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Coloração de GRAM
Identifica grupos bacterianos com base na sua 
parede celular
Preparo:
Fixação na lâmina mata micro-organismos;preserva sua estrutura;
adere os micro-organismos à lâmina.
pode ser feita também com metanol
Procedimento:
Esfregaço já fixado é coberto por corante púrpura por 
cerca de 1 minuto (e lâmina lavada com água)
Em seguida é coberto por iodo por 1 minuto (e a lâmina 
é lavada com água)
O esfregaço é coberto com álcool por 10 segundos (e 
a lâmina é lavada)
Em seguida é coberto com safranina por 1 minuto 
Por fim, a lâmina é lavada com água, seca com papel 
e examinada ao microscópio
Funções:
Cristal violeta: cora todos os tipos de bactérias
Iodo: forma um complexo com o corante púrpura
impede que o corante saia das 
bactérias gram-positivas
Álcool: rompe a camada externa (lipopolissacarídeo) 
das bactérias gram-negativas
facilita a saída do 
corante púrpura 
camada fina de 
peptídeoglicano
Safranina: é um contracorante que permite a 
visualização ao se fixar nas bactérias gram-negativas
comprovando que sua 
parede bacteriana é mais 
delgada
Coloração de Ziehl-Neelsen
Se liga apenas as bactérias que apresentam material lipídico em 
suas paredes celulares
Também chamada de 
coloração 
acidorresistente
Procedimento:
Aplicar corante vermelho carbolfucsina
Aquecer a lâmina no bico de Busen por 5 minutos (e 
lavar a lâmina com água)
Aplicar ácido-álcool no esfregaço até o lavado sair 
límpido (e lavar com água)
Aplicar azul de metileno ao esfregaço por 2 minutos 
(e lavar com água)
Observar a lâmina no microscópio
Funções:
Carbolfucsina: cora bactérias com camada cerosa
Lâmina aquecida: aumenta a penetração e retenção 
do corante
Álcool-ácido: remove o corante de bactérias não 
acidorresistentes
Azul de metileno: é contracorante para as bactérias 
que perdem a carbolfucsina
@miresumos.medMaria F. B. Minari - TXIII
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