Cariótipo Humano, Bandeamento Cromossômico, Hibridização in Situ e Alterações Cromossômicas

Prévia do material em texto

Humberto Azzi
2P - Medicina
FCMS/JF
O Cariótipo Humano:
- Cromossomos condensados são analisados na metafase 
 ->Duas cromátides irmãs, unidas pelo centrômero
- Podem ser identificados não só por seu tamanho, mas também pela localização do centrômero
 ->Braços curtos (p) e longos (q)
- Na ausencia de coloração adequada, não é possível identifica-los individualmente
- Classificação restritos a classificação em sete grupos, designados de A à G
Tamanho e posição do centrômero
- Embora possam ser analisados diretamente no microscópio, é comum que sejam fotografados 
e arrumados em pares.
- Cariótipo: Conjunto cromossômico padrão de um indivíduo
- Cariotipar: Processo de preparação do cariótipo
GRUPO A
Os maiores: 1 e 3 são metacêntricos. O 2 é submetacêntrico.


GRUPO B
4 e 5 são grandes e submetacêntrico com os dois braços muito diferentes.
Grupo C
6 ao 12 e X, tamanho médio e submeteacêntrico.
Grupo D
13 ao 15, tamanho médio e acrocêntricos com satélite.
Grupo E
16 ao 18, pequenos. 16 é metacêntrico, 17 e 18 submetacêntricos.
Grupo F
19 e 20, pequenos metacêntricos.
Grupo G
21, 22 e Y, pequenos e acrocêntricos, com satélites no 21 e 22.

Bandeamento Cromossômico
- Faz com que os cromossomos se corem com uma série de bandas claras e escuras, e isso é 
proveniente de um corante DNA-Específico.
- Evidenciam alterações de regiões com 1 a 10 mb.
Bandeamento G
- Cromossomos inicialmente tratados com tripsina, para desnaturação das proteínas 
cromossômicas e em seguida são corados com o corante GIEMSA. As bandas escuras são 
Bandas G e as claras são G-Negativas
- Bandas G contém cromatina mais condensada, se replicam mais tardiamente e tem menor 
atividade de transcrição.
Bandeamento Q
- Cromossomos tratados com QUINACRINA e DAPI, que são corantes fluorescentes e ligam-se 
ao DNA rico em A-T. Em seguida são examinados por microscopia de fluorescência.
- Os Cromossomos coram-se num padrão específico de bandas brilhantes (Bandas Q) que 
correspondem quase exatamente às Bandas G
Bandeamento R
- Cromossomos recebem pré tratamento com calor, em solução salina, antes da coloração 
GIEMSA. O calor faz com que o DNA rico em A-T se desnature.
- Nesse caso, Bandas Claras e Escuras (Bandas R) são o inverso das produzidas por 
bandeamento G ou Q.
- Nas Bandas R há uma maior concentração de genes.
Bandeamento C
- Envolve a coloração da região centromérica de cada cromossomo e outras regiões que 
contenham Heterocromatina.
- Os cromossomos são submetidos à desnaturação por uma solução de hidróxido de bário antes 
da coloração de GIEMSA.
Mapeamento
- p21.32 - Braço Curto
- O número seguinte a letra representa a posição no braço: banda 21, sub-banda 3, sub-sub 
banda 2
- As bandas são visíveis ao microscópio quando o cromossomo está devidamente corado. Cada 
banda é numerada sendo a número 1 a mais próxima do centrômero. Sub-bandas e sub-sub 
bandas são visíveis a resoluções mais altas.

Hibridização in situ fluorescente (FISH)
- Uma sonda é marcada no Florocromo, logo DNA e sonda são desnaturados e a sonda híbrida 
ao DNA.
- Exemplificando: A sonda, que é um trecho de DNA complementar de uma região de interesse é 
marcada com o Florocromo (componente de uma molécula que faz com que esta seja 
fluorescente), por fim DNA e Sonda desnaturam-se e a Sonda híbrida ao DNA que é visto com 
fluorescência.
- Pode ser feito em células interfásicas ou metafásicas.
- Pode-se trabalhar com duas Sondas: Marcar região crítica e uma região de controle do mesmo 
cromossomo.
- Coleção de Sondas: Pintura Cromossômica.
- Limitado: Responde apenas questões específicas, é limitada quanto ao numero de 
cromossomos testados, limitado quanto ao numero de sondas utilizadas em cada reação, 
sondas comerciais limitadas a poucas regiões.
- Aplicações de FISH na citogenética clínica: Aneuploidia, Diagnóstico pré-natal, Diagnóstico p’re 
implantação (durante a fertilização in vitro, realizada para casais com risco significativo de 
distúrbio), Detecção de cromossomos marcadores, Duplicações, Deleções (incluindo as 
síndromes de genes contíguos, ou seja, deleção de um gene e dos seus vizinhos), Rearranjo 
cromssômico (inserções, translocações).
Alterações Cromossômicas Numéricas
- Aneuploidia: Aumento ou Diminuição do número de cromossomos de um par.
Ex: Monossomia do Cromossomo X —> 45, X (2n-1) —> Um representante do cromossomo.
 Trissomia do Cromossomo 21 —> 47, XX, +21 (2n+1) —> Três representantes do 
cromossomo.
- Poliploidia: Células com complementos cromossômicos
Ex: Triploidia 69, XYY (3n)
 Tetraploidia, 92 XXXX (4n)
Causas de Alterações Cromossômicas Numéricas
1 - Não Disjunção das cromátides irmãs ou não disjunção dos cromossomos homólogos na 
meiose I ou meiose II, o que pode gerar gametas com cromossomos a mais ou a menos.
2 - Perda Anafásica ao longo do processo, que pode gerar cromossomos a menos.

