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. Morfologia Bacteriana – Método de Gram Muito utilizada no campo da microbiologia fácil de ser realizada e tem várias funções Diferenciar as BACTÉRIAS em 2 grandes grupos: GRAM POSITIVAS GRAM NEGATIVAS A diferenciação está relacionada com a resposta de determinado grupo de microrganismo a coloração, que se da pelas diferenças nas estruturas da parede celular das bactérias, isto é se baseia especificamente na camada de parede externa da bactéria. ➝ Identifica se cultura está pura ou contaminada. ➝ Visualiza forma e arranjo organizacional das células microbianas e isso é extremamente importante porque direciona o tratamento ou a estratégia de infecção. Camada de peptideoglicano espessa intercalado com diferentes moléculas nas quais 2 se destacam: O ácido teicoico e o lipoteicoico que são responsáveis por ancora à parede celular na membrana citoplasmática A membrana plasmática dos 2 grupos é muito parecida, entretanto parede celular é totalmente diferente Camada de peptideoglicano fina (delgada) porém tem uma membrana externa de composição básica (similiar a membrana plasmática) com moléculas intercaladas, porém uma se destaca: O lipopolissacarideo (LPS) que tem função imunogênica (importante fator de virulênica), pois estimula a resposta imune o que é muito importante em processos infecciosos envolvendo bactérias gram-negativas Tem membrana externa formada por lipopolissacarideos (LPS) importante fator de virulência + complexa O corante gram não é capaz de atravessar a membrana citoplasmática das células bacterianas, logo não cora o citoplasma (como se acreditava até 2015), mas sim a camada peptideoglicano. *O tempo necessário de cada processo pode ser consultado nos roteiros . Esfregaço fino com a colônia bacteriana na lâmina Fixar esfregaço por meio do calor (passar 3x no fogo – bico de bunsen) Esfregaço é líquido biológico, produto patológico ou células de tecido ou de um órgão postas sobre uma lâmina, para fins de observação microscópica. Preparação da lâmina Cristal de violeta (permeável) (Células se coram de roxo) Iodo (mordente) Complexa com o cristal de violeta e torna impermeável Descoloração Utilizar um solvente orgânico como o álcool absoluto, rapidamente Contracorante ou contracoloração (Safrina) Agente contraste Esfregaço de colonia bacteriana tem que ser fino, pois a colonia é formada por milhões de células e se fizer um esfregaço muito grosso as células sobrepõem umas as outras e não consigo fazer uma coloração de forma adequada.
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