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Faculdade de Ciências Departamento de Ciências Biológicas Licenciatura em Biologia e Saúde Análises Clínicas Docentes Drᵃ. Nilsa de Deus Msc. Armando Mabasso Lic.Assucênio Chissaque Discentes África, Paulo Digombe, Lúcidia Jó, Luís Mungoi, Ricardina Maputo, Agosto 2021 Tópicos Desnutrição energético - proteica em Moçambique; Dosagem de proteínas e produtos nitrogenados não proteicos ; Determinação de Lípidos e lipoproteínas; Interpretação dos resultados da determinação de lípidos e lipoproteinas; Determinação de enzimas; Interpretação dos resultados do teste de determinação de enzimas . Analises Clinicas 12-08-2021 2 Introdução A desnutrição faz referência as carências, excessos ou desequilíbrios na ingestão de energia, proteínas e/ou outros nutrientes. É mais acentuada nas crianças <5 anos, a desnutrição crónica é superior a 50% no norte, nas províncias de Nampula e Cabo Delgado, enquanto é inferior a 30% nas províncias de Maputo e Gaza. Patologias associadas: malária, pneumonia, HIV, candidíase oral e anemia. Factores de risco: pobreza, baixa escolaridade materna, maus hábitos alimentares, más condições de saneamento e higiene (origem das diarreias), etc. Analises Clinicas 12-08-2021 3 Cont. Analises Clinicas Para a identificação da desnutrição em Mocambique, recorre se mais o diagnóstico clínico e antropométrico, em relação ao diagnóstico laboratorial, que se referem as análises bioquímicas de líquidos corporais (diagnóstico complementar). 12-08-2021 4 Desnutrição Analises Clinicas . Consequências Mais risco de morbidade (doenças agudas e crónicas); Mais recurso aos serviços sociais; Maior risco de mortalidade; Pior desempenho cognitivo ou psicomotor; Menor desempenho educacional; Baixo desempenho no trabalho manual; Menor produtividade; Custos públicos e privados acrescidos. Causas Ambientais (cheias, secas, sismo, etc.); Socioculturais e económicas (pobreza e desigualdade, educação, emprego, salário, acesso a segurança social); Político - institucionais; Factor chave a produção (acesso desigual ). 12-08-2021 5 Desnutrição energético -proteica Classificação Normal (90 à 100%) Moderada (85 à 90%) Grave (75 à 85% ou < 75%) Analises Clinicas Etiologia DEP Primária (Crónica) Marasm o Kwashiorkor Marasmo Kwashiorko r Secundária Distúrbios ou fármacos Fisiopatologia Emagrecimento Atrofia muscular Glicose Aminoácido essenciais Gasto de gordura subcutâne a Epinefrinas Ácidos graxos 1 2 3 DEP : é um défice energético decorrente de uma deficiência de todos os macronutrientes (Morley, et al., 2020). 12-08-2021 6 Cont. 12-08-2021Analises Clinicas 7 Desnutrição aguda: caracterizada por uma rápida deterioração do estado nutricional durante um curto período de tempo e/ou edema bilateral (aguda moderada (DAM) e aguda grave (DAG)). Desnutrição crónica: caracterizada por falta de crescimento em crianças menores de 5 anos, e que se desenvolve durante um longo período de tempo. Deficiência de micro nutrientes: causada por uma falta de ingestão, absorção, ou a utilização de uma ou mais vitaminas ou minerais, e que incluem mais comumente as deficiências de ferro, zinco vitamina A, iodo, e das vitaminas do complexo B. Marasmo Analises Clinicas Marasmo: é desnutrição causada pela deficiência primariamente de carboidratos e lipídios, em estágios avançados, é caracterizada por perda muscular e falta de gordura subcutânea. a. Sinais e sintomas Magreza extrema e atrofia muscular; Abdómen proeminente devido à magreza; Pele frouxa, sobre tudo nas nádegas; Irritabilidade; Perda de peso para idade inferior a percentil 3 Fig. 1. Criança com Marasmo ( MISAU, DN, 2011) . 