Espectrofotometria: O que é e como funciona?

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Fonte: Loja Roster/ Shimadzu / Biosystems 
1 Espectrofotometria 
 
Espectrofotometria 
A espectrofotometria é uma 
tecnologia utilizada para realizar 
análises em diversas áreas do 
conhecimento. Essa técnica apresenta 
informações referentes à interação de uma 
luz incidente sobre determinada amostra. 
Mas afinal o que é espectrofotometria? 
Acompanhe para entender melhor. 
O que é espectrofotometria? 
A espectrofotometria mede o quanto uma 
substância absorve de luz no momento de 
incidência de um feixe através de uma 
determinada amostra. A técnica é baseada na 
ampliação consequente da energia em 
função do aumento da radiação incidida. Ao 
absorver a energia em forma de fótons, os 
elétrons de um composto químico se excitam 
gerando uma transição elétrica de uma órbita 
com menor energia para outra mais alta. 
O tipo e a forma de interação de um 
composto com a luz dependem da 
concentração da matéria contida na amostra 
e da espessura da solução. A radiação pode 
interagir com um composto de três formas. 
São elas: 
1. Espectrofotometria de absorção 
Esse tipo de espectrofotometria, relaciona a 
energia absorvida com o comprimento de 
onda da luz incidente. 
2. Espectrofotometria de emissão 
Nela é analisada a quantidade de energia 
transmitida por um material com relação ao 
comprimento de onda da radiação absorvida. 
3. Espectrofotometria de espalhamento 
Determina a energia dispersa em função do 
comprimento de onda, ângulo de incidência 
e de polarização da luz incidente. 
Nesse sentido, cada composto químico 
apresenta um comportamento de interação 
com a luz, podendo ser medido por 
equipamentos denominados 
espectrofotômetros que podem ser de 
diversos tipos. Veja abaixo o que são 
espectrofotômetros e suas aplicações. 
Mas que é um espectrofotômetro? 
É um equipamento utilizado para medir a 
energia absorvida por uma amostra e 
compará-la com uma medida padrão. Dessa 
forma, é capaz de quantificar a concentração 
de diversas soluções, sendo aplicado em 
áreas distintas como bioquímica, análises 
clínicas, biologia molecular, química e 
física. 
O espectrofotômetro demonstra de maneira 
quantitativa o quanto uma solução está mais 
concentrada que outra por meio de sua 
interação com a luz. Nesse sentido, a 
 
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2 Espectrofotometria 
intensidade da cor se refere à concentração 
de moléculas absorventes da luz. Para saber 
mais como um espectrofotômetro funciona, 
prossiga com a leitura. 
Como funciona um espectrofotômetro? 
A luz é uma forma de radiação 
eletromagnética que apresenta 
características de onda e partícula. Quando 
há um aumento da radiação incidida, ocorre 
a ampliação da energia no composto 
químico que recebe a luz. Parte da luz 
lançada sobre a amostra é absorvida e outra 
é transmitida. 
Nesse contexto, podemos inserir alguns 
termos como a absorbância, que se refere a 
quantidade de luz absorvida e a 
transmitância que é parte da luz transmitida. 
A radiação que incide na amostra sempre 
será superior a que é transmitida. Dessa 
forma, quanto maior for a concentração do 
material, maior será a absorção de luz e 
menor a transmitância. A lei de Lambert-
Beer afirma que a absorbância é 
proporcional à concentração de soluto em 
uma amostra desde que o material apresente 
baixas concentrações, não ocorra reações 
durante a análise e o experimento seja feito 
através de um único comprimento de onda. 
 
Com isso, um espectrofotômetro precisa 
produzir uma luz monocromática, com um 
único comprimento de onda, e necessita ser 
capaz de detectar de forma sensível à 
quantidade de luz absorvida nesse 
comprimento de onda. O valor detectado 
deverá ser passado para um computador ou 
leitor digital através de números. 
Independente do tipo do aparelho, para 
funcionar dessa forma, o espectrofotômetro 
necessita basicamente de alguns 
componentes essenciais. Conheça abaixo 
quais são eles. 
 