obs: A alteração pode ser Universal (presente em todas as células) ou Mosaico (presente em 
algumas células).
Trissomia do Cromossomo 21 —> Sindrome de Down
- 1:800 nascimentos
- Aumento de incidencia com o aumento da idade materna
- Características: Hipotonia muscular, atraso do desenvolvimento neuropsicomotor, fissuras 
palmeirais inchadas para cima, base nasal achatada, pescoço curto, prega palmar única, língua 
protusa e hipônica, cardiopatia congênita, homens são estéreis, mulheres podem ser férteis 
com risco de 50% de terem filhos com a síndrome.
- Exames indicativos:
Ultrassom: Translucência nucal, ausência do osso nasal
Dosagens do soro materno: menos a-feto proteína, menos estilo não conjugado, menos B-HCG.
A Trissomia pode ser:
- Trissomia 21 livre (47, XX, +21) - 95%
- Trissomia 21 em mosaico (47, XX, +21 / 46, XX) - 1%
- Trissomia 21 por alteração estrutural - 4%
Causa:
- Não disjunção na meiose (principalmente materna)
- Mosaicismo: Concepção trissômica e posterior perda cromossômica durante as divisões 
mitóticas do embrião - Fenótipos mais brandos.
Translocação (t)
- São transferencias de segmentos de cromossomos que ocorrem entre cromossomos não-
homólogos
- Há 2 tipos: Translocação Recíproca (Não-Robertsoniana) e Translocação Robertsoniana
- Translocações podem ser equilibradas (sem perda ou acréscimo de material genético) ou 
desequilibradas (quando a troca de material cromossomico é desigual resultando em genes 
extras ou ausentes).
Translocação Recíproca
- Troca de segmentos entre cromossomos não homólogos
- Translocações não equilibradas: Envolve, geralmente, Duplicação + Deleção. Resultam 
deficiência mental e motora, sinais dismórficos, malformação congênita e deficiência do 
crescimento.
Translocações Equilibradas
- Não alteram o fenótipo do índivíduo
Translocação Robertsoniana:
- Envolve 2 cromossomos acrocêntricos que se mudem próximos da região do centrômero com 
perda de seus braços curtos.
- Alteração estrutural da região do centrômero com perda de seus braços curtos.
- Ocorre nos cromossomos 23, 24, 25, 21 e 22
- Síndrome de Down: Trissomia do 21 livre ou Trissomia do 21 por translocação roberstoniana.
Síndrome de Edwards:
- 1:6000
- Características: Atraso no desenvolvimento neuropsicomotor, malformações cardíacas, 
hipertonia, microgntia, orelhas malformadas.
- 95% sexo feminino
- Trissomia do Cromossomo 18
- 5% sobrevive até 12 meses de idade
Síndrome de Patau:
- 1:10000
- Características: Atraso no desenvolvimento neuropsicomotor, malformações do SNC, 
microcefalia, fendas labial e palatina, posição das mãos característica.
- Sobrevivência de aproximadamente 8 dias
- Apenas 5% sobrevivem até 12 meses de idade
- 80% sexo feminino
Síndrome de Klinefelter:
- 47 XXY
- Características: Diminuição do tamanho dos testículos, azoospermia, ginecomastia, membros 
inferiores mais longos, obesidade centrípeta.
- Exclusiva sexo masculino
- 50% dos casos o cromossomo X extra é derivado da mãe
- 15% dos casos são mosaicos
- Há possibilidade de encontrar cariótipos 48 XXXY ou XXXXY
Síndrome do Triplo X:- 1:1000
- Maioria sem alterações fenotípicas
- 47 XXX
- Podem ser férteis (e terem filhos normais) e passar despercebidas
- Menstruação irregular
- Cromatina dupla (2 corpúsculos de Barr): Somente 1 cromossomo X fica ativo e os outros 
inativos.
Síndrome do Duplo Y:
- 47 XYY
- 1:1000
- Sem manifestações fenotípicas aparentes
- Pode estar relacionado a comportamento violento