Microscopia 2018

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CURSOS DE HISTOLOGÍA y ANATOMÍA 
 MICROSCOPÍA 
 
Instituto Aula Magna©, Todos los Derechos Reservados 
Tucumán 1901, Espacio de La Salle, CABA Te: 4373-0816 / 11-2826-6629 www.amagna.com.ar 
 
 
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NIVELES DE ORGANIZACIÓN DE LA MATERIA 
 
Toda la materia que compone el universo, interactúa de diferentes maneras dando así lugar a lo que se 
conoce como niveles de organización. 
 
La forma elemental de la materia son los átomos, los cuales al combinarse formarán distintos tipos de 
moléculas. 
Obviamente, para conocer la estructura de una molécula determinada no es suficiente con mirarla 
atentamente, sino que hay que recurrir a una técnica llamada difracción de rayos X. 
 
Esta técnica permite estudiar elementos que midan menos de1nm (0,000001mm). 
Ahora bien, la combinación de moléculas posibilita la conformación de macromoléculas, las cuales se 
asocian para formar entre otras cosas, a los componentes celulares (REL, REG, mitocondrias, etc.). A estos 
elementos se los llama submicroscópicos ya que no es posible visualizarlos con microscopios ópticos, por 
estar debajo de su poder de resolución) pero sí con el microscopio electrónico, el cual trabaja con un poder 
de resolución entre 200 y 0,4nm (o sea que permite ver objetos que midan entre 200 y 0,4nm). 
Con la combinación de los elementos submicroscópicos llegamos a la célula y con la asociación de las 
mismas a los tejidos, ambos niveles de organización son susceptibles de ser observados utilizando el 
microscopio óptico. Tener presente que estos microscopios son útiles para observar objetos entre 100ª 0,2 
micrones (1micron = 0,001mm). 
 
Por último, cuando se asocian los tejidos, se conforman los órganos, a estos, es posible visualizarlos con el 
ojo humano, ya que su tamaño está por encima de 0,1mm. 
Es importante recalcar que el ojo humano le es imposible distinguir objetos de menos de 50 micrones de 
diámetro (amplificación limitada), tampoco puede discriminar la separación de dos puntos si estos están a 
menos de 0,01mm de distancia (limite de resolución 0,01mm). 
Para resolver estas limitaciones, se utilizan distintos lentes, las cuales combinadas constituyen el microscopio 
compuesto (porque está constituido por más de un lente). 
Este aparato permitió aumentar la amplificación del ojo y disminuir su límite resolutivo. 
 
 
 
Resumen: 
 
• Átomos: oxígeno, nitrógeno, carbono, etc. 
• Moléculas: conjunto de átomos, ejemplo: agua, sales, etc. 
• Macromoléculas: asociación de moléculas, ejemplo: proteínas, lípidos, glúcidos, ácidos nucleicos. 
• Células: conformados por la asociación de macromoléculas. 
• Tejidos: conjunto de células y matriz extracelular que poseen características y funciones en común. 
Ejemplo: epitelios, conectivos, muscular, nervioso. 
• Órganos: conjunto de tejidos que se asocian para cumplir con una función determinada, ejemplo: riñón, 
hígado, estómago, corazón, etc. 
• Aparatos: conjunto de órganos cada uno de ellos constituido por varios tejidos diferentes. Ejemplo: 
aparato respiratorio, urinario, digestivo, etc. 
• Sistemas: conjunto de órganos que cada uno de ellos está constituido por un solo tejido. Ejemplo: 
sistema nervioso. 
 
 
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MICROSCOPIA 
 
DESCRIPCIÓN DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO: 
 
El microscopio óptico está constituido fundamentalmente por dos partes; una parte mecánica y una parte 
óptica. 
 
SISTEMA MECÁNICO: 
 
1- Pie: le da sostén y apoyo al 
microscopio. 
2- Columna: en ella se apoyan otros 
constituyentes del sistema mecánico, 
por ejemplo; platina, tubo, tornillos 
macrométrico y micrométrico. 
3- Tornillo macrométrico: al moverlo, 
acerca el tubo a la platina donde se 
haya apoyado el preparado. El 
movimiento es grande. 
4- Tornillo micrométrico: genera el 
desplazamiento vertical del tubo, pero 
produce un movimiento más 
minucioso. 
5- Tubo: es un cilindro hueco de 160mm 
aproximadamente; que posee dos 
extremos uno superior en el cual se 
inserta el ocular (por donde miramos) 
y otro inferior donde queda ubicado el 
revólver. 
6- Revolver: es una estructura giratoria 
donde se montan los diferentes 
objetivos. 
7- Platina: estructura perpendicular al 
tubo, funcione de plataforma en la 
cual se apoya el preparado. Posee un 
orificio en la parte central para permitir 
el paso de luz a través de ella. 
8- Subplatina: se ubica por debajo de la 
platina y sirve como sustento del 
condensador. 
 
