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PRINCÍPIOS DA BIOSSEGURANÇA E AS ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS PARA DIFERENCIAÇÃO BACTERIANA ROTEIRO DA AULA... Normas de biossegurança essenciais para a execução das técnicas microbiológicas Principais meios de cultura para crescimento bacteriano. Técnicas de semeadura e seus objetivos. Caracterização das bactérias a partir das análises fenotípicas e genotípicas. Colorações mais utilizadas para diferenciação de grupos bacterianos NORMAS DE BIOSSEGURANÇA ESSENCIAIS PARA A EXECUÇÃO DAS TÉCNICAS MICROBIOLÓGICAS O QUE É BIOSSEGURANÇA? O conjunto de estudos e procedimentos que visam a evitar ou controlar os eventuais problemas suscitados por pesquisas biológicas e/ou por suas aplicações. BIOSSEGURANÇA é o conjunto de ações voltadas para a prevenção, minimização ou eliminação dos riscos inerentes as atividades de pesquisa, produção, ensino, desenvolvimento tecnológico e prestação de serviços, riscos que podem comprometer a saúde do Homem, dos animais, das plantas, do meio ambiente. RISCOS SE MULTIPLICAM QUANDO NORMAS DE SEGURANÇA NÃO SÃO OBSERVADAS Mas o que é risco? RISCO → perigo mediado pelo conhecimento! PERIGO → é o desconhecido! Acidentes Entende-se por agente de risco qualquer componente de natureza FÍSICA, QUÍMICA ou BIOLÓGICA que possa “comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos” AÇÃO em Biossegurança AVALIAÇÃO DE RISCOS! TIPOS DE RISCOS RISCOS BIOLÓGICOS Consideram-se agentes de RISCO BIOLÓGICO todo microrganismo que ao invadirem o organismo humano causam algum tipo de patologia (tuberculose, AIDS, hepatites, tétano, micoses, etc...). Agentes Biológicos: vírus, bactérias, fungos, protozoários, parasitas, etc. Vias de contaminação: cutânea, digestiva, respiratória. Os agentes de risco biológico podem ser distribuídos em 4 classes por ordem crescente de risco, segundo os seguintes critérios: • Patogenicidade • Virulência • Transmissibilidade • Medidas profiláticas • Tratamento eficaz • Endemicidade. RISCOS BIOLÓGICOS RISCO BIOLÓGICO RISCO 1: escasso risco individual e comunitário Ex: Bacillus subtilis RISCO 2: risco individual moderado, comunitário limitado Ex: HbC, HIV RISCO 3: risco individual elevado, comunitário baixo Ex:Mycrobacterium tuberculosis RISCO 4: elevado risco individual e comunitário Ex: vírus Ebola NÍVEIS DE BIOSSEGURANÇA Para agentes patogênicos-microbiológicos Segundo a resolução nº 1 de do Conselho Nacional da Saúde Cap. X art. 64Varia de 1a 4 . Grupo 1 (NB 1) Grupo 2 (NB 2) Grupo 3 (NB 3) Grupo 4 (NB 4) COMO MINIMIZAR OS RISCOS BIOLÓGICOS? Barreiras Primárias: equipamentos de segurança Ex: CSB , EPIs, EPCs Barreiras Secundárias: desenho e organização 1. REALIZAR AVALIAÇÃO DE RISCOS 2. SE RISCO BIOLÓGICO, CLASSIFICAR 3. USAR NÍVEIS DE CONTENÇÃO 4. USAR CONJUNTO DE MEDIDAS. EQUIPAMENTOS DE PROTEÇÃO INDIVIDUAL Portaria NR6 (08/06/78) : “Todo dispositivo de uso individual, de fabricação nacional ou estrangeira, destinado a proteger a saúde e a integridade física do trabalhador”. EQUIPAMENTOS DE PROTEÇÃO COLETIVA São equipamentos que possibilitam a proteção do pessoal da área de saúde, do meio-ambiente e do produto ou pesquisa desenvolvida. EQUIPAMENTOS DE PROTEÇÃO COLETIVA CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA EQUIPAMENTOS DE PROTEÇÃO COLETIVA CABINES DE SEGURANÇA BIOLÓGICA → FUNCIONAMENTO EQUIPAMENTOS DE PROTEÇÃO COLETIVA CHUVEIRO DE EMERGÊNCIA E LAVA-OLHOS: EQUIPAMENTOS DE PROTEÇÃO COLETIVA EXTINTORES DE INCÊNDIO: PRINCIPAIS MEIOS DE CULTURA PARA CRESCIMENTO BACTERIANO MEIOS DE CULTURA Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada, capazes de promover o crescimento bacteriano em condições de laboratório. Fonte de carbono e nitrogênio Fonte de energia Sais minerais Fatores de crescimento Condições físicas Esterilização MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO: Líquidos ou caldos: não têm agente solidificante nutrientes dissolvidos em solução aquosa não há formação de colônias para aumentar o número de microrganismos para provas bioquímicas MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO: Sólidos: adição