12-08-2021 8 https://2.bp.blogspot.com/-Xxt-9bLND0c/WvtDkHxC80I/AAAAAAAABHU/4AEG6HaVtKM0a_m1VCDBlVZql4tDe9P6QCLcBGAs/s1600/images+(3).jpg Kwashiorkor Analises Clinicas Kwashiorkor: é caracterizada pela ingestão inadequada de proteína e vitamina devido ao consumo excessivo de carbohidratos. Sinais e sintomas Edema geralmente generalizado; Cabelo fraco, seco e descolorido; Alterações cutâneas são frequentes; Peso para a idade muito baixo do percentil 3; Apatia; e anorexia. Fig.3. Criança com Kwashiorkor , MISAU,DN,2011). 12-08-2021 9 https://2.bp.blogspot.com/-U5F32pxylPY/WvtDDSrLcVI/AAAAAAAABHM/kjXGBwi7Br4QRwYBkbGvxC6dS7u2e1y5QCLcBGAs/s1600/images+(1).jpg Kwashiokor Marasmo Analises Clinicas , Características Marasmo com edema; Perda intensa do tecido subcutâneo ; Perda de peso para idade inferior a percentil 3. Fig.2.Criança com Kwashiorkor Marasmatico, MISAU,DN,2011). 12-08-2021 10 https://2.bp.blogspot.com/-XvzZeLHfIs8/WvtCotUzK4I/AAAAAAAABG4/UsjWpRSDWik8QNl2y24c-NRcfJJYJO4yACLcBGAs/s1600/images+(2).jpg Diagnóstico Analises Clinicas • Anamnese; • Exame físico. Exames clínicos • Peso/altura, peso/idade e Altura/idade (IMC = peso (kg)/altura[m]2 ); • Perímetro cefálico, Braquial e Pregas cutâneas. Antropometria • Hemograma, Triglicerides, Glicemia de Jejum; • Dosagem de hormônios, níveis séricos de albumina, transferrina, contagem total de linfócitos (células CD4+). Exames laboratoriais (Complementar es) 12-08-2021 11 Relação dos exames laboratoriais com a desnutrição 12-08-2021Analises Clinicas 12 Os testes laboratoriais tendem a informar a quantidade e a qualidade de determinados nutrientes e funções que podem estar prejudicados por situações de deficiências ou excesso no organismo (Sampaio, et al,. 2012). Hemograma completo: infecciosos assintomáticos. Os parâmetros , hemoglobina e hematócrito, para detectar presença de anemia; Glicemia: a detecção de hipoglicemia; Proteínas Totais: A síntese das proteínas hepáticas depende de aminoácidos disponíveis e o paciente com desnutrição terá essa deficiência em seu organismo; Cont. 12-08-2021Analises Clinicas 13 Albumina: funções de ligação e transporte de inúmeras substâncias (cálcio, zinco, magnésio, cobre, ácidos graxos de cadeia longa, esteróides, etc.), manutenção da pressão coloidosmótica do plasma, preservando a distribuição de água nos compartimentos corporais. Baixa concentração de albumina plasmática, cria a presença de edema. Ferro: O diagnóstico de deficiência de ferro, realizado com base no teor de hemoglobina, ferro sérico e ferritina. A dosagem de hemoglobina pode definir a condição de anemia. Cont. 12-08-2021Analises Clinicas 14 Creatinina: o índice de creatinina-altura é a medida indirecta da massa mus-cular e do nitrogénio corporal. É utilizado para estimar a massa proteica muscular; Cholesterol Total e Fracções: os seus níveis plasmáticos são reflexos da ingestão, da absorção da alimentação, da condição de síntese endógena e da capacidade de excreção. Seus valores baixos, incluindo as fracções HDL e LDL, podem indicar desnutrição. Tratamento Analises Clinicas Tratar hipoglicemia; Prevenir/tratar hipotermia; Tratar desidratação, distúrbios hidroelectroliticos, Choque séptico; Tratamento dietético; Tratar possíveis infecções; Correcção de deficiências de micronutrientes; Estimular vínculo mãe filho. 12-08-2021 15 De acordo com (IDS de 2011), A percentagem de crianças que sofrem de desnutrição crónica é elevada nas áreas rurais (46%) em relação nas áreas urbanas (35%). Gráfico 1. Categoria de consumo alimentar por Província. Zona rural Mapa 1. Distribuição demográfica de desnutrição crónica Fonte: IDS 2011. Mapa preparado pelo SETSAN. Epidemiologia em Moçambique . 