 
SISTEMA ÓPTICO: 
 
Antes de comenzar con la descripción de los 
componentes del sistema óptico es necesario 
comprender cuál es el fundamento del 
funcionamiento del microscopio compuesto de 
campo claro (también llamado de luz). 
Se define como luz al agente físico que hace 
visible los objetos. La luz está formada por 
partículas llamadas fotones, los cuales viajan por el 
espacio, describiendo una trayectoria ondulatoria. 
Los fotones, al impactar contra los objetos, son en 
parte absorbidos y en parte reflejados por estos, 
 
 
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cambiando así la longitud de onda de los fotones, y dando así la impresión sensorial de los colores (los 
diferentes colores son la consecuencia de las diferentes longitudes de ondas que pueden tener los fotones 
refractados). 
 
Este principio físico (el de la desigual absorción y reflexión de la luz por los objetos) es el fundamento del 
funcionamiento del microscopio de luz. Por eso es indispensable para que este aparato funcione, que esté 
iluminado sea con luz natural o artificial. 
 
 
SISTEMA ÓPTICO DE ILUMINACIÓN: 
 
1- Fuente de luz: consta de una lámpara ubicada en la base del microscopio, o en el caso de no estar 
incluida en el mismo, se colocará a 30 cm de distancia del espejo del aparato, con este espejo se 
guiará a la luz hacia el condensador. 
2- Condensador: consta de un sistema de lentes convergentes; como su nombre lo indica su función es 
la de condensar lo rayos de luz dispersos en un solo haz de luz para que este atraviese el preparado 
histológico. 
3- Diafragma: se ubica por debajo del condensador, y su función es la de regular los rayos luminosos 
que inciden en el mismo. 
 
SISTEMA ÓPTICO DE OBSERVACIÓN: 
 
1- OBJETIVO: consta de un conjunto de lentes, que formarán una imagen; aumentada, real e 
invertida del objeto atravesado por la luz. 
Hay de dos tipos: 
Secos: son los que no necesitan de ninguna sustancia interpuesta entre la lente frontal y el 
preparado histológico, los más utilizados 
son: 
a) Panorámico: tiene un aumento de 
5X. 
b) Seco débil: tiene un aumento de 
10X. 
c) Seco fuerte: tiene un aumento de 
40X. 
 
 Inmersión: son los que necesitan una sustancia 
interpuesta entre la lente frontal y el preparado 
histológico (dicha sustancia tiene un índice de 
refracción similar al vidrio). 
El objetivo de inmersión más usado es el que 
tiene un aumento de 100X. 
 
Hay que tener en cuenta que a pesar de estar 
usando un buen objetivo la imagen puede sufrir 
algún tipo de distorsión. 
 
 
 
A estos defectos se los llama aberraciones y las más comunes son: 
1) Aberración de esfericidad:Ocurren cuando los rayos que atraviesan el objetivo no se cruzan en el mismo punto, quedando 
así varias imágenes. 
Esta aberración se corrige cerrando un poco el diafragma del microscopio, anulando así los rayos 
más periféricos que llegan al objetivo. 
2) Aberración cromática: 
Ocurre cuando la descomposición de la luz al atravesar el objetivo es exagerada. Se corrige 
utilizando objetivos acromáticos. 
 
 
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2- OCULAR: 
Compuesto por dos lentes planos convexas: la inferior 
llamada lente objetivo (recibe la imagen formada por el 
objetivo) y la superior llamada lente ocular (está más 
cerca del ojo). 
Los oculares más comunes son los que tienen un 
aumento de 10X. 
 
 
 
 
Marcha de rayos. 
Se entiende por marcha de rayos a la transformación que ocurre con la imagen de la muestra al observarla 
con el microscopio óptico. 
Como síntesis podemos decir que el lente objetivo aumenta la imagen del objeto y la proyecta sobre el 
ocular. El lente ocular aumenta aun mas esta imagen proyectándola sobre el ojo del observador. 
 
