QUESTÕES RESPONDIDAS-LABORATÓRIO DE PRÁTICAS FUNCIONAIS

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Perguntas do 
Roteiro 
 
Respostas 
 
1) As enzimas são 
moléculas 
proteicas que 
sofrem 
influência de 
vários fatores. 
Quais fatores 
influenciam na 
atividade 
enzimática? 
 
 
 
 Diversos fatores alteram a velocidade de uma reação enzimática, 
entre eles temos a concentração do substrato no estado de transição, 
variações no pH do meio em que a enzima se encontra e a elevação da 
temperatura. Enquanto aumentos da concentração do substrato no 
estado de transição elevam a velocidade da reação; as variações do pH do 
meio em que as enzimas se encontram e as elevações da temperatura 
provocam a desnaturação da enzima, diminuindo a velocidade da 
reação. 
2) Por 
que alterações 
de temperatura
 podem afetar 
a atividade 
enzimática? 
 
 
 
Seguindo o comportamento das reações químicas, a velocidade da 
atividade enzimática aumenta quando se aumenta a temperatura. 
Entretanto, a velocidade da reação aumenta até um máximo, após 
determinada temperatura a velocidade declina rapidamente, mesmo 
aumentando a temperatura. Isso ocorre por que a estrutura 
tridimensional das enzimas se rompe, impossibilitando-a de formar o 
complexo enzima-substrato. Pode-se dizer que a velocidade de reação 
aumenta ou diminui por um fator de 2 a cada variação de 10 graus 
centígrados na faixa de 10° a 70°. 
 
3) Cada enzima 
apresenta 
atividade 
máximo em um
 determinado 
pH. O 
que significa 
dizer que 
as enzimas 
possuem um 
pH ótimo? 
Como o pH 
interfere na 
atividade 
enzimática? 
 
PH ÓTIMO: cada enzima tem um pH ótimo de atuação onde sua atividade 
é máxima. Dependendo da sua localização e atuação, diferentes enzimas, 
precisam de diferentes níveis de pH. 
Está relacionada com o estado de ionização de resíduos de aminoácidos 
da enzima que são essenciais à catálise. Dados de biologia estrutural e 
experimentos de mutação sítio-dirigida, ou seja, cada a.a. presente nos 
sítios exige um pH para que haja atividade enzimática, sendo o pH um 
limitador.  
 
4) O que 
é sítio ativo da 
enzima? 
 
 
 
As enzimas apresentam especificidade notável diante dos substratos e 
produtos. Esta especificidade é muito maior que a da maioria dos 
catalisadores químicos. Isso quer dizer que uma dada enzima catalisa uma 
única reação das várias que um único substrato pode sofrer. Essa 
especificidade é determinada estreita relação que existe entre a estrutura 
da molécula enzimática e suas propriedades biológicas: provavelmente, 
apenas uma fração (denominada sítio ativo) da molécula é responsável 
pela ligação da enzima ao (s) substrato (s). 
 
 
 
5) O que significa 
desnaturação 
enzimática e 
quais situações 
podem 
ocasionar 
isso? 
 Desnaturação enzimática 
é qualquer modificação na conformação (estrutura secundária, terciária o
u quartenária) sem rompimento das ligações peptídicas envolvidas na 
estrutura primária. As estruturas são mantidas por interações fracas e 
por isso são facilmente quebradas quando expostas a calor, ácidos, sais o
u álcool. À perda da estrutura tridimensional chama-se desnaturação. 
 
A estrutura nativa de uma proteína é uma entidade bem definida, com 
coordenadas estruturais para cada um dos átomos da molécula, o mesmo 
não ocorre com a estrutura desnaturada. 
A desnaturação é um fenômeno no qual 
o estado inicial bem definido de uma proteína formada sob condições 
fisiológicas é transformado em uma estrutura final 
mal definida sob condições não fisiológicas, usando-se 
um agente desnaturante. Não envolve nenhuma mudança química na 
proteína. 
 
Reversível ou irreversível 
Depende das ligações que estabilizam sua conformação, da intensidade e 
do tipo de agente desnaturante. 
Desnaturação pelo calor: irreversível. 
Desnaturação por uréia: comumente reversível. 
 
Agentes de desnaturação 
 Físicos: 
 temperatura, pressão hidrostática, cisalhamento. 
 Químicos: 
 Alterações de pH, solventes orgânicos, solutos orgânicos. 
 
