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COLORAÇÃO GRAM --> Criado por um médico dinamarquês - 1884 Melhor coletar a amostra ada base da lesão e não muito superficialmente para evitar o excesso de leucócitos da superfície - --> Preparação do esfregaço em lâminas de vidro para microscopia, preferencialmente da porção mais purulenta/sanguinolenta da amostra --> Importante método de coloração em laboratórios de microbiologia e análises clínicas --> Comumente é o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias --> A bactéria Gram + consegue reter o corante cristal violeta por terem uma camada de peptidoglicano mais espessa. ETAPAS 1. Preparação da amostra na lâmina Nas bactérias Gram + o corante irá se aderir à camada de peptidoglicano - Nas bactérias Gram - o corante irá se depositar superficialmente na membrana externa - 2. aplicação do corante primário sobre a lâmina--> Cristal violeta ou Violeta genciana ou Violeta de metila 3. Aguardar 1 mim e passar um filete de água sobre a lâmina 4. Tratar com fixado ou mordente --> Lugol 5. Aguardar 1 mim e passar um filete de água sobre a lâmina Irá descolorir apenas as bactérias Gram -- 6. Aplicação de um solvente orgânico --> etanolacetona 7. Aplicação do corante secundário --> a fucsina básica ou safranina Página 1 de Coloração Gram EXEMPLOS Cocos Gram-positivos: Staphylococcus sp., Streptococcus sp., Enterococcus sp.; - Cocos Gram-negativos: Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Moraxella catarrhalis; - Bacilos Gram-positivos: Listeria monocytogenes; Nocardia sp. ; Bacillus anthracis, Corynebacterium diphtheriae; - Bacilos Gram-negativos: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Proteus sp., Salmonella sp., Shigella sp., Enterobacter sp., Serratia sp., Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumanii, Campylobacter sp., Helicobacter sp.; Legionella sp.; Bordetella sp.; Brucella sp.; Haemophilus sp. - LIMITAÇÕES --> Fornece um diagnóstico presuntivo/preliminar --> Raramente permite a identificação bacteriana a nível de gênero, sendo ainda mais improvável inferência de espécies; --> Necessita de um grande número/concentração de patógenos na amostra para uma melhor sensibilidade; --> Baixa acurácia em espécimes clínicas que possuem naturalmente alta presença de flora bacteriana normal (ex.: fezes, swab orofaríngeo e retal, pele); --> Alguns microrganismos não se coram adequadamente pelo Gram (ex.: Treponema pallidum, espécies de Legionella, Mycoplasma e Mycobactérias). Página 2 de Coloração Gram
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