La muestra es tomada por el lente objetivo y produce una imagen (I1), esta imagen es de mayor tamaño, 
invertida y real (es real porque es una imagen de un objeto). Esta imagen es tomada por el lente ocular que 
produce una imagen (I2), que es directa (con respecto a I1, ya que están del mismo lado del plano), de mayor 
tamaño y virtual (ya que es una imagen de otra imagen). Por lo tanto, la imagen final (I2) con respecto a la 
muestra es: 
1- De mayor tamaño. 
2- Invertida. 
3- Virtual. 
 
 
 
AUMENTO DEL MICROSCOPIO 
Para calcular el aumento total del microscopio se multiplica el aumento del objetivo por el aumento del ocular. 
 
 
 
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CONCEPTOS IMPORTANTES 
 
- Poder de resolución: es la capacidad que tiene un microscopio para poder 
observar objetos pequeños (o lo que vale decir los detalles de un objeto). 
 
 
- Límite de resolución: es la mínima distancia que debe haber entre dos puntos 
para que puedan ser percibidos como puntos distintos. 
 
Para que podamos ver dos objetos separados hace falta que los mismos estén separados por más de 0,1mm 
(ya que este es el límite de resolución del ojo humano). Si los objetos están más cerca el uno del otro los 
percibiremos como uno solo. 
Si dos objetos están a 0,01mm separados (o sea, 10 veces más cerca que en el ejemplo anterior) la única 
forma que podamos verlos como tal, es aumentando la imagen de ellos 10 veces. Para eso debemos utilizar 
un lente. 
Lo que hemos hecho entonces es, disminuir nuestro límite de resolución de 0,1mm a 0,01mm, o lo que es lo 
mismo aumentando nuestro poder de resolución 10 veces. 
Como se habrán dado cuenta estas dos variables son inversamente proporcionales. 
 
Es importante conocer la forma de calcular el límite de resolución de un determinado aparato, para esto hay 
una fórmula. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Se desprende de esta fórmula que la única forma de disminuir el límite resolutivo de un determinado aparato 
es: 
 
1. Modificar la luz utilizada 
de manera que ésta 
tenga una longitud de 
onda menor. 
2. Aumentar la apertura 
numérica. Para lo cual 
hay que conocer la 
fórmula. 
 
 
 
Donde n es el índice de refracción del medio y representa el cambio de dirección de la luz cuando cambia de 
medio. 
 
n del aire = 1 
n del agua = 1,33 
n del aceite = 1,51 
n del vidrio = 1,52 
 
Alfha: es el semiángulo de apertura. Es la mitad del ángulo de apertura, representado por los rayos más 
periféricos que inciden en el objetivo. 
 
 
 
 
 
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Diferencias entre el Microscopio óptico y el microscopio electrónico. 
 
 
 
 
Características Microscopio óptico Microscopio electrónico 
Radiación empleada Haz de Luz Haz de electrones 
Fuente de radiación Lámparas artificiales o luz solar Filamento de tungsteno que emite 
electrones 
Medio presente en el tubo Aire Vacio 
Lentes Lentes de cristal Bobinas eléctricas (lentes 
electromagnéticas) 
Elemento contrastante Sustancias de tinción Placa fluorescente 
Limite de resolución 0,2 micrómetros 2,5 nanómetros 
Tamaño del campo observado 1500 micrómetros con el seco débil 
375 micrómetros con el seco fuerte 
Menor a 10 micrómetros (depende del 
aumento del microscopio) 
Nivel de información morfológica 
obtenida 
Estructura Ultraestructura 
Fijador empleado Formol Glutaraldehído y tetraóxido de osmio 
Sustancia de inclusión empleada Parafina Resina epoxi 
Espesor del corte 5 a 10 micrómetros 600 a 800 angstrom 
Instrumento del corte empleado micrótomo Ultra micrótomo con cuchillas de 
diamante 
Obtención de contraste Dado por la diversidad de coloración Por diferente densidad de captación 
de electrones. 
Ventajas Se pueden observar células vivas 
Bajo costo 
Se puede observar la ultraestructura 
Desventajas Nivel de resolución bajo Altísimo costo 
Gran tamaño 
 
 
 
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TIPOS DE MICROSCOPIOS 
 
MICROSCOPIOS ÓPTICOS 
 
Microscopio de campo claro: es el microscopio óptico compuesto utilizado en la mayoría de los 
laboratorios. Para formar una imagen a partir de un corte histológico usa luz visible, por esto la muestra debe 
ser lo bastante fina como para que los haces de luz puedan atravesarla. También se usan métodos de 
tinción, según las necesidades, con el fin de aumentar los detalles en la imagen. 
 
Microscopio de contraste de fase: posibilita la observación de muestras sin colorear, por lo que resulta