 
6) O que significa 
dizer que uma
 enzima é 
específica para 
determinado 
substrato? 
 
 
 
 E é nesse ponto que devemos destacar mais uma característica que 
faz das enzimas moléculas tão interessantes: elas 
apresentam especificidade notável diante dos substratos e produtos. Esta 
especificidade é muito maior que a da maioria dos catalisadores 
químicos. Isso quer dizer que uma dada enzima catalisa uma única reação 
das várias que um único substrato pode sofrer. Essa especificidade é 
determinada estreita relação que existe entre a estrutura da molécula 
enzimática e suas propriedades biológicas: provavelmente, apenas uma 
fração (denominada sítio ativo) da molécula é responsável pela ligação da 
enzima ao (s) substrato (s). Diante disso, Emil Fischer propôs, em 1894, 
a hipótese da chave e fechadura, que diz que a especificidade de uma 
enzima (fechadura) e do seu substrato (chave) provém da 
complementaridade das respectivas formas. 
 
 
 7) 
Quais enzimas auxili
am no diagnóstico d
o dano cardíaco, he
 A insuficiência circulatória aguda provoca alterações celulares que pode
m variar desde discretas perdas de algumas propriedades da membrana a
té a morte celular. Algumas enzimas auxiliam no diagnóstico de dano 
cardíaco como aspartato aminotranferase, a mioglobina, 
a creatina quinase, a desidrogenase láctica, as troponinas, entre outras, 
 
pático e pancreático
? 
 
 
e têm sido identificadas como marcadores de lesão cardíaca. Os marcado
res são a expressão bioquímica da lesão das fibras cardíacas, 
mas não indicam a etiologia do processo. 
 
Aspartato aminotransferase - AST 
Aspartato aminotransferase, antes denominada de 
transaminase glutâmico oxalacética (TGO) está presente nas fibras 
musculares esqueléticas e cardíacas, nos parênquimas hepático, 
pancreático e renal, nos eritrócitos e no sistema nervoso central. 
A referência a esta enzima possui caráter histórico por ter sido a primeira 
enzima utilizada para diagnóstico de pacientes com infarto do miocárdio. 
Seu uso com esta finalidade foi abandonado em razão do surgimento de 
outros marcadores mais sensíveis e mais específicos.. 
 
Creatina quinase total e isoenzimas - CK 
A creatina quinase é enzima composta pela união de duas subunidades 
do tipo B e/ou M, em três combinações possíveis, 
que correspondem às isoenzimas CK-BB, CK-MB e CK-MM. 
Cada uma delas possui atividade preponderante em algum tecido ou 
órgão específico: 
 
- isoenzima CK-BB: próstata, útero, 
placenta, tiróide, cérebro e musculatura lisa; 
- isoenzima CK-MB: 1% da CK total em músculo esquelético e 
45% em músculo cardíaco; 
- isoenzima CK-MM: 99% da CK total em músculo esquelético e 
55% em músculo cardíaco. 
 
A determinação da creatina quinase total não é mais recomendada para o 
diagnóstico de infarto do miocárdio, por causa da ampla distribuição nos 
tecidos, resultando em baixa especificidade. A isoenzima MB é uma 
opção adequada, especialmente se a dosagem de uma das troponinas 
não estiver disponível. Esta isoenzima possui elevadas sensibilidade e 
especificidade para o diagnóstico de lesão do músculo cardíaco. Em geral, 
são realizadas três determinações seriadas num período de 9 a 12 horas. 
Se as três dosagens estiverem dentro dos intervalos de referência, o 
diagnóstico de infarto pode ser excluído. Preferencialmente, deve-se 
realizar a dosagem da massa de proteína correspondente à isoenzima 
(CK-MB massa) e não da atividade enzimática. 
 
A concentração da CK-MB se eleva de 3 a 8 
horas após o processo lesivo, atinge um pico em 24 horas 
e normaliza em 72 a 96 horas após um episódio único e limitado. 
A intensidade da elevação se correlaciona com o volume 
de tecido lesado e com o prognóstico. 
 
O intervalo de referência para a isoenzima CK-MB, avaliada pela massa, é 
de até 5ng/mL de soro. 
 