1. Fonte de luz 
Responsável pela luz incidente sobre a 
amostra. 
2. Monocromador 
Dispositivos que transformam a luz com 
vários comprimentos de onda, em um único 
feixe. 
3. Detector 
Aparato que detecta a luz que passa pela 
amostra. 
4. Amostra 
Material que deseja ser analisado 
5. Cubeta 
Recipiente utilizado para armazenar o 
material durante a análise. Basicamente, o 
funcionamento de um espectrofotômetro 
consiste em utilizar uma luz incidente e 
torná-la em um único comprimento de onda 
 
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3 Espectrofotometria 
que incide sobre uma amostra, identificando 
posteriormente a quantidade luminosa que 
passa pelo material durante a leitura. 
Há outros tipos de espectrofotômetros 
disponíveis e específicos para determinadas 
aplicações. Leia e entenda quais são os 
principais e para qual finalidade são 
indicados. 
Tipos de espectrofotômetros 
Até aqui, falamos bastante sobre o 
espectrofotômetro mais comum e usado em 
laboratórios. Contudo, há outros tipos que 
são utilizados em aplicações específicas. 
Veja abaixo quais são os principais. 
1. Espectrofotômetro UV-Visível 
Como já citado, mede a intensidade de 
absorção de luz ultravioleta e visível que 
atravessa uma determinada amostra. É o 
mais popularmente encontrado em 
laboratório e, em geral, supre as 
necessidades desses ambientes. 
 
2. Espectrofotômetro Infravermelho 
Esse instrumento é capaz de quantificar a 
absorção de luz infravermelha em um 
material de análise. Necessita de uma fonte 
de luz infravermelha contínua e um 
transdutor infravermelho sensível. 
É aplicado na determinação quantitativa e 
qualitativa de espécies moleculares e 
também está envolvido na análise da 
estrutura de espécies orgânicas e 
bioquímicas. 
 
3. Espectrofotômetro de absorção atômica 
É usado para analisar quantitativamente 
elementos metálicos em solução e envolve a 
medida da absorção da intensidade da 
radiação eletromagnética de uma luz 
primária, por átomos no estado fundamental. 
É composto por uma fonte de atomização e 
um conjunto monocromador, detector e 
processador. A atomização pode ser feita em 
chama, através de vapor a frio e em forno de 
grafite. 
 
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4 Espectrofotometria 
 
Conhecer um pouco da teoria desses 
equipamentos é essencial para compreender 
os resultados obtidos e operá-los de uma 
forma eficiente. Contudo, é primordial saber 
utilizá-los na prática. Para saber como 
utilizar esses aparelhos, acompanhe a leitura. 
Como usar um espectrofotômetro? 
A utilização de um espectrofotômetro é 
bastante simples. Para utilizá-lo é preciso 
primeiramente selecionar o comprimento de 
onda adequado na qual deseja realizar a 
análise. Após isso, é necessário definir qual 
parâmetro se deseja receber como resultado 
e também realizar a primeira leitura em uma 
amostra padrão. Depois, basta analisar a 
amostra desejada e obter os resultados sobre 
ela. 
Alguns fatores precisam de atenção ao 
utilizar o espectrofotômetro como evitar 
segurar nos lados transparentes da cubeta, 
com o objetivo de não prejudicar a leitura 
por possíveis resíduos, além de fechar a 
tampa da amostra sempre que for realizar 
uma leitura, já que a radiação nessa faixa é 
prejudicial aos olhos. 
O espectrofotômetro é um equipamento 
muito importante para diversas análises, 
sendo o espectrofotômetro UV/VIS o mais 
utilizado no ambiente laboratorial, sendo 
capaz de suprir a maioria das necessidades 
desse local.