Passo a passo da coloração de gram

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Coloração de gram
Ramona Widmer - Biomedicina UFPE
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Realizar a coloração primária, cobrindo o esfregaço com Cristal violeta,
durante 60 segundos. Nessa etapa todas as células são coradas em violeta.
Fixar o esfregaço bacteriano.
Cobrir o esfregaço com Lugol durante 60 segundos. Nessa etapa ocorre a
fixação do cristal violeta às células, com formação do complexo iodeto-
cristal violeta.
Deve-se então lavar com Álcool etílico a 95% por 30-60 segundos. Nas
Gram-positivas isso levará a desidratação das paredes celulares e
diminuição da porosidade e permeabilidade, impedindo que o complexo
iodeto-cristal violeta saia das células, permanecendo na coloração violeta.
Nas Gram-negativas isso levará a remoção dos lipídeos da parede celular,
aumentando a porosidade e permitindo a remoção do complexo da célula,
ficando descorada.
Cobrir o esfregaço com Safranina por 30-60 segundos. Nessa etapa, as
Gram-positivas não são afetadas, enquanto as Gram-negativas coram-se
em vermelho/rosa.
Lavar com água corrente, deixar secar e observar ao microscópio.