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Camila Mariana Castro de Oliveira Medicina Nove de Julho BCM 2- Biologia molecular ➛ As moléculas de ácido ribonucleico (RNA) são polímeros constituídos por 4 tipos de nucleotídeos que diferem quanto as bases nitrogenadas ➛ Duas diferenças básicas quando comparado ao DNA: ✓ Açúcar do RNA: ribose – grupo OH adicional, localizado no carbono 2 (açúcar do DNA: desoxirribose) ✓ Base pirimídica uracila está presente no lugar da timina ➛ Polímero composto de 4 tipos diferentes de (ribo)nucleotídeo (A, U, G, C) – difere do DNA pois contem Uracila e não Timina ➛ Ribonucleotideos ligados por ligações fosfodiester (açúcar-fosfato) ➛ Fita simples (formas tridimensionais) – pode parear/se dobrar ➛ Sintetizado de forma complementar a fita-molde de DNA Obs: enquanto no DNA a função é somente guardar informações, o RNA possui diversas funções estruturais, reguladoras e catalíticas ➛ A primeira etapa executada pela célula para ler a informação necessária a partir de suas instruções genéticas é a cópia de um segmento especifico da sequência de nucleotídeos do DNA – um gene – sob a forma de uma sequência de nucleotídeos de RNA ➛ Vantagens: ✓ Regulação da expressão ✓ Tipos diferentes de RNAs com funções distintas ✓ Diferentes tipos de proteínas ➛ A informação, na forma de RNA, embora copiada em uma forma química distinta, ainda é escrita essencialmente na mesma linguagem do DNA – a linguagem de uma sequência de nucleotídeos. ✓ Por isso, o nome dado para a produção de moléculas de RNA a partir do DNA é a transcrição ➛ Unidade transcricional: sequencias de nucleotídeos de DNA que codifica uma molécula de RNA e as sequencias necessárias para a transcrição O processo se inicia com a abertura da dupla-hélice de DNA; após esse momento, uma das fitas atuara como molde para a síntese de RNA.. Os ribonucleicos são adicionados um a um, sendo a sequência nucleotidica da cadeia determinada pelo pareamento com a fita molde. Camila Mariana Castro de Oliveira Medicina Nove de Julho BCM 2- Biologia molecular ➛ A célula pode controlar a expressão de cada um de seus genes de acordo com a necessidade do momento ➛ Cada gene pode ser transcrito e traduzido sob taxas diferentes, permitindo que a célula sintetize enormes quantidades de certas proteínas e mínimas quantidades de outras ➛ Os genes podem ser expressos em diferentes graus de eficiência ➛ As RNA polimerase são enzimas que catalisam a síntese de RNA tendo como molde uma fita de DNA ➛ Esse processo é denominado de transcrição ✓ Ao contrário das DNA polimerases, as RNA polimerase são capazes de iniciar uma nova cadeia de RNA a partir de um molde de DNA, sem precisar de iniciador (primer) ➛ Os procariontes possuem apenas um tipo de polimerase do RNA ➛ Os eucariontes possuem três tipos de RNA polimerase ✓ RNA polimerase 1: sintetizam partes do RNA ribossômico ✓ RNA polimerase 2: sintetizam todos os RNA mensageiros (dão origem as proteínas) ✓ RNA polimerase 3: sintetiza partes do RNA ribossômico ➛ Procarioto: ✓ Uma RNA polimerase que sintetiza uma fita de RNAm com todo o material genético ✓ Única região promotora – se encontra com DNA circular – local que a RNA polimerase se liga ✓ Carrega a informação de um conjunto de genes que são transcritos em uma molécula única de RNAm que carrega a informação para várias proteínas distintas ✓ Contém um único tipo de RNApoli ➛ Eucarioto: ✓ Carrega informações de apenas um gene e, portanto, codifica ou para uma única molécula de RNA, ou para uma única proteína ✓ Uma região promotora para cada gene (vários) ✓ Contem três tipos de RNApoli No material genético (DNA): 2 fitas ➛ Codificadora: fita que está a informação genética ➛ Molde: fita em que a RNA polimerase se liga para fazer a cópia da fita codificadora - A RNApoli sempre se liga a fita oposta em que está a informação genética Só podem sintetizar RNA na direção 5’-3’, portanto deve usar a fita que estiver na direção 3’-5’ como molde, necessariamente A RNApoli 1 e 3 transcrevem genes que codificam os RNAt, RNAr e vários outros que desempenham papeis estruturais e catalíticos. A RNApoli 2 transcreve genes que codifica o RNAm (mais importante) Camila Mariana Castro de Oliveira Medicina Nove de Julho BCM 2- Biologia molecular ➛ Um promotor é uma região do DNA que inicia a transcrição de um determinado gene ➛ Os promotores estão localizados perto do sitio de início da transcrição de genes, na mesma fita e a montante do DNA (para 5’ da fita código) ➛ RNA polimerase + fator sigma (holoenzima) – trabalham juntos ✓ Cofator inorgânico (Mg) ✓ Ativa na presença do fator sigma ✓ Promotor: local de ligação do fator sigma ✓ RNA polimerase: - abertura da dupla-helice - liberação do fator sigma - polimerização ✓ ✓ Reconhecimento do molde de DNA pelo promotor ✓ Complexo de iniciação: abertura da fita dupla do DNA ✓ Alongamento da cadeia de RNA: incorporação dos ribonucleotideos ✓ Terminação: reconhecimento da sequência terminadora. Liberação do complexo RNApoli, a molécula de RNA sintetizada e o DNA hélice dupla ➛ O processo termina quando chega na região terminadora ➛ As RNApoli de eucariotos necessitam da assistência de um grande número de proteínas acessórias – “fatores gerais de transcrição” se associam a cada promotor, em conjunto com a polimerase, dando início a transcrição ➛ No citoplasma: proteína “fator de transcrição” – quando acionado migra para o núcleo e se liga ao gene que ele comanda – proteína sinal que identifica a região para a RNA polimerase (p/ que ela se ligue na fita molde, copiando informação da fita codificadora) ➛ Região promotora: vários locais que esses fatores se liguem ➛ Domínio carboxi-terminal (CTD) ✓ A fosforilação de CTD faz com que componentes da maquinaria do processamento do RNA se acumulem Fator de transcrição: reconhecem os promotores e formam um complexo com várias outras proteínas que é responsável por recrutar a RNApoli para o inicio da transcrição Camila Mariana Castro de Oliveira Medicina Nove de Julho BCM 2- Biologia molecular sobre a RNApoli e estejam próximos para modificar o RNA recém-transcrito assim que ele emergir da RNApoli ➛ É o processo que ocorre antes do RNAm ser exportado para o citoplasma 1) Capeamento da extremidade 5’: CAP-5’ ✓ Ocorre a modificação da extremidade 5’ do transcrito de RNA – RNA é capeado pela adição do nucleotídeo Guanina contendo um grupo metila que é ligado a extremidade 5’ da fita ✓ Ocorre logo que a extremidade 5’ emerge - Retirada de um fosfato - Adição de uma Guanosina Monofosfato (GMP) - Metilação do GMP Obs: isso ocorre para que haja proteção para a extremidade não ser degradada pelas RNAse 2) Splicing: ✓ Retirada dos introns da estrutura da fita do RNA e, consequente, união dos exons para formar o RNAm ✓ Enorme gasto energético (ATP) ✓ Reação de transesterificação – romper duas extremidades e emendar elas✓ Spliceossomos: snRNAs: U1, U2, U4, U5, U6 – reconhecem as sequencias para que o splicing ocorra - Formação de snurps: snRNA + proteínas (responsáveis pela retirada) Obs: éxons – estruturas funcionais; guardam as informações – não são liberados 3) Poliadenilação: adição de uma cauda Poli-Adenina na extremidade 3’ pela enzima Polimerase poli-A ✓ É o processo de inserção de uma estrutura especial na extremidade 3’ do RNAm ✓ Essa extremidade é inicialmente clivada por uma enzima que corta a cadeia de RNA em uma sequência Importante: quando o TFFII-D se liga ao TATA box, os demais se organizam com a RNApol-2 e formam um complexo de iniciação de transcrição. ✓ Após ela se posicionar sobre o promotor, a RNApol-2 deve ser liberada do complexo de iniciação – para que ocorra essa liberação é essencial a adição de grupos fosfatos a sua “cauda”. ✓ Quando se inicia a transcrição, muitos fatores gerais de transcrição se dissociam do DNA, tornando- se disponível para outro processo transcricional. ✓ Quando a RNApol-2 termina a transcrição, ela também é liberada do DNA, os fosfatos de sua cauda são removidos por proteínas-fosfatases. Obs: os transcritos de diversos genes eucarióticos podem ser processados por splicing sob diferentes formas – esse splicing alternativo permite que diferentes proteínas sejam produzidas a partir de um mesmo gene Camila Mariana Castro de Oliveira Medicina Nove de Julho BCM 2- Biologia molecular determinada de nucleotídeos ✓ O RNAm é modificado por outra enzima que adiciona nucleotídeos Adenina à extremidade cortada (cauda Poli-A) ➛ As células produzem diversos tipos de RNA a partir da transcrição do DNA ✓ Maioria dos genes: RNA codificantes - Será traduzido em uma proteína - RNAm ✓ Minoria dos genes: RNA não-codificantes - Não será traduzido em uma proteína - RNA é o produto final - Função catalítica ou estrutural (fita simples com formas tridimensionais) - RNAr, RNAt, microRNA, siRNA, snRNAs ➛ RNAm: codificam proteínas ➛ RNAr: formam a região central da estrutura do ribossomo e catalisam a síntese proteica ➛ RNAmicros: regulam a expressão dos genes ➛ RNAt: usados como adaptadores entre o RNAm e os aminoácidos durante a síntese proteica ➛ RNAs não codificadores: usados no splicing do RNAm, na regulação genica, na manutenção de telomeros e em diversos outros processos celulares As modificações – capeamento e poliadenilação – aumentam a estabilidade de uma molécula de RNAm, facilitando a sua exportação para o citoplasma
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