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AMOSTRAS CLÍNICAS EM MICROBIOLOGIA AIM5
Lara Parente
FASES DO CICLO DIAGNÓSTICO
● Fase Pré-analítica: vai desde a coleta da amostra, seu transporte até o
laboratório. Perfaz 60% a 70% do sucesso do diagnóstico, sendo a mais
importante.
● Fase Analítica: fase laboratorial propriamente dita. Perfaz 20% a 30% do
diagnóstico.
● Fase Pós-Analítica: laudo. 10% do diagnóstico.
FASE PRÉ-ANALÍTICA
COLETA
● Realizada no local real da infecção;
● Obtenção de uma quantidade suficiente de amostra;
● Utilização de dispositivos apropriados para a coleta do material;
● Obtenção de cultura antes da administração de antibióticos;
● Identificação do material.
TRANSPORTE
● Não tem como objetivo estimular a multiplicação microbiana, mas tem a função
de conservar as células coletadas vivas.
SERINGA:
o Exsudatos frescos ou amostras líquidas: procedimento válido para
amostras enviadas para análise logo após a coleta. Ex: punção.
FRASCOS:
o Frascos de boca larga com sistema de fechamento eficiente contra
vazamento e contaminação de material.
SWAB:
o Algodão estéril;
o Rayon ou Dracon;
o Alginato de cálcio;
o Solução salina, meio de cultura de conservação Amies, Stuart e Clairy
Blair.
FASE ANALÍTICA
SELEÇÃO DE MEIOS DE CULTURA PRIMÁRIOS
Não são seletivos, ou seja, permitem crescer tudo aquilo que está na amostra
original.
TRANSFERÊNCIA E CULTURA DAS AMOSTRAS CLÍNICAS;
INTERPRETAÇÃO DAS CULTURAS E ANÁLISE DOS RESULTADOS.
MEIOS DE CULTURA:
o Destinados para a reprodução, isolamento e análise dos
microrganismos de interesse médico.
o Compostos por:
▪ Hidrolisados de proteínas: fontes de carbono e nitrogênio;
▪ Carboidratos;
▪ Tampões;
▪ Enriquecimento;
▪ Inibidores;
▪ Indicadores de pH;
▪ Ágar: agente solidificante;
▪ Substratos para ação enzimática.
NÃO SELETIVOS
primários, em que normalmente permite-se crescimento de uma
quantidade de microrganismos maior que estejam presentes na amostra
clínica original. Ex: Ágar Chocolate, Ágar Sangue, Ágar Cled, Ágar
Mueller-Hinton.
SELETIVOS
o selecionam grupos microbianos específicos ou gêneros ou espécies.
Ex: Ágar Manitol, Ágar MacConkey, Ágar Salmonella/Shigella, Ágar
Sabouraud; Ágar Bili-Esculina, Ágar Dnase; Ágar TSI; Ágar Lowestein
Jensen.
CALDOS
o forma líquida dos meios de cultura. Caldo Tetrionato, Caldo Selenito,
Caldo Nitrato, Caldo Malonato, Caldo Triptona e SIM, Caldo BHI.
PARA TRANSPORTE E CONSERVAÇÃO
o Ágar nutriente, salina tamponada, Clary Blair, Meio Stuart, Água
peptonada.
● Uso de corantes biológicos análises microscópicas
o Coloração de Gram;
o Coloração ácido resistente;
o Coloração fluorescente (UV) – fluorocromos (Ag/Ac);
o Laranja de acridina;
o Azul de Toluidina (biópsia de pulmão e secreções respiratórias).
FASE PÓS-ANALÍTICA
● Emissão de laudos Em caso de resultado conclusivo;
● Repetição da coleta Em caso de amostra inadequada ou resultados
inconclusivos;
● Orientação de novas técnicas Se a solicitação do médico foi feita para uma
técnica não adequada para o microrganismo em questão, o farmacêutico pode
orientar que o clínico solicite outros exames complementares.
