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Patologia Clínica Veterinária (aula1) ● Tem objetivo de auxiliar no diagnóstico e no acompanhamento dos pacientes, a partir de métodos analíticos de sangue, urina e outros líquidos cavitários. ● O sangue periférico serve como meio de transporte entre medula óssea e tecidos. Por exemplo, em um processo inflamatório a demanda por células brancas (leucócitos) é maior, com isso nos vasos sanguíneos elas serão observadas. ● Composição do sangue consiste em os glóbulos vermelhos, também conhecidos como hemácias ou eritrócitos; os glóbulos brancos ou leucócitos e ainda as plaquetas, que são fragmentos de citoplasma dos megacariócitos e por um meio intercelular, denominado plasma é o conjunto de gorduras neutras, colesterol, fosfolipídeos, glicose, enzimas e hormônios. ● Ao analisar as proteínas plasmáticas pode-se analisar se há ou não uma desidratação quando há uma hemoconcentração. ● Fibrinogênio pode indicar um processo inflamatório, já que é ptn de fase aguda. ● Além disso, faz a análise de metabólitos, por exemplo, ureia/ creatinina para verificar a funcionalidade dos rins. ● Na urinálise tem o exame físico ( alterações visíveis-cor,aspectos , exame químico (pH, ptn, glicose), e exame do sedimento (visualização no microscópio). ● Análise de líquidos cavitários tem o exame físico (ascite), exame químico, citologia. HEMOGRAMA ● Conjunto de testes que avalia quantitativamente e qualitativamente os elementos celulares do sangue. ● No entanto, na rotina laboratorial o hemograma é o mais frequente devido diversos fatores:praticidade, aspectos econômicos, auxilia no diagnóstico,entre outros. ● Ele é importante na triagem, exame auxiliar (diagnóstico, prognóstico e terapêutica), paciente geriátricos e pré-cirúrgico. ● O hemograma pré-cirúrgico é importante para verificar se o paciente tem anemia pois é indicativo de (- hemácias= hipóxia> complicações anestésicas). ● Identificar desidratação (hemoconcetração) podendo levar a uma hipotensão. ● Identificar leucocitose (+ leucócitos) indicativo de inflamação, estresse ou excitação. ● Identificar leucopenias (- leucócitos) podendo ter dificuldade em promover respostas anti-inflamatória no pós operatório. ● Identificar trombocitopenia (- plaquetas). ● Além disso, identificar estados patológicos (metabólicos ou parasitários). ● Para interpretar e analisar um hemograma tem que levar em consideração diferentes espécies, uma vez que o valores de referências, proporções celulares e alterações de morfologias são distintas para tais. ● Além disso, na interpretação do hemograma deve-se atentar ao histórico do animal, comparar o exame clínico com possíveis resultados anormais. @medicinacat ➔ Colheita de sangue: ● Na hora da manipulação do paciente é importante fazer contenção do animal, minimizando o máximo o estresse do animal, uma vez que pode ter interferência no resultado, por exemplo, com o aumento da adrenalina pode aumentar também o número de neutrófilos. ● Além disso, é necessário fazer tricotomia e antissepsia no local de manipulação. ● Uma variedade de tubos comercialmente disponíveis é utilizada para a coleta de sangue. Esses tubos contêm o anticoagulante apropriado para os vários tipos de procedimentos diagnósticos e vácuo para a obtenção de um volume adequado de sangue. ● Geralmente, os tubos são referidos pela cor de sua tampa, que é utilizada para identificar o tipo de sistema anticoagulante contido no tubo. (A. Tubo de vidro de tampa lilás, para 3 mℓ, contendo EDTA-K3. B. Tubo de plástico de tampa lilás, para 2 mℓ, contendo EDTA-K2, observe uma linha branca sutil de preenchimento