Resolução da Atividade Eletroforese

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PONTIFICIA UNIVERSIDADE CATÓLICA DE GOIÁS
Escola de Ciências Agrárias e Biológicas Curso de Medicina Veterinária
Disciplina: Fundamentos de Biofísica (BIO1530) Professora Caroline Melo
 Aluno: Guilherme Ferreira Falcão 
 Matrícula: 20202013000681
Exercícios de fixação – Eletroforese
1- A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta.
a) A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, quando comparada a eletroforese em acrilamida
b) A eletroforese em gel de agarose é usada apenas para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência.
c) A identificação dos fragmentos de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida.
d) A eletroforese consiste na migração das partículas sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas.
e) Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo.
2- Com base na figura abaixo, que representa uma corrida de eletroforese de DNA, marque a
(s) alternativa (s) CORRETA (S):
a) Os fragmentos maiores de DNA migram mais rápido do que os fragmentos menores, devido ao seu alto peso molecular.
b) A utilização do Marcador Molecular (Ladder) é indicada para auxiliar na estimativa da concentração dos fragmentos de DNA que aparecerem no gel.
c) A coloração é feita por um corante intercalante de DNA que tem afinidade com o grupamento fosfato da referida molécula.
d) A migração das amostras ocorre no sentido do polo negativo (–) para o polo positivo (+), devido a carga negativa do fosfato localizado no nucleotídeo de DNA.
3- Explique qual é a função e quais são os componentes do Tampão de Carreamento (Loading Buffer).
Dá cor e densidade às amostras, além de permitir o monitoramento dos fragmentos, durante a corrida de eletroforese. Composto por azul de bromofenol, xileno cianol e sacarose ou glicerol
4- Qual é a função da Solução Tampão utilizada durante a corrida da eletroforese?
Mantém o pH estável e permite a passagem da corrente elétrica, necessária para fazer a separação dos fragmentos.
5- A figura abaixo mostra um gel de agarose, responda as questões a seguir:
a) Como a eletroforese separa fragmentos de DNA?
Por meio do tamanho das moléculas e da carga elétrica que elas apresentam
b) Supondo que foi utilizado um marcador de 100pb, marque na figura o tamanho de cada fragmento obtido.
1- Ladder
2- 400pb
3- 150pb e 400pb
4- Não contém fragmento 5- 150pb
6- 400pb
7- Não contém fragmento 8- 150pb
6- (
1
2
3
4,5kb (4500pb)
4
5
6
7
3200pb
1850pb
1,8kb 
(1800pb)
700pb
0,6kb (600pb)
500pb
)Dados os seguintes fragmentos de DNA: 3200pb, 0,6kb, 4,5kb, 500pb, 700pb,1,8kb e 1850pb. Simule uma eletroforese (desenhando um gel), colocando-os na ordem de chegada ao polo positivo.
Obs. 1kb = 1000pb
7- Diferencie os tipos de géis utilizados na eletroforese, destacando sua importância.
Gel de Agarose - extraído de uma alga marinha, não é tóxico, é utilizado para a separação de fragmentos maiores. É corado com brometo de etídio, que é altamente mutagênico.
Gel de Poliacrilamida- é a mistura de duas substâncias, a bisacrilamida e a acrilamida, que é neurotóxica. É utilizado para a separação de fragmentos menores. É corado com nitrato de prata, que não é tóxico.