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Microbiologia Nutrição, metabolismo e crescimento microbiano Conceitos • Reações: catabólicas e anabólicas – necessárias para manter a homeostasia dos sistemas biológicos; • Nas reações catabólicas, moléculas mais complexas são transformadas em moléculas mais simples, liberando energia; • Em reações anabólicas moléculas mais simples formam moléculas mais complexas, com o consumo de energia; Enzimas e reações químicas • Atua como catalisadora de reações químicas, reduzindo a energia de ativação para que o processo seja mais fácil; • Podem ser classificadas de acordo com o tipo de reação química que realizam; Classe Tipo de reação Exemplos química catalisada Oxidorredutase Reações de oxidação- redução Lactato desidrogenase Transferase Transferência de grupos funcionais como amino, acetil, fosfato Acetato quinase Hidrolase Hidrólise – adição de água Lipase, sacarase Liase Remoção de átomos/grupos sem ação da água Oxalato descarboxilase, isocitrato liase Isomerase Reformulação de átomos dentro de uma molécula Glicose-fosfato isomerase Ligase União de duas moléculas, através de energia derivada da quebra de ATP Acetil-CoA sintetase, DNA ligase; • Composição: - Sítio ativo: onde o substrato se liga; • Mecanismo de ação enzimática – modelo chave e fechadura: • Fatores que influenciam a atividade enzimática: - Temperatura – à medida que a temperatura aumenta a atividade enzimática aumenta até chegar a um valor ótimo. Mas, ao ultrapassar essa marca, a enzima pode desnaturar, diminuindo sua atividade, pois há destruição do sítio ativo; - pH: cada enzima tem um pH ótimo para trabalhar; - Concentração do substrato: à medida que ele aumenta, aumenta a probabilidade do substrato se ligar ao sítio ativo dessa enzima. Mas, quando todas já estão com o substrato no seu sítio ativo, a sua atividade permanece constante, pois há uma quantidade limite de enzimas dentro de células (efeito platô, obedecendo a lei de ação das massas); - Presença de inibidores: competitivos (liga-se no local do substrato), não-competitivos (liga-se em outro local que não o sítio ativo, porém ao ligar desativa a ação da outra enzima) e retroalimentação (cascata enzimática, na qual o produto final inibe o processo); Metabolismo microbiano • Participam dele elementos plásticos (fontes de carbono, nitrogênio, enxofre e fosfato), elementos traço (Ca, K, Fe, Mo, Mg, Mn, Zn, Co) e fatores de crescimento; • Divisão dos microrganismos: - Autótrofos: aqueles que se desenvolvem em meios de cultivo constituídos por compostos inorgânicos simples (nesse caso, a fonte de carbono vem do CO2); - Heterótrofos: os que para se desenvolverem precisam da presença de compostos orgânicos do meio de cultivo (fonte de carbono através do composto orgânico); - Auxotrófico: aqueles que sofreram um processo de mutação genética, passando a exigir um fator de crescimento que não era exigido na sua célula parental; - Fotoautotróficos: fonte de energia é a luz e a de carbono o CO2; - Foto-heterotróficas: fonte de energia a luz e a fonte de carbono são substâncias orgânicas; - Quimioautotróficas: fonte de energia é a oxidação de substâncias inorgânicas e a fonte de carbono o CO2; - Quimio-heterotróficas: fonte de energia é a oxidação de substâncias orgânicas e a fonte de carbono são substâncias orgânicas; Fontes de energia • Sol e moléculas orgânicas; Metabolismo microbiano • Carboidratos: - Possui três destinos, dependerá da presença ou não de oxigênio, podendo realizar fermentação lática, alcoólica ou Acetil-CoA, na presença de energia; - Na célula procariótica, não há gasto de energia para o transporte para mitocôndria, pois essas células não possuem está organela, assim, todo processo é realizado no citosol. Resultado final: 38ATP (procariótica) e 36ATP (eucariótica, pois gasta 2ATP no transporte para mitocôndria); • Testes bioquímicos laboratoriais são importantes para identificação bacteriana; • Todas as vias, anabólicas e catabólicas são integradas; • Esse processo favorece a reprodução, ou seja, o crescimento dos microrganismos; Crescimento microbiano • Se reproduzem através de divisão binária, o que dura de 15 minutos, gerando células filhas idênticas as células-mães (clones); • O aumento da população bacteriana ocorre em progressão geométrica (crescimento exponencial, logarítmico) – possibilitando populações elevadas em um curto espaço de tempo; • Fatores que influenciam o crescimento: - Presença de nutrientes essenciais; - Temperatura ideal; - Eh (atmosfera, O2 ou CO2); - pH; - Osmolaridade (concentração de sal no meio); Classificação segundo a temperatura de crescimento - Mesófilas mais importantes do ponto de vista médico; Classificação segundo o tipo respiratório • No caso de bactérias que não toleram oxigênio, temos que criar um ambiente no laboratório para o seu cultivo; Aeróbias obrigatórias Anaeróbias facultativas Anaeróbias obrigatórias Anaeróbias aerotolerantes Microaerófilas Somente crescimento aeróbico, com necessidade de O2 – (crescimento na superfície) Crescimento aeróbico e anaeróbico, aumentando na presença de O2 – (crescimento em todo tubo) Somente crescimento anaeróbico, não havendo crescimento na presença de O2 – (crescimento na parte de baixo do tubo) Somente crescimento anaeróbico, continuando na presença de O2 – (crescimento em todo tubo) Somente crescimento aeróbico, necessitando de O2 em baixas concentrações – (crescimento no ponto médio) Classificação segundo o pH Classificação segundo a Osmolaridade • Não-halófilos: não toleram grandes concentrações de sal; • Halófilos moderadas (organismos marinhos): toleram alguma concentração de sal; • Halófilos extremos (Halobacterium): crescem em altíssima concentração de sal. Esse tipo de bactéria geralmente produz pigmentos; Meios de cultura • Local propício para o cultivo/crescimento dos microrganismos; • Quimicamente definido: crescimento de quimioautotróficos e autotróficos e análises microbiológicas; • Complexo: crescimento da maioria dos organismos quimio-heterotróficos; • Redutor: crescimento de anaeróbicos obrigatórios; • Seletivo: impedir o crescimento de microrganismos não desejados, favorecendo o crescimento do organismo de interesse; • Diferencial: diferenciar as colônias do organismo desinteresse dos outros organismos; • Enriquecido: semelhante ao seletivo, mas com característica importante, de aumentar de número da bactéria de interesse a tornando detectável; Métodos para quantificar o crescimento microbiano • Método das diluições seriadas e contagem em placa; • Método de contagem em placa; • Método de filtração; • Método de contagem direta ao microscópio; • Método da turbidimetria (método indireto);
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