Imunodiagnóstico_ interação antígeno-anticorpo

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Imunodiagnóstico: interação antígeno-anticorpo
● Interação reversível - anticorpo gruda por um tempo e depois desgruda
(quanto mais ligações, mais estável é a ligação - dura mais tempo)
● Se complementam
○ Especificidade
● Ligações não covalentes
○ Pontes de hidrogênio
○ Ligações iônicas
○ Interações hidrofóbicas
○ Interações de Van der Waals
● Afinidade
○ Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um
único epítopo)
○ Força de interação
● Avidez (quanto maior o número de ligações, maior avidez) - Quando
dura essa ligação - TEMPO
○ Força de interação total entre Ac e Ag
○ Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos
○ No início da infecção, produzimos anticorpos de baixa avidez
○ Com o tempo, alta avidez
● Reação cruzada
○ Dois Ag diferentes apresentam um epítopo idêntico
○ Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não
relacionado, mas com propriedades químicas similares
Epítopo = fechaduras, menor partícula de um antígeno
reconhecido pelo sistema imune
Basicamente o animal produz anticorpo para um vírus
muito semelhante ao que você está procurando, gerando
um falso-positivo
● Aplicações
○ Pesquisa
○ Diagnóstico
○ Soroepidemiologia
● Métodos
○ Reagentes não marcados:
■ Reação de precipitação
■ Reação de aglutinação
➢ Direta: lâminas com gotas de sangue (um com soro
anti A, um com anti B e outro com anti D- Rh) -
formou grúmulos no anti A e anti D também marcado
= A+
➢ Nos grumos, deve se ter a mesma quantidade de
anticorpos e de antígenos, se não, possível falso
negativo. para evitar, diluir a amostra do paciente
➢ Indireta (aglutinação passiva): utiliza-se molécula
carreadora ou hemácias. Molécula ou hemáceas
podem carregar proteínas do antígeno, procurando
o anticorpo
➢ TITULAÇÃO - última diluição que ficou positivo (é o
que vai no exame para o veterinário)
Imunodifusão
● Reagentes marcados: não vejo formação de grúmulos
○ RIA
○ ELISA
■ Indireto: Antígenos já grudados na placa, coloca o soro,
lavo e acrescendo anticorpos marcado com enzimas, lavar
para sair anticorpos não marcados, coloco substrato e por
fim analisa a cor
■ Direto: O antígeno é imobilizado (impregnado) na placa.
Pipeta-se um anticorpo ligado a uma enzima
○ Imunofluorescência - mostra se o anticorpo está presente ou não
○ Western Blot
Resumo:
● Teste sorológico direto - identifica o patógeno no animal
● Teste teste sorológico indireto - identifica o anticorpo contra o
patógeno
● Testes sorológicos é baseado no imunocomplexo que é a ligação do
anticorpo com antígeno
● Esses testes são divididos em teste direto (identifica o antígeno) e
indireto (identifica o anticorpo)
● No teste direto - placa com anticorpo (com alta avidez para dar tempo
de fazer a leitura)
○ Problema: nem sempre o patógeno está na corrente sanguínea
● No teste indireto = placa com antígenos e soro