PRINCÍPIOS (SUCESSO DO DIAGNÓSTICO)
● Semeadura primária adequada
● Boa qualidade das amostras
● Seleção dos meios de cultura
● Metodologias a serem aplicadas
● Seleção da temperatura, tempo e atmosfera de incubação.
OBS: Guias de solicitação (slides 19 a 21)
MATERIAL CLÍNICO
● Urina, fezes, escarro, lavado brônquico, líquor, esperma, fragmentos de
tecidos, biópsias, líquidos orgânicos e secreções em geral.
COLETA E TRANSPORTE
● Meio de transporte/acondicionamento e/ou frascos adequados (material e
exame solicitado).
o Frascos: escarro, fezes, urina
o Swab:
▪ Com carvão: gonococcos, hemófilos, pneumococos.
▪ Stuart ou Amies: bactérias aeróbias e anaeróbias facultativas.
▪ Meio Cary-Blair: fezes (enteropatógenos)
o Meio de transporte pré-reduzido: anaeróbios.
o Meio TSA em tubos: laboratório referência
TEMPO CRÍTICO PARA ENTREGA DE AMOSTRA AO LABORATÓRIO E OS DIFERENTES MEIOS DE
TRANSPORTE
● Líquor imediatamente (não refrigerar)
● Líquido pleural imediatamente (não refrigerar)
● Swab imediatamente (não refrigerar)
● Suspeita de anaeróbios 30 minutos.
● Feridas e tecidos 30 minutos de ou até 12 horas a depender do meio de
transporte
● Hemocultura 30 minutos (não refrigerar)
● Trato respiratório 30 minutos.
● TGI 1h
● Urina 1h ou até 24h se refrigerada
● Fezes (não é parasitológico, mas para cultura de fezes) 12h se em meio de
transporte.
AMOSTRAS NÃO RECOMENDADAS PARA O EXAME MICROBIOLÓGICO POR FORNECEREM RESULTADOS
QUESTIONÁVEIS
● Deve processar biópsia ou ser aspirado:
o Swab de amostra de queimadura
o Swab de úlcera de decúbito
o Swab de abscesso perirretal
o Swab de lesão periodontal
o Swab de úlcera varicosa
● Não processar:
o Vômito
o Material de colostomia
o Ponta de cateter de Foley
o Aspirado gástrico de recém-nascido.
“AULA PRÁTICA”
Objetivo: realizar coleta e processamento inicial de amostras das fossas nasais para
observação de colônias crescidas em meios sólidos e identificação microbiana.
● Coleta de amostra clínica das fossas nasais com auxílio de swab
● Semeadura nos meios de cultura Agar sangue (não seletivo, diferencial) e Agar
Manitol (seletivo para espécies de staphylococcus, diferencial).
● Observar o crescimento microbiano nestes diferentes meios de cultura.
RESULTADOS:
Ágar sangue diferencial e enriquecido. Determina o tipo de hemólise. Crescimento
de colônias com beta (total), gama (sem) ou alfa (parcial) hemólise.
Ágar manitol seletivo e diferencial. Seleciona Staphylococcus que crescem em
altas concentrações de sal. Crescimento de colônias com características de coagulase
positiva ou coagulase negativa.
o S. aureus quando cresce neste, é capaz de metabolizar o manitol,
produzindo ácido que interage com o indicador de pH contido no
meio de cultura, que altera a cor do meio para AMARELA. Outros
Staphylococcus são brancos.
Ágar MacConkey meio de cultura seletivo (bactérias gram negativas) e diferencial
(fermentadoras de lactose das que não são). Cultivo de urina. Colônicas vermelhas
indicam fermentação de lactose e brancas indicam que não houve fermentação.
o Quando uma bactéria degrada a lactose, produz um ácido que vai
interagir com um vermelho neutro (indicador de pH), tornando as
colônias vermelhas.
Ágar CLED Isola e quantifica microrganismos gram positivos, gram negativos e
leveduras. Cultivo de urina.
● Quando a bactéria degrada a lactose, ela produz um ácido que interage
com um indicador chamado de Azul de Bromotimol tornando o meio
amarelo.