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@dr ab ich inh o@drabichinho material organizado por @drabichinho distribuição proibida 1 Tabela de meios de cultura e técnicas de semeadura |Distribuição proibida | Todos os direitos reservados à Autora Alícia de Souza Silva |@drabichinho É uma forma de simular um ambiente apropriado para que haja o crescimento da bactéria. Tipos de meios de cultura Liquido Fluido Sólido Semi-sólido Para culturas puras Possui 0,1% de ágar para ter viscosidade e possui menor teor de oxigênio Possui 1,5-2% de ágar e é usado para isolamento e cultivo de bactérias Possui 0,75% de ágar Classificação quanto à composição Quimicamente definido ou sintético Complexo ou indefinido Seletivo e diferencial Enriquecimento Enriq. seletivo A composição e quantidade desse meio é conhecida Não se sabe a composição e quantidade exata. São utilizados extratos obtidos de hidrolise química ou enzimática Há componentes que inibem o crescimento de certos MO Há componentes que permitem o crescimento de MO específicos É um meio rico e altamente seletivo Meios de cultura Meios de transporte Ágar Coloração do meio Composição Finalidade Princípio de ação Inoculação Interpretação Cary Blair Branco opalescente em meio líquido Formulado a partir do meio Stuart com adição de umasolução salina balanceada de tampão fosfato inorgânico Transporte de material fecal e conservação de MO Carência de fonte de nitrogênio impede a multiplicação de MO, garantindo a sobrevivência Swab estéril em fezes recém coletadas, introduzir o swab no meio e manter lá dentro com o tubo fechado e temperatura ambiente Apenas meio de conservação e transporte. Não há crescimento bacteriano Salina tamponada NaCl, fosfato dipotássico anidro, glicerina bidestilada e água destilada Inocular 2g de fezes e homogeneizar Crescimento indicado se houver turbidez no tubo Meio Stuart Cloreto de Cálcio, Beta Glicerolfosfato de Sódio, Tioglicolato de sódio e Azul de metileno Transporte e conservação de MO patogênicos como Haemophillus, Pneumococus, Salmonella, Shigella Swab estéril para coletar, inocular no tubo e fechar Apenas meio de conservação e transporte. Não há crescimento bacteriano 2 Tabela de meios de cultura e técnicas de semeadura |Distribuição proibida | Todos os direitos reservados à Autora Alícia de Souza Silva |@drabichinho Meios mais utilizados nos laboratórios Ágar Coloração do meio Composição Finalidade Princípio de ação Inoculação Interpretação Ágar nutriente Branco amarelado Extrato de carne, extrato de levedura, peptona, cloreto de sódio, ágar Análise de água, alimentos, leite, etc Meio simples e barato amplamente utilizado Estriar a superfície inclinada do meio e incubar • Positivo: crescimento na superfície do ágar • Negativo: ausência de crescimento Ágar MacConkey Rosa translúcido Peptonas de caseína, carne e gelatina, sais biliares, latose, cloreto de sódio, vermelho neutro, cristal violeta, ágar, água destilada Meio seletivo para enterobactérias O diferencial desse meio é diferir entre: • Organismo que fermenta a lactose: produzem pH localizado, absorvem o vermelho do meio e conferem coloração vermelha ou rosa à colônia • Organismo que não fermenta lactose: amarelo claro Inoculação da amostra por estrias através do esgotamento da alça de platina e incubar a placa inoculada em 35°C por 24hr • Bactérias que fermentam lactose: colônias vermelhas ou rosadas • Bactérias Gram +: crescimento inibido pelos sais biliares • Bastonetes Gram – Pseudomonas ou Aeromonas: incolor ou verde café 3 Tabela de meios de cultura e técnicas de semeadura |Distribuição proibida | Todos os direitos reservados à Autora Alícia de Souza Silva |@drabichinho Ágar Coloração do meio Composição Finalidade Princípio de ação Inoculação Interpretação Ágar sangue Vermelho Ágar columbia + 5% de sangue de carneiro desfibrinado Isolamento de estreptococos beta- hemolíticos Eritrócitos íntegros favorece a percepção da hemólise Utilizar a técnica de semeadura e incubar em 35°C por 24hr • Beta hemólise: presença de halo transparente ao redor das colônias → lise total das hemácias • Alfa hemólise: presença de halo esverdeado ao redor das colônias → hemólise parcial das hemácias • Gama hemólise: sem hemólise