Desidrogenase láctica total e isoenzimas - DHL 
Tendo em vista sua ampla distribuição em diferentes tecidos,resultando 
 
em baixa especificidade, 
a determinação da atividade da desidrogenase láctica total não é mais 
recomendada para 
o diagnóstico ou acompanhamento do paciente com lesão cardíaca. 
 
Mioglobina 
A mioglobina é uma proteína constituinte das células dos músculos 
esquelético e cardíaco. A determinação no soro pode ser útil para 
descartar o diagnóstico de infarto agudo do miocárdio, uma vez que 
possui elevado valor preditivo negativo. Por ser uma proteína presente 
no citoplasma e de baixo peso molecular, é liberada para a circulação 
precocemente após lesão isquêmica da fibra miocárdica. Concentrações 
elevadas são observadas 1 a 2 horas após o início da dor, atingindo o pico 
em 12 horas e, em geral, normalizando 24 horas após um episódio único. 
Esta curva contribui para que a determinação seriada seja útil no 
diagnóstico de re-infarto em pacientes com dor precordial recorrente. 
Elevação de mioglobina circulante não é específica de lesão cardíaca, 
ocorrendo no trauma da musculatura esquelética e na insuficiência renal, 
por exemplo. Os métodos de dosagem mais amplamente utilizados 
incluem turbidimetria e nefelometria, sendo o limite de referência até 
0,15 µg/mL de soro. 
 
Troponinas - cTnT e cTnI 
Troponinas são proteínas estruturais envolvidas no processo de 
contração das fibras musculares esqueléticas e cardíacas. 
O complexo troponina é composto por três proteínas: troponina T, 
troponina I e troponina C. Como existem diferenças antigênicas entre 
as troponinas dos músculos esqueléticos e cardíacos, o uso de anti-
soros específicos permite a identificação e quantificação de cada uma 
delas. As troponinas T (cTnT) e I 
(cTnI) são consideradas como os marcadores bioquímicos mais específico
s e sensíveis para o diagnóstico de lesão isquêmica do miocárdio. 
 
A elevação dos níveis de cTnI no soro ocorre entre 4 e 6 
horas após a dor precordial, atinge um pico em 12 horas 
e permanece elevada por 3 a 
10 dias após um evento isquêmico único. Ocorre um segundo pico de 
menor intensidade, entre o terceiro e o quarto dia após o infarto. 
 
Uma diferença significativa entre as troponinas e a isoenzima CK-MB é 
que esta só se eleva após lesão isquêmica irreversível, enquanto as 
troponinas, por terem menor peso molecular e 
por apresentarem uma fração livre 
no citoplasma celular, são liberadas mesmo em situação de isquemia 
reversível, caracterizada clinicamente por angina instável. 
 
Os estudos realizados em grupos específicos de pacientes com dor 
precordial e avaliados nas primeiras 24 
horas, descreveram maior índice de diagnóstico de eventos cardíacos 
quando o critério era a elevação da troponina T, mesmo com CK-MB 
dentro dos intervalos de referência. 
 
 
As troponinas podem ser dosadas no soro por imunoensaios com anticor
pos monoclonais dirigidos contra sítios antigênicos específicos e são consi
derados como limites de referência, para a troponina T a concentração de 
0,1ng/mL e para a troponina I, 0,26ng/mL. Insuficiência renal 
terminal, insuficiência cardíaca congestiva, sepse, miocardite, taquicardia 
supra-ventricular 
e mixedema podem se acompanhar de elevações dos níveis séricos de 
troponinas. 
 
Importância da coleta seriada de amostras 
Os resultados das dosagens dos níveis sangüíneos dos marcadores 
cardíacos são altamente dependentes do tempo decorrido entre o início 
dos sintomas e a coleta da amostra. Considerando o fato de que os 
pacientes são atendidos em tempos variados após o início do evento 
isquêmico, independentemente do marcador em questão, devem ser 
coletadas amostras seriadas, em geral, na admissão, 3, 6 e 9 horas. A 
necessidade de coletas seriadas se impõe, mesmo em se tratando de 
marcadores com elevada especificidade, como a cTnI, uma vez que 
existem outras condições, além do infarto agudo do miocárdio, que 
podem se associar à variações na sua concentração no sangue. Dosagens 
seriadas de cTnI, resultados do eletrocardiograma e a condição clínica são 
necessários para o diagnóstico diferencial entre infarto agudo do 
miocárdio e outras doenças cardíacas. 
 
