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Transcrição e processamento do RNAs Transcrição (DNA – RNA) – a célula transcreve trechos de DNA em RNA Replicação – só ocorre na divisão celular e envolve o genoma inteiro Tradução – RNA para proteínas - Para a síntese proteica, a sequencia de nucleotídeos da região apropriada do DNA será copiada em RNA (transcrição), cópias que serão usadas diretamente como molde para direcionar a síntese proteica (tradução) – DOGMA CENTRAL DA BIOLOGIA MOLECULAR. - Apenas uma das fitas do DNA é copiada, por isso o RNA é uma fita simples e flexível, adquirindo diferentes formas com funções estruturais ou catalíticas. Seus tipos são: · RNAm: moléculas copiadas a partir do DNA e definem a síntese proteica (SOMENTE ESSE É TRADUZIDO EM PROTEÍNA). · RNAt: seletores e adaptadores de aminoácidos para coloca-los no local adequado nos ribossomos e se incorporarem a proteínas. · RNAr: forma a região central dos ribossomos e catalisa a síntese proteica. - Na transcrição: · Primeiramente a helicase abre a fita de DNA e depois transcreve com a RNA polimerase. · A fita de RNA não permanece ligada por ligações de hidrogênio à fita de DNA molde. · Imediatamente após os ribonucleotídeos serem adicionados, a cadeia de RNA é deslocada como fita simples e a hélice de DNA se reassocia. · As moléculas de RNA são menores que as de DNA, já que são copias de uma única parte da mesma. · - RNA polimerase: principal enzima que atua na transcrição, composta por múltiplas cadeias polipeptídicas e subunidades que podem se dissociar. Essa enzima catalisa a formação de ligações fosfodiéster que conectam os nucleotídeos entre si. A RNA polimerase move-se sobre o DNA, desespiralizando sua dupla hélice e expondo novas regiões para o pareamento de bases por complementaridade. A cadeia de RNA é estendida na direção 5’3’ e a medida que vai sendo sintetizado, sua liberação é quase imediata da fita de DNA. - Durante o alongamento, a RNA polimerase permanece associada com seu molde durante a síntese de RNA, que prossegue até que a enzima encontre um sinal de terminação. - Cada segmento transcrito do DNA é chamado de unidade de transcrição. - Etapas da transcrição: · Iniciação: regula quais proteínas serão produzidas e com que frequência. · Alongamento: · Terminação: ponto em que a transcrição para, o RNA é liberado e a RNA polimerase se dissocia do molde de DNA. - Transcrição em eucariotos: · Uma unidade de transcrição carrega informação de um único gene, codificando para uma única molécula de RNA ou uma única proteína. · 3 tipos de RNA polimerase: RNA I e III transcrevem RNAt e RNAr, enquanto RNA II transcreve a maioria dos genes. · Diferente da transcrição em p (apenas fator sigma), aqui a RNA polimerase requer diversas proteínas (fatores gerais de transcrição), que irá ajudar a posicionar a RNA polimerase sobre o promotor, auxilia na separação das duas fitas de DNA e libera a RNA polimerase do promotor. · O fator de transcrição TFIID reconhece e se liga ao promotor (que contem uma sequencia de DNA chamada de TATA box), e provoca uma mudança conformacional no DNA, em seguida sinalizando para o RNA polimerase se ligar. · DNA helicase: hidrolisa o ATP e permite que a fita dupla desespiralize. · A polimerase II necessita de proteínas modificadoras de cromatina para iniciar a transcrição. · Não é a RNA polimerase que quebra as pontes de hidrogênio e expõe as fitas de DNA, é a TF2E e TF2H (helicase). - Transcrição em procariotos: · Uma unidade de transcrição pode resultar em um conjunto de genes adjacentes e a molécula de RNAm resultante carrega informação para várias proteínas distintas. · Se inicia com a associação de um fator sigma à RNA polimerase, esse complexo enzimático se adere fracamente ao DNA até chegar a região promotor (sequencia de nucleotídeos que indica o inicio da síntese de RNA), passando a se aderir fortemente. · Ao se associar ao DNA, o complexo enzimático abre a dupla hélice, expõe as duas fitas e inicia a transcrição. Após os nucleotídeos serem sintetizados, a enzima quebra a interação com o promotor e o fator sigma é liberado. Depois disso a RNA polimerase desliza pelo DNA até encontrar o sinal de terminação, se liberando do DNA e liberando a cadeia de RNA sintetizada. · Tanto o fator sigma quanto a polimerase são recicláveis. *Resumindo: na transcrição, a RNA polimerase reconhece a sequencia promotora do DNA, se liga firmemente as posições -10 e -35, quebra as pontes de hidrogênio, expõe as duas fitas, libera o fator sigma e a enzima prossegue alongando a fita. - Splicing de RNA: processo que, após da transcrição de introns e exons em pré RNAm, o íntrons são removidos, para então o processamento das unidade 5’3’ ocorrerem e surgir o RNAm (a fita molde está no sentido 3’5’). - O splicing alternativo permite que um mesmo gene produza um grupo correspondente de diferentes proteínas, incrementando seu potencial codificante. - Spliceossomo: um complexo enzimático que vai torcer as sequencias de introns no pré RNAm e corta-los, juntando as porções de éxons e chegando no RNAm (RNA final) que será utilizado na tradução. - Processamento de RNA: modificações no transcrito primário que ocorrem enquanto o RNA ainda esta sendo transcrito, através de proteínas presas a cauda do RNA polimerase e que são importantes para aumentar a estabilidade do RNAm, auxiliar sua exportação para o citoplasma e sua identificação como RNAm.
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