Ágar chocolate Castanho escuro Possui sangue de cavalo, carneiro ou coelho Crescimento de Haemophilus, Neisseria, Branhamella catarrhalis e Moraxella O sangue é utilizado em alta temperatura, fazendo com que as hemácias lisem e liberem hemina e hematina. Esses compostos auxiliam o crescimento de MO exigentes Utilizar a técnica de semeadura e incubar em 35°C por 24hr • Colônias em pigmento amarelo: sugestivo para Neisseria, Branhamella ou Moraxella • Colônias em coloração creme: sugestivo para Haemophilus • 4 Tabela de meios de cultura e técnicas de semeadura |Distribuição proibida | Todos os direitos reservados à Autora Alícia de Souza Silva |@drabichinho Ágar Coloração do meio Composição Finalidade Princípio de ação Inoculação Interpretação Ágar salmonella- shigella Vermelho alaranjado Sais biliares, verde brilhante e citrato de sódio Selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella em amostras de fezes, alimentos e água Inibição de microrganismos Gram positivas Inocular e incubar por 18 a 24hr • Colônias com centro negro ou incolores: sugestivo para Salmonella • Colônias incolores: sugestivo para Shigella • Colônias rosadas ou avermelhadas: sugestivo de Escherichia ou Klebsiella • Bactérias que fermentam lactose: coloração rosada • Bactérias que não fermentam lactose: incolores Caldo BHI/Brain heart infusion Amarelo claro límpido Derivado de nutrientes de cérebro e coração, peptona e dextrose Cultivo de estreptococos, pneumococos, meningococos, enterobactérias não fermentadoras, leveduras e fungos A peptona e a infusão são fontes de nitrogênio, carbono, enxofre e vitaminas. Enquanto que a dextrose é um carboidrato útil para a fermentação Inoculação com alça de platina e incubar a 35°C de 18 a 24hr • Positivo: presença de turvação = crescimento bacteriano • Negativo: ausência de turvação 5 Tabela de meios de cultura e técnicas de semeadura |Distribuição proibida | Todos os direitos reservados à Autora Alícia de Souza Silva |@drabichinho São métodos em que transferimos bactérias de um meio de cultura ou material a ser analisado para outro meio de cultura utilizando técnicas assépticas, a fim de evitar contaminação dos materiais, dos meios e das culturas. Semeadura em estrias Objetivo: obter crescimento do MO no meio para estocar a bactéria, estudar seu metabolismo em bioquímicos e avaliar a capacidade de crescimento. • Procedimento: 1. Uso do ágar nutriente inclinado em tubo de ensaio 2. Utilizar alça de platina para fazer estrias na superfície Semeadura em picada • Objetivo: verificar a motilidade do MO em ágar semissólido • Procedimento: 1. Semear o MO com uma agulha de níquel cromo com uma picada no meio do ágar no tubo até metade da altura a. Bactéria móvel: crescimento em todo meio b. Bactéria imóvel: crescimento somente no local da picada Semeadura em esgotamento • Objetivo: obter colônias isoladas, a fim de distinguir os MO através da morfologia da colônia • Procedimento: 1. Semear a cultura com uma alça de níquel cromo fazendo estrias na superfície da placa de Petri 2. Fazer sequência de estrias para obter o esgotamento e permitir que os MO se isolem ao longo da placa 3. Deve-se flambar a alça a cada estria e resfriar a alça no canto da placapara não “queimar” as colônias Estrias simples • Objetivo: utilizada para visualizar propriedades metabólicas como a produção de enzimas hidrolíticas e produção de pigmentos • Procedimento: 1. Estriar com a alça de platina sobre o meio em zig-zag ou uma única linha reta Estrias múltiplas • Objetivo: obter colônias isoladas • Procedimento: 1. Estriar o meio sólido, 2. Não pode cruzar as estriar (difere do esgotamento!) Pour-plate ou técnica de disseminação por profundidade • Objetivo: contagem bacteriana, análise de MO anaeróbios adicionando mais uma camada na placa. • Procedimento: 1. Transferir 1ml da cultura para a placa de Petri vazia 2. Colocar 10-20ml do meio resfriado sobre a cultura 3. Homogeneizar em movimentos circulares na mesa Spread-plate • Objetivo: obter crescimento confluente ou para contagem de bactérias • Procedimento: 1. Transferir 0,1ml da cultura para o meio sólido na placa 2. Espalhar de forma uniforme com a alça de Drigalsky
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