12 Analises Clinicas 12-08-2021 16 Cont. Analises Clinicas Secretariado Técnico de Segurança Alimentar e Nutricional (SETSAN), Ministério da Agriucultura e Segurança Alimentar de Moçambique. Em coolaboração com parceiros Situação Actual (Abr-Set/19) Situação Projectada (Out/19 – Fev/20) Classificação de Desnutrição Aguda - 2019/20 12-08-2021 17 Cont. Analises Clinicas Tabela 1: Tabela de população comdesnutrição 2019/2020 12-08-2021 18 Tipo de desnutrição prevalente em Moçambique 12-08-2021Analises Clinicas 19 Segundo a ANI (2020), a desnutrição crónica afecta 43% das crianças menores de cinco anos em Moçambique. Em 2015, havia 2,1 milhões (de 4,8 milhões) de crianças com desnutrição crónica. Crítica em crianças de 1 a 5 anos, 47% das quais possuíam estatura baixa para a idade (com desnutrição crónica) e 6,1% sofriam de marasmo (desnutrição aguda). As taxas de desnutrição aumentam progressivamente do sul para o norte. A desnutrição crónica é superior a 50% no norte, nas províncias de Nampula e Cabo Delgado, enquanto é inferior a 30% nas províncias de Maputo e Gaza. O Mapa apresenta os principais indicadores referentes à desnutrição 12-08-2021Analises Clinicas 20 .Segundo a ANI (2020), a desnutrição crónica é mais prevalente na província de Nampula com 55,3 %. Em Moçambique, a desnutrição kwashiorkor marasmática é a mais prevalente (Renner, e al,. 2013). Alguns inquéritos Analises Clinicas Autor(e s) Ano de estudo Objectivos Resultados/ prevalência Tomas et al. 2015 Estudar a prevalência da desnutrição em Tete e Avaliar os factores determinantes nas distintas formas de apresentação da desnutrição. A prevalência da desnutrição aguda é de 23,6% e da desnutrição crónica 41,5%. Cane et al. 2015 Determinar a prevalência de desnutrição crónica, desnutrição aguda e baixo peso em crianças menores de 2 anos de idade Niassa (55,7%) C. Delgado (50,5%) e Nampula (39,2%). Zonas rurais (10%) e urbanas (7%). C. Delgado (23,8%), Nampula (20,4%) e Niassa (14,4%). 12-08-2021 21 Cont. Analises Clinicas Cassocera et al. 2015 Determinar a frequência da desnutrição crónica em criancas < 5 anos com diarreia, Mocambique. Freq.: 36,6% Factores: idade da criança e o estado serológico para o HIV. Mendes et al. 2014- 2017 Avaliar das principais Patologias Assossiadas a desnutrição grave, no hospital Central de Nampula, 2014 – 2017 A faixa etária:12 a 23 meses, 1.359 (57.0%). O marasmo (69.5%). As patologias mais frequentes: SIDA (13.6%); Pneumonia (12.2 - %); Diarreia (11.95%) Malária (11.91%) e anemia (10.5%); Tuberculose (3.1%); E 138 (5.7%) óbitos. 12-08-2021 22 Dosagem de proteínas e produtos nitrogenados não proteicos Analises Clinicas A dosagem das proteínas totais é útil na avaliação e acompanhamento das patologias que levam a deficiência na síntese proteica ou por perda excessiva. Métodos Biureto; Lowry; Bradford; Ácido Bicinchoninico (BCA); Eletroforese de proteínas séricas. 12-08-2021 23 Cont. Analises Clinicas Princípio: baseia na reação do reactivo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre em solução. Duas bandas de absorção, uma em 270 nm e outra em 540 nm. Vantagem: rápido, reagentes de baixo custo, menor número de interferentes e não apresenta grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas. Desvantagem: não é sensível. Fonte: reacção de biureto - Bing images 12-08-2021 24 https://www.bing.com/images/search?q=rea%c3%a7%c3%a3o+de+biureto&qpvt=reaccao+de+biureto&form=IGRE&first=1&tsc=ImageHoverTitle