de uma substância solidificante em determinada quantidade (1 a 2%) superfície endurecida permitem a formação de colônias para distinção da morfologia, isolamento de colônias, conservação de cepas MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO: Semi sólidos: substância solidificante em menor quantidade (0,5 a 0,8%) estudos da mobilidade, testes bioquímicos MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O ESTADO FÍSICO: Agentes solidificantes Ágar: polissacarídeo complexo de galactose, extraído de algas marinhas Gelatina: polissacarídeo extraído de cartilagem de mamíferos Sílica-gel: substância inorgânica inerte e inatacável por enzimas microbianas MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A PROCEDÊNCIA DOS CONSTITUINTES: Naturais (ou Complexos): sem composição química definida, geralmente extratos vegetais, animais ou de outros microrganismos usados para microrganismos menos exigentes na nutrição Ex.: Meio de Löwenstein Jensen (Mycobacterium tuberculosis) → contém sais, ovos e pedaços de batata MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A PROCEDÊNCIA DOS CONSTITUINTES: Artificiais (ou Quimicamente definidos): composição química definida usados para microrganismos mais específicos e exigentes Ex.: Caldo Tetrationato (Samonella) → contém apenas iodo, KI e água MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM A COMPOSIÇÃO QUÍMICA: Simples (ou básicos): permitem o crescimento bacteriano sem satisfazer exigência em especial Ex.: Caldo e Ágar simples Especiais (ou complexos): substâncias como meio de infusão de cérebro e coração, soro bovino, fragmento de fígado Ex.: Meios Shahidi Ferguson Perfringens (SFP) e Triptose Sulfito Ciclosserina (TSC) (Clostridium perfringens) MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL: Meios de contagem: determinação quantitativa → Ágar de Contagem em Placas, Ágar Baird- Parker Meios de estocagem ou manutenção: conservação de microrganismos → Ágar Sabouraud Meios de triagem: caracterização e identificação →Tríplice açúcar e ferro Meios de identificação: provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas → Ágar citrato, Caldo nitrato MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL: Meios Diferenciais: permite estabelecer diferenças entre microrganismos parecidos facilita a identificação da bactéria quando existem outras bactérias crescendo no mesmo meio Ex.: Ágar Sangue, que contém células vermelhas do sangue, é muito utilizado pelos microbiologistas para identificação de espécies bacterianas capazes de destruir células sanguíneas. MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL: Meios Diferenciais: MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL: Meios Diferenciais: MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL: Meios Seletivos: possuem substâncias que inibem o desenvolvimento de um determinado grupo de microrganismos favorecendo o crescimento de outras espécies Ex.: Meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de microrganismos como a Salmonella. MEIOS DE CULTURA CLASSIFICAÇÃO DE ACORDO COM O OBJETIVO FUNCIONAL: Meios Seletivos: MEIOS DE CULTURA Agar ss Agar Macconkey Ágar eosina-azul de Metileno De acordo com o conteúdo químico: Meio enriquecido: Caldo BHI e Caldo tetrationato Meio de transporte: Meio Stuart, Meio Cary-blair Meio seletivo:Agar manitol e Agar SS Meio diferencial: McConkey Meio indicador:Agar citrato de Simmons De acordo com o estado físico: Liquido Sólido Semi-sólido MEIOS DE CULTURA Ágar cled MEIOS DE CULTURA Meio de transporte CHROMagar™ Candida Plus CHROMagar TÉCNICAS DE SEMEADURA E SEUS OBJETIVOS As TÉCNICAS DE SEMEADURA em laboratório de microbiologia consistem justamente em métodos pelo qual se transfere pequenas quantidades de microrganismos para um meio de cultura em que o material a ser analisado será semeado, ou seja: é preparado um ambiente perfeito para que determinado microrganismo presente em uma amostra de material cresça e se desenvolva para análise posterior. TÉCNICAS DE SEMEADURA Semeaduras em placa: TÉCNICAS DE SEMEADURA BOM FINAL DE SEMANA!
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