METODOS DE INOCULAÇÃO

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MÉTODOS DE INOCULAÇÃO 
 MÉTODOS DE INOCULAÇÃ O 
 
O que é inoculação? 
Inocular significa introduzir microrganismos num meio de cultura​, assim quando a alça estéril é mergulhada                             
em uma suspensão contendo microrganismos e a seguir retirada do meio, forma-se uma película (gota)                             
contendo um determinado número de microrganismos. Essa “alçada” é chamada de inóculo.  
 
Instrumentos de inoculação  
● Alça de platina níquel- cromo ou de inoculação  
● fio ou agulha de platina  
● pipeta pasteur  
● palito de madeira 
● pipeta sorológica  
● pipetador mecânico com bomba de plástico  
 
Inóculos líquidos em meios líquidos  
Utiliza a suspensão com microrganismos, mergulhando a alça na suspensão e depois colocando-a num meio                             
líquido. 
Após a inoculação 
● alças e fios devem ser flambados até o rubro, para prevenir a contaminação do indivíduo ou do                                 
ambiente de trabalho.  
● Pipetas após o uso devem ser imediatamente imersas em solução desinfetante. 
 
Inóculos sólidos em meio líquido  
Para retirar uma pequena quantidade de material sólido (ex: microrganismo proveniente de uma colônia de                             
agar) pode ser usada uma alça ou fio de platina. 
● tocar alça ou fio no material 
● A alça ou fio contendo os micro-organismos é mergulhada no meio líquido e lentamente agitados para                               
a liberação do inóculo.  
IMPORTANTE: Este método só pode ser usado quando a quantidade não importa pois a quantidade de material                                 
ou o número de microrganismos retidos na superfície não é mensurável.  
 
Inóculos líquidos ou sólidos em meios sólidos 
 
Semeadura para obtenção de colônias isoladas ou semeadura em estrias 
Quando o inóculo contém diferentes ou muitos microrganismos de uma mesma espécie,                       
utiliza esta técnica para obter colônias isoladas, bem separadas umas das outras. 
● O inóculo é progressivamente espalhado para promover a separação das células                     
na superfície do ágar. 
● A alça deve tocar levemente a superfície do meio, a fim de evitar rasuras no ágar.  
● alça deve ser flambada para eliminar os microorganismos remanescentes na                   
mesma a cada bloco de estrias  
● Este método baseia-se no fato de que cada célula (ou grupo de células) origina uma                             
colônia, assim cada colônia isolada corresponde a uma cultura pura. 
 
 
 
 
Semeadura em ágar inclinado e semi-sólido 
Esse método é utilizado quando se quer promover o crescimento de micro-organismos simultaneamente, em                           
condições de ​semi-anaerobiose e aerobiose.​ E para isso, usa-se o ​meio sólido inclinado em tubo​. 
AGAR INCLINADO - Introduzir o inóculo no tubo e passar lentamente em zigue-zague pela superfície do meio.                                 
Dessa forma, o inóculo fica distribuído na base (condição de anaerobiose) e na superfície do meio (condição de                                   
aerobiose). 
 
SEMI-SÓLIDO - MEIO SIM  
Nos tubos contendo meio semi-sólido, o procedimento é o mesmo: Inocular a suspensão contendo bactérias no                               
meio semi sólido. 
Porém este meio não apresenta superfície inclinada uma vez que não é completamente sólido 
A inoculação deve ter profundidade 
 
S - SULFETO  
I - INDOL 
M - MOTILIDADE   
 → sem motilidade - o microrganismo cresce onde a agulha passou pois não pode se mexer  
 
Semeadura com espalhamento em superfície 
Esta técnica consiste em espalhar na superfície de meio sólido em placa, um inóculo contido num volume                                 
pequeno  
o inóculo deve ser previamente diluído e espalhado com alça de Drigalski ou bastão de vidro em forma de L                                       
com movimentos leves e homogêneos para se obter colônias isoladas para contagem.  
 
 
Semeadura “pour plate” ou profundidade 
 
Para se obter culturas isoladas o inóculo é colocado em placa de Petri (estéril) é adicionado o meio sólido                                     
estéril fundido, em frasco, a temperatura do meio deve ser 40ºC. A placa é homogeneizada fazendo- se                                 
movimentos suaves, como estivéssemos escrevendo o número 8. Após o resfriamento e solidificação a placa é                               
então incubada em estufa, por tempo e temperatura adequados. O crescimento das colônias pode ser                             
observado em toda profundidade do meio, conforme as características do micro-organismo semeado. 
 
➔ Placas de Petri sempre são incubadas invertidas. A razão pela qual elas ficam invertidas (de cabeça                               
para baixo) é para o meio não desidratar, condensando então água na tampa.