https://www.bing.com/images/search?q=rea%c3%a7%c3%a3o+de+biureto&qpvt=reaccao+de+biureto&form=IGRE&first=1&tsc=ImageHoverTitle https://www.bing.com/images/search?q=rea%c3%a7%c3%a3o+de+biureto&qpvt=reaccao+de+biureto&form=IGRE&first=1&tsc=ImageHoverTitle https://www.bing.com/images/search?q=rea%c3%a7%c3%a3o+de+biureto&qpvt=reaccao+de+biureto&form=IGRE&first=1&tsc=ImageHoverTitle https://www.bing.com/images/search?q=rea%c3%a7%c3%a3o+de+biureto&qpvt=reaccao+de+biureto&form=IGRE&first=1&tsc=ImageHoverTitle https://www.bing.com/images/search?q=rea%c3%a7%c3%a3o+de+biureto&qpvt=reaccao+de+biureto&form=IGRE&first=1&tsc=ImageHoverTitle Cont. Analises Clinicas 2. Método de Lowry Princípio: baseia-se numa mistura contendo molibdato, tungstato e ácido fosfórico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma redução quando reage com proteínas, na presença do catalisador cobre (II), e produz um composto com absorção máxima em 750 nm. Vantagem: alta sensibilidade (mais usado nos analizadore automatizado). Desvantagem: Seguir a Lei de Beer-Lambert. 12-08-2021 25 Cont. Analises Clinicas 3. Bradford Princípio: baseado na interacção entre o corante BG-250 e macro moléculas de proteínas que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromáticas. No pH de reacção, a interacção entre a proteína de alto peso molecular e o corante BG- 250 provoca o deslocamento do equilíbrio do corante para a forma, absorve fortemente em 595 nm. Vantagem: rápido e sensível que o de Lowry. Desvantagem: a variação da absortividade específica para diferentes proteínas, devido à baixa solubilidade. 12-08-2021 26 Cont. Analises Clinicas 4. Ácido Bicinchoninico (BCA) Princípio: reacção de cobre (II) com proteínas, em meio alcalino, produzindo cobre (I) e formando um complexo com o BCA, que absorve fortemente na região de 562 nm. Vantagens: mais simples no preparo dos reagentes, sensível e relativamente rápido. Desvantagens: a dependência da temperatura de incubação das amostras, a variação da absortividade específica para diferentes proteínas. 12-08-2021 27 Cont. Analises Clinicas 5. Eletroforese de proteínas séricas. Princípio: as proteínas mostram absorção na região de 280 nm e na região abaixo de 220 nm, sendo a primeira, devido a diversos aminoácidos (fenilalanina, cisteína, cistina, metionina, triptofano, histidina e tirosina), e a segunda devido à ligação peptídica. Vantagens: rápido e não destrói a amostra. Desvantagens: em amostras complexas, diversas substâncias absorvem no ultra- violeta, é sujeito a muitos interferentes. 12-08-2021 28 Produtos nitrogenados não protéicos Analises Clinicas A determinação da dosagem destas substâncias na rotina laboratorial faz parte do estudo do “status” renal do paciente. 12-08-2021 29 Lípidos Analises Clinicas O monitoramento do Perfil Lipídico (PL) é de extrema importância para prevenção e tratamento de enfermidades diretamente relacionadas a doença coronária. 12-08-2021 30 Marcadores do perfil Lipídico Analises Clinicas Colesterol total (CT); Triglicéridos; HDL (Bom Colesterol); LDL (Mau Colesteol ). As concentrações séricas do não HDL, das apoliproteinas (A- I e B), das razões CT/HDL, CT/LDL e Apo B/Apo A-I, são referidas como melhores pré-indicadores de doenças cardiovasculares. 12-08-2021 31 Cont. Analises Clinicas Determinação do perfil lipídico A determinação de parâmetros do perfil lipídico é realizado através de reagentes e equipamentos específicos que podem ser adquiridos comercialmente Bioquímica analisador portátil máquina de equipamento de teste de sangue. 12-08-2021 32 Cont. Analises Clinicas Para dosagem de lípidos no sangue são usados amostras de soro (obtida após a centrifugação do sangue total). 