indicada pela seta. C. Tubo de tampa vermelha sem anticoagulante. D. Tubo de separação de soro. E. Tubo de tampa verde com heparina lítica. F. Tubo de tampa azul com citrato. G. Exemplo de seringas balanceadas contendo heparina, com tampas, para coleta de material para testes diagnósticos eletroquímicos.) ➢ OBS: tampa branca, vermelha ou amarela é sem coagulante. (exames bioquímicos) Bovino: jugular ou caudal (principais), mamária evita-se devido à complicações / 40x12 ou 40x16. ● Ovinos e caprinos: jugular / 40x10 ou 40x12 ou 40x16. ● Equino: jugular / 40x12 ou 40x16. ● Coelhos: marginal da orelha / 25x7 ou 40x12. ● Suínos: marginal da orelha / 40x12 ou 40x16. ● Felino: mais utilizada é a jugular, mas pode ser via cefálica ou safena / 25x7 ou 25x8. ● Cão: + utilizada jugular, mas pode ser via safena e cefálica 25x7 ou 25x8. ● Aves: veia braquial e jugular. ❖ Anticoagulantes: ➢ EDTA ( etileno diamino tetra acetato de sódio ou de potássio)= diluição 10%- usar 0,1 ml de DTA para 5 ml sangue (tampa roxa). ➢ Heparina = diluição 1%- usar 0,1 ml para 5 ml sangue . ➢ Fluoreto de sódio = 1 gota para cada 3 ml sangue ( impede a utilização de glicose pelas céls. sanguíneas). (tampa cinza) ➢ Citrato de sódio: 0,5 ml para cada 4,5 ml sangue ( dosagem de fatores de coagulação). ( tampa azul). @medicinacat ➢ OBS: relação sangue/coagulante deve ser adequada, porque pode ter efeito excessivo de anticoagulante quando amostra é pequena,ou efeito deficiente, quando há uma amostra de sangue grande. (até 4 ml) Plasma x Soro ● Plasma contém albumina, fibrinogênio, imunoglobulinas, lipídios, hormônios, vitaminas e é o sobrenadante obtido quando uma amostra de sangue que foi coletada com anticoagulante é centrifugada. ● Soro é rico em ptns (sem fibrinogênio), albumina, imunoglobulinas equivalente de uma amostra que se permitiu coagular (sem coagulante). ❏ Causas de hemólise: ● Seringas e agulhas molhadas e/ou quentes; ● Descarga violenta do sangue da seringa no frasco ou feita com a agulha; ● Homogeneização violenta com anticoagulante; ● Calor excessivo; ● O sangue coletado para um hemograma completo (CBC) deve ser analisado em até 3 horas ou ser preparado de maneira adequada para análise posterior. Se o sangue não for analisado em uma hora, deve-se preparar um esfregaço sanguíneo e o restante do tubo deve ser refrigerado. ● Após 24 horas há alterações. ★ Eritrograma (serie vermelha): - Eritrócitos/ⲙl ou mm³ - Concentração da hemoglobina em g/dl - Hematócrito em % ★ Leucograma (serie branca): Contagem total de leucócitos / mm³ Diferencial em % de cada tipo de leucócito. OBS: Contagem celular é feita na câmara de Neubauer. Hematrócrito: ● é a porcentagem do sangue total composta pelos eritrócitos. É mensurado a partir de uma coluna de sangue que, após a centrifugação, resulta na compactação máxima dos eritrócitos. ● Os materiais necessários para obter o volume globular incluem tubos de 75 × 1,5 mm (ou seja, tubos de micro-hematócrito), material selante para os tubos, centrífuga de micro-hematócrito e um dispositivo para a leitura do tubo. @medicinacat Tubos de micro-hematócrito girados de maneira normal e anormal (4 tubos na foto central). O tubo da esquerda está normal. Observe os eritrócitos compactados na base, a camada plasmática no topo e a capa flogística no meio (seta; ampliado à esquerda). O segundo tubo demonstra lipidemia, o terceiro hemólise e o quarto, icterícia. Observe também que o hematócrito está consideravelmente menor no quarto tubo. Os dois tubos adicionais demonstram anormalidades na capa flogística (ampliados à direita). O primeiro desses tubos tem uma capa flogística aumentada que se correlaciona a elevação na concentração de 27 leucócitos. O segundo (direita) é de uma ovelha com leucemia e tem uma capa flogística dramaticamente aumentada. A concentração de leucócitos estava maior que 400.000 células/µℓ. Existe também anemia grave. Com tais anormalidades na concentração celular, a separação entre leucócitos e eritrócitos não se completa e a divisão pode não estar bem nítida. O que está sendo interpretado como o “topo” da coluna de eritrócitos está indicado pela ponta de seta. A coloração avermelhada da capa flogística pode ter sido causada pelo aumento proeminente de eritrócitos nucleados.@medicinacat Proteína plasmática total: ● Após a observação e a mensuração do hematócrito, a coluna de plasma pode ser utilizada para estimar a concentração de proteínas plasmáticas por meio do uso do refratômetro. ● A concentração de proteínas plasmáticas é mensurada utilizando-se a coluna de plasma do tubo de micro-hematócrito. O tubo é quebrado no nível da capa flogística e a porção do tubo contendo o plasma é utilizada para preencher o refratômetro. Se a ptn está acima dos valores de referência significa desidratação. Preparação de esfregaços sanguíneos ● O esfregaço sanguíneo é uma ferramenta essencial para a determinação das concentrações individuais dos tipos de leucócitos (ou seja, contagem diferencial) e para a avaliação de importantes anormalidades patológicas envolvendo leucócitos, eritrócitos e plaquetas. Depois da preparação, o esfregaço sanguíneo é geralmente corado dentro de minutos. Contudo, pode ser corado dentro de horas ou dias se for enviado a um laboratório diagnóstico. Frascos para coloração manual contendo os corantes “Diff-Quick’’ (fixador, corante basofílico e corante eosinofílico). @medicinacat OBS: Após a contagem das 100 células, o número de cada tipo de leucócito é relativo a uma fração de 100, ou seja, uma porcentagem da população leucocitária. Uma vez que as células tenham sido categorizadas em porcentagens, elas devem ser convertidas em números absolutos para propósitos de interpretação. Isso é feito multiplicando-se a concentração total de leucócitos pela porcentagem de cada tipo de leucócito, o que resulta no número absoluto ou na concentração de cada leucócito na amostra sanguínea. Patologia Clínica Veterinária (aula2) Composição do sangue: ● 6-10% do peso corporal. ● Funções: Eritrócitos> transporte de O2 Leucócitos> imunidade e defesa Plaquetas> coagulação do sangue(hemostasia). Hematopoiese Pode ser definida como a produção de células do sangue, compreendendo então a eritropoiese, a leucopoiese e a trombocitopoiese. Pode ser dividida em duas fases, a hematopoiese pré-natal e a hematopoiese pós natal. Eritropoiese é produção de eritrócitos e ocorre na medula óssea vermelha. Leucopoiese é a produção de leucócitos e ocorre na medula óssea vermelha. Trombocitopoiese é a produção de plaquetas e ocorre na medula óssea vermelha. OBS: Nas aves, anfíbios, répteis e peixes ocorre em locais diferentes, assim : eritropoiese e trombocitopoiese ocorrem intravascularmente e @medicinacat leucopoiese ocorre extravascularmente. ( hemácias nucleadas) ● Pré-natal: ocorre primeiramente no saco vitelínico, posteriormente fígado, baço e finalmente medula óssea. ● Pós-natal: ocorre na medula óssea vermelha (ativa) que na puberdade está presente em todos os ossos. Animal adulto ossos chatos. ● Fìgado> hematopoiese inicial; depósito de ferro; produz fatores de coagulação; produz eritropoietinogênio; realiza metabolismo das bilirrubina. ● Baço> hematopoiese inicial; armazena e matura reticulócitos; hemocaterese; armazenamento de ferro; remoção de hemácias parasitadas. ● Rins > produção de eritropoetina. Eritropoiese Consiste em 3 etapas (diferenciação, multiplicação e maturação) *Células mielóides (sob ação de IL-3 +EPO FEC-GM - Fator estimulador de colônias granulocíticas monocítico) > originam unidades formadoras de eritrócitos ( sob ação de EPO) > formam rubriblastos. ● Como é feito o controle da eritropoiese ? Fatores que diminuem a oxigenação ( -volume sanguíneo; anemia; baixa hemoglobina; doença pulmonar) > leva uma diminuição de oxigenação tecidual> estimular os rins a liberar eritropoietina> estimulação da hematopoiese. A eritropoetina então, estimula a diferenciação de progenitores, estimula mitose, acelera maturação e aumenta a liberação. Além disso há também órgãos endócrinos envolvidos no controle, por exemplo, hipófise (prolactina, TSH, ACTH,GH); adrenal (corticosteróides); tireóide (T4); gônadas ( andrógenos e estrógenos - ñ estimula, mas inibe a ação da eritropoetina). A figura acima demonstra as etapas que ocorrem na medula óssea. Fase de enucleação, perda de RNA e aumento da produção de hemoglobina, o que faz a coloração modificar de basofílica (azulada) para uma cor acidófila- eosinofílica. @medicinacat A Fase de multiplicação dura em torno de 2 a 3 dias, enquanto a fase de maturação dura em torno de 5 dias. ( Logo 7- 8 dias para liberação de hemácias) OBS: Apesar da medula óssea apenas liberar eritrócitos maduros para o sangue pode apresentar tbm alguns reticulócitos até metarrubrícitos (cão e gato). ● Além da EPO é necessário um determinado aporte de certas substâncias que constituem os eritrócitos, por exemplo, na fase de multiplicação precisa-se de substâncias que estão envolvidas na formação dos ácidos nucleicos. São elas: vitamina B12, ácido fólico (B6) e cobalto (ruminantes para sintetizar vit B12). OBS: em caso de baixa de vit B12 e ácido fólico pode ocorrer falha na maturação e divisão celular formando macrócitos ( hemácias grandes) = Anemia megaloblástica. Eritrólise: ● Vida média dos eritrócitos varia de acordo com a espécie: Gato> 70 dias; Cão> 120 dias; Vaca> 160 dias; Cavalo> 150 dias… ● ● ● Cerca de 90% são hemolisados via extravascularmente ( fígado, baço e medula óssea) e 10 % instravascularmente. ● Na hemólise intravascular, após a ruptura das hemácias a hemoglobina se liga a uma haptoglobina que impede que a mesma seja filtrada pelos glomérulos. ● O complexo haptohemoglonia é conduzido ao sistema fagocítico-fagocitário ( baço) para que ocorra a metabolização da molécula de hemoglobina.Ao ser catabolizada recuperando os aas da globina para reutilização no organismo. ● Já o grupo heme , será fagocitado liberando o Fe que será reciclado e transportado com a ferritina na circulação sanguínea até a medula óssea onde @medicinacat será reutilizado na formação de novos grupos heme. ● O outro grupo resultante da catabolização da hemoglobina que é a protoporfirina será metabolizada à biliverdina, logo a biliverdina-redutase irá transformar em bilirrubina ñ-conjugada. ● A bilirrubina ñ-conjugada será carreada para o fígado junto a albumina. Para que a bilirrubina seja excretada é preciso sua conjugação, assim será conjugada com ác. Glicurônico. ● Dessa forma, a bilirrubina conjugada será secretada via bile no intestino (duodeno). No intestino delgado por ação de bactérias anaeróbicas, a bilirrubina sofrerá redução transformando-se em uma série de pigmentos incolores chamado de estercobilinogênio. ● O ác. Glicurônico do estercobilinogênio será removido por enzimas bacterianas. Já a porção pigmentar será reduzida em urobilinogênio, o qual será oxidado em estercobilina ( dar a cor as fezes). ● Já nos rins será convertido em urobilina ( cor da urina). Reticulócitos ● São hemácias imaturas contendo como constituintes (ribossomos, mitocôndrias e 20 % de Hb). ● A sua enumeração é realizada para obtenção de informações acerca da integridade funcional da medula óssea, por exemplo, resposta medular à anemia. Podem permanecer na M.O 2-3 dias e sua maturação ocorre na MO, circulação periférica e baço. A contagem é mais útil em cães e gatos e tem alguma implicação em vaca. Não é utilizado em equinos. Metarrubrícitos ● São eritrócitos nucleados imaturos ( última fase nucleada) , suas etiologias podem ser anemias regenerativas ( nesse caso só se tiver presença de reticulócitos, se apenas tive metarrubrícitos é problema na medula óssea), hipóxia e tumor de MO. EXAME DAS HEMÁCIAS ● Quanto ao tamanho: normocítica, macrocítica, microcítica e anisocitose ● Quanto a cor: normocrômica, hipocrômica e policromasia. @medicinacat (normocítica e normocrômica) ( anisocitose e policromasia) (Hipocromasia) (Microcítica) Anemia crônica ferropriva Fisiológico Akita. (Macrocítica) Hemácias jovens Fisiológico Poodle ● Alteração da forma: 1. Esferócitos: hemácias esféricas comcolocação intensa (acontece em caso de anemia hemolítica auto-imune ou após transfusões incompatíveis). 2. Aglutinação: resulta em aglomerados de células irregulares e esféricas devido à pontes de anticorpos. @medicinacat (sugestivo para anemia hemolítica imunomediada ) 3. Pontilhado basofílico: presença considerável de pequenas inclusões basofílicas, contendo RNA no citoplasma de eritrócitos jovens. São compostos de agregados de ribossomos. ( comum em intoxicação por chumbo) 4. Corpúsculos de Howell-Jolly: são eritrócitos com restos nucleares. ( está associado a anemia regenerativa -eritropoiese acelerada-, esplenectomia e supressão da função esplênica). Corpúsculo de Heinz: é causado pela desnaturação oxidativa da hemoglobina. São pequenas estruturas pálidas excêntricas nas hemácias. (cebola, paracetamol-felino induzem a formação desses corpúsculos, quando grande quantidade é afetada pode haver anemia hemolítica grave). 6. Acantócitos: parece células murchas, com espículas irregulares. ( são provenientes de alterações nas concentrações de colesterol ou fosfolipídios na membrana da hemácias. Estão presente em felinos com lipidose hepática e em cães com hemangiossarcoma). 7. Esquistócito: são fragmentos da hemácias provenientes de traumatismo eritrocitário intravascular. @medicinacat (associado a animais com deficiência de ferro, coagulopatia intravascular disseminada ou hemangiossarcoma.) 8. Dacriócito: (desordens mieloproliferativas) 9. Leptócito(eritrócito em alvo): possui uma área de coloração aumentada no meio da área de palidez da hemácia. (pode formar in vitro quando há contato com sangue que tem EDTA em excesso, mas pode estar relacionado tbm a doenças hepáticas ou def. de ferro.) 10. Rouleaux: posicionamento espontâneo das hemácias em forma de pilhas lineares ( semelhantes a pilha de moedas). ( quando há aumento de ptns plasmáticas , como fibrinogênio e imunoglobulinas - desidratação. É normal em equinos.) 11. Crenação: artefato de técnica, desidratação, em bovinos é fisiológico. 12. Corpúsculos de Lentz: inclusão viral. (são encontradas raramente em cães com cinomose- patognomônico). @medicinacat HEMOPARASITAS a)Mycoplasma haemofelis (aderidos na membrana externa- bastonetes na superfície de hemácias). b) Dirofilaria immitis c) Trypanosoma evansi: ( leva a anemia por causa de citoxinas) d) Anaplasma: e) Babesia bovis e canis: Babesia canis @medicinacat @medicinacat
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