Como nenhum dos marcadores possui todas as características desejáveis, 
a NACB - National Academy of Clinical 
Biochemistry propõe o uso de dois marcadores para 
o diagnóstico de infarto agudo do miocárdio: 
a mioglobina, como marcador precoce e uma das troponinas (cTnI ou cTnI
) como definitivo. 
 
 
 
 
Enzimas Marcadoras da Função Pancreática 
Amilase 
 Enzima da classe das hidrolases que catalisa a hidrólise do amido e 
glicogênio ingeridos na dieta. A amilase sérica é secretada, 
fundamentalmente, pelas glândulas salivares (forma S) e células acinares 
do pâncreas (forma P). Por meio do ducto pancreático chega ao duodeno. 
No intestino, a amilase hidrolisa os carboidratos em seus componentes, 
os açúcares. Havendo uma lesão das células acinares (como na 
pancreatite) ou ocorrendo uma obstrução no fluxo do ducto pancreático 
(como no carcinoma pancreático), a amilase fluirá para o sistema linfático 
intra-pancreático e peritônio e, por drenagem, atingirá os vasos 
sanguíneos. Outras fontes potenciais de amilase sérica são os órgãos de 
reprodução e o fígado. A amilase tem massa molecular entre 40.000 e 
50.000 daltons e é facilmente filtrada pelo glomérulo renal. 
 
Hiperamilasemia 
 
Pancreatite aguda: os níveis de amilasemia aumentam após 2-12 h 
do início do episódio de dor abdominal que é constante, intenso e 
de localização epigástrica com irradiação posterior para o dorso. 
A atividade amilásica retorna ao normal entre o terceiro e o quarto 
dia. Os valores máximos são quatro a seis vezes maiores do 
que os valores de referência e são atingidos entre 12-72 h. A magnitude 
da elevação não se correlaciona com 
a severidade do envolvimento pancreático e também cerca de 20% 
dos casos de pancreatite podem apresentar amilase normal. 
 
Amilase Urinária 
 A hiperamilasúria (quase sempre) é um reflexo das elevações séricas da 
amilase. Como os rins filtram rapidamente a amilase sanguínea, as 
doenças pancreáticas provocarão um consequente aumento da amilase 
urinária. Enquanto os níveis de amilase sérica regridem mais rapidamente 
para os valores de referência, os níveis de amilase na urina permanecem 
elevados por mais tempo (5 a 7 dias) após o início dos sintomas. Este 
dado é muito importante para o diagnóstico de pancreatite em pacientes 
cujos sintomas permanecem por 3 dias ou mais. Assim, amilase urinária 
está frequentemente aumentada na pancreatite, atingindo valores mais 
elevados e que persistem por períodos maiores. 
8) 
Qual enzima é 
utilizada para 
o diagnóstico de 
intoxicação por 
agrotóxicos 
organofosforados? 
 
 
-Colinesterase (CHE).  
-Pseudocolinesterase (sCHE).  
 
Referências: https://www.ufrgs.br/alimentus1/pao/ingredientes/ing_enzimas_ativida
de.htm 
 
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/enzimas.htm 
 
https://www.cesadufs.com.br/ORBI/public/uploadCatalago/1128361602
2012Bioquimica_aula_10.pdf 
 
https://www.fleury.com.br/medico/artigos-cientificos/marcadores-
bioquimicos-de-lesao-cardiaca 
 
https://d3eaq9o21rgr1g.cloudfront.net/aula-
temp/212878/00000000000/curso-45170-aula-00-
v1.pdf?Expires=1599081777&Signature=e22Vh-
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Ep9Ds78RtbHbRZT3q0UsMnN5HwT8bA5wIE10OakSHg__&Key-Pair-
https://www.ufrgs.br/alimentus1/pao/ingredientes/ing_enzimas_atividade.htm
https://www.ufrgs.br/alimentus1/pao/ingredientes/ing_enzimas_atividade.htm
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/enzimas.htm
https://www.cesadufs.com.br/ORBI/public/uploadCatalago/11283616022012Bioquimica_aula_10.pdfhttps://www.cesadufs.com.br/ORBI/public/uploadCatalago/11283616022012Bioquimica_aula_10.pdf
https://www.fleury.com.br/medico/artigos-cientificos/marcadores-bioquimicos-de-lesao-cardiaca
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