12-08-2021 33 Analisadores para doseamento de Lípidos usados em Moçambique Analises Clinicas BECKMAN COULTER AU480 LAC - HGM ABX PENTRA 400 Laboratório de Urgência de HGM COBAS C311 LAC - HGJM LAC - HCM 12-08-2021 34 Cont. Analises Clinicas Exemplo de exames analisados pelo aparelho Backman Coulter AU480. 12-08-2021 35 Valores de referências do perfil lipídico Analises Clinicas 12-08-2021 36 Interpretação dos resultados Analises Clinicas A classificação bioquímica das dislipidemias basea-se nos valores de referências para os parâmetros medidos e outras variáveis como estado nutricional, idade, sexo, massa corporal, estilo de vida. Hipercolesterolêmica isolada (aumento isolado de LDL ≥ 160mg/dL); Hipertrigliceridemia isolada (aumento isolado de trigliceridos≥ 150mg/dL); Hiperlipidemia mista, valores aumentados de LDL e trigliceridos Redução do HDL isolado ou com associacao de aumento de trigliceridos e LDL. 12-08-2021 37 Cont. Analises Clinicas Níveiselevados de apo B, diminuição dos níveis de apo A-I e aumento do índice apo B/apo A-I têm sido consistentemente associados ao risco de doença arterial coronária. Factores de riscos a dislipidemias Sedentarismo Álcool Comida Comportamentais Hipertensão arterial; Diabetes mellitus tipo II; Pré-obesidade e obesidade; Dislipidemia; Síndrome metabólica. Clínicos 12-08-2021 38 Enzimas Analises Clinicas Em algumas doenças as actividades de certas enzimas são medidas, principalmente, no plasma sanguíneo, eritrócitos ou tecidos. Enzimas plasma-específicas. Ex: pró-coagulantes: trombina, factor XII, factor X. Enzimas secretadas. Ex: Proteases ou hidrolases como a lipase, α-amilase, tripsinogênio. Enzimas celulares. Ex:Transaminases, lactato desidrogenases. 12-08-2021 39 Distribuição de algumas enzimas de importância diagnóstico Analises Clinicas Enzima Principal fonte Principais aplicações clínicas Aminotransferases (transaminases) Glândulas salivares, pâncreas, ovários Enfermidade pancreática Antígeno prostático específico Fígado, músculo esquelético, coração, rim, eritrócitos. Doenças do parênquima hepático, infarto do miocárdio, doença muscular. Creatinina quinase Músculo esquelético, cérebro, coração Infarto do miocárdio, enfermidades musculares Fosfatase ácida Próstata, Eritrócitos Carcinoma da próstata Γ_Glutamiltransferas e Fígado, rim Enfermidade hepatobiliar, alcoolismo Lactato desidrogenase Coração, fígado, músculo esquelético, eritrócitos, plaquetas, nódulos linfáticos Infarto do miocárdio, hemólise, doenças do parênquima hepático Lipase Pâncreas Enfermidade pancreática 12-08-2021 40 Métodos que analisam a variação da absorção da coenzima que participa da reacção enzimática Analises Clinicas Valores de referência de ALT Homens 45U/L Mulheres 37U/L 12-08-2021 41 Cont. Analises Clinicas Determinação da actividades enzimáticas Método Métodos que analisam o consumo do substrato. Métodos que analisam o produto final. O produto formado já é um composto corado; O produto formado deve ser transformado em composto corado. Métodos que analisam a variação da absorção da coenzima que participa da reacção enzimática . 36 12-08-2021 42 Amilase Analises Clinicas Catalisa o desdobramento do amido e glicogênio ingeridos na dieta. Secretada, fundamentalmente, pelas glândulas salivares e células acinares do pâncreas. Valores de referências de amilase. Soro de adulto 60 a 160 U/dL (Somogyi). Urina 1500 a 1800 U/d (Somogyi) ou 70-275 U/h. Líquido duodenal 50.000 a 80.000 Ud/L (Somogyi). Valores baixos Valores altos Insuficiência pancreatica; Doenças graves de Fígado;Pancreatite crónica Pancreatite aguda; Complicações da (PA); Insuficiência renal; Abscesso pancreática; Lesões das glândula salivares . 