MINI ESTUDO DIRIGIDO II

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MINI ESTUDO DIRIGIDO II - PCR 
DISCENTE: VICTÓRIA CARIBÉ / FISIOTERAPIA
DOCENTE: DOMINGOS RIOS
PCR é uma técnica que imita o processo de replicação, sem uso de uma célula viva. De acordo com a afirmação responda: 
1. Porque não se amplifica (ou se replica) todo o genoma de um organismo durante a PCR? 
Por ser muito mais barato e menos trabalhoso, obtendo a mesma resposta na replicação de apenas um pedaço ou do genoma inteiro. Ao separar apenas um pedaço da fita, se estuda, foca, em uma área específica de forma que, a sequência a ser estudada e detectada se confirma de forma mais rápida. 	
2. A enzima helicase rompe as pontes de hidrogênio durante a replicação, quem realiza essa função durante a PCR? 
Quem rompe as pontes de hidrogênio é a alta temperatura, que corresponde a 95°C na primeira fase do termociclador. 
3. Qual o motivo de se utilizar a enzima Taq polimerase e não uma outra DNA polimerase qualquer? 
A PCR depende de uma DNA polimerase termoestável, porque ela precisa ser resistente ao calor, utilizam a DNA polimerase de um microrganismo tolerante ao calor, chamado Thermus aquaticus por isso essa DNA de polimerase é conhecida como Taq DNA polimerase em homenagem à bactéria resistente ao calor da qual ela foi isolada. 
4. Que enzima faz a adição de nucleotídeos seja na célula ou na PCR? 
Taq Polimerase 
5. Na PCR utilizamos primers (iniciadores) obtidos a partir de sequências de DNA já conhecidas, empresas habilitadas confeccionam esses elementos. Na célula viva ocorre essa etapa? Quem produz os primers?
Os primers de PCR são pedaços curtos de DNA de fita simples, geralmente por volta de 20 nucleotídeos de comprimento. Dois primers são usados, o iniciador e o finalizador, para cada reação de PCR, e eles são projetados de modo que englobem a região de interesse (região que deve ser copiada). Isto é, são dadas sequências que os farão se ligar a fitas opostas do DNA molde, bem nas extremidades da região a ser copiada. Os primers se ligam ao molde por pareamento de bases complementares da fita original. Os primers são produzidos in vitro, por um laboratório, ele é feito sob encomenda. Na célula humana, os primers são produzidos pela enzima primase, de acordo com a necessidade.