate), meios seletivos (maccokey e e m b). são anaeróbios facultativos (crescem em aerobiose e anaerobiose), fermentam a glicose com ou sem produção de gas, são catalse positivos e reduzem nitrato a nitrito. 
Objetivo: realização de testes de identificação de enterobacterias de importância medica: semeadura em meio macconkey (não vamos inocular de novo, pode usar a foto de quando fizemos – a finalidade desse teste é determinar a capacidade de im microrganismo de hidrolisar a lactose incorporada...), semeadura em meio EPM (quatro resultados: produção ou não de gas CO2; produção ou não de o enxofre, se tiver o meio fica preto; hidrolise da ureia, se ela ficar azul; e desaminação da triptofano será positiva se for verde escuro ou negativa se não tiver nenhuma alteração) e semeadura em meio mili (motilidade, indol e lisina). 
A finalidade é descobrir o tipo de bactéria da A e C.