12-08-2021 43 Cont. Analises Clinicas Amiloclásticos (Iodométricos) o substrato de polissacarídeo é hidrolisado pela acção da amilase com formação de monossacarídeos e dissacarídeos. Urina Sangue Métodos que analisam o consumo do substrato 12-08-2021 44 A Fosfatase alcalina (FA) Analises Clinicas É uma enzima inespecíficas, que catalisa a hidrólise de vários fosfomonoésteres em pH alcalino, é encontrada na mucosa intestinal, fígado, túbulos renais, baço, ossos e placenta. Determinação da Fosfatase Alcalina Valores baixos Valores altos Hiperparatireoidismo ; Hipofosfatemia; Desnutrição,; Doênça celiaca. Desordens do trato biliar ; Carcinoma hepatocelular ; Abscessos e granuloma; Doença de Paget ; Osteomalácia e raquitismo; Tumores ósseos e Gravidez. Amostras: Soro ou plasma heparinizado, Mas o ensaio deve ser realizado logo que possível após a coleta Resultados falsamente elevados: paracetamol, aspirina, agentes antifúngicos, morfina, anticoncepcionais orais e tiazidas. 12-08-2021 45 Métodos que analisam o produto final Analises Clinicas P-Nitrofenilfosfato: em meio alcalino a (FA) catalisa a transferência do grupo fosfato do p-nitrofenilfosfato para 2-amino, 2-metil e 2- propanol libertando o p-nitrofenol (amarelo). A actividade da enzima é medida através da velocidade de formação do p-nitrofenol após incubação com o soro medida em 405 nm. 4-Nitrofenilfosfato: é o substrato mais usado actualmente, este mede o 4-nitrofenóxido liberado após a hidrólise, que é proporcional à actividade da fosfatase alcalina. Valores de referência para a fosfatase alcalina (4-nitrofenilfosfato – Bowers) Adultos 20 à 105 U/L Crianças de 0 a 3 meses 70 à 220 U/L Crianças de 3 meses a 10 anos 60 à 150 U/L Jovens de 10 a 15 anos 60 à 260 U/L 12-08-2021 46 Aminotrasferases (Transaminases) Analises Clinicas Enzimas essências envolvidas no metabolismo central de todos os seres vivos. As actividades mais elevadas encontram-se no miocárdio, fígado, músculo esquelético, com pequenas quantidades nos rins, pâncreas, baço, cérebro, pulmões e eritrócitos. Valores baixos Valores altos Azotemia; Diálise Renal Crônica; Infecção do trato urinário . Dano hepatocelular; Hepatite aguda,; Cirrose hepática; Disfunção hepatocelular; Mononucleose infecciosa; Infarto do miocárdio; Pancreatite aguda. 12-08-2021 47 Conclusão Analises Clinicas A desnutrição é uma enfermidade muito prevalente que tem um papel relevante na morbi-mortalidade infantil. A desnutrição não resulta apenas da ingestão de poucos alimentos, mas também de uma combinação de factores: insuficiência de proteínas, energia e micronutrientes, infecções ou doenças frequentes, etc. Em Moçambique a província mais afectada ou prevalente de desnutrição energético - proteico é de Nampula com 55,3 %. A percentagem de crianças que sofrem de desnutrição crónica é elevada nas zonas rurais em relação nas zonas urbanas. 12-08-2021 48 Referências bibliográficas Analises Clinicas 1. Morley, J. E ., et al,.(2020) Desnutrição energético-proteica (DEP) University School of Medicine. https://www.msdmanuals.com/pt/profissional/dist%C3%BArbiosnutricionais/desnutri%C3%A7%C3%A3o/desnutri%C3%A7%C3%A3o- energ%C3%A9tico-proteica-dep. Acessado: 01.08.2021 as 17h45. 2. Avaliação Alimentar e de Segurança Alimentar de Base do SETSAN (2013); Inquérito Demográfico e de Saúde (2011). https://www.unicef.org/mozambique/nutri%C3%A7%C3%A3o acessado: 01.08.2021 as18h33. 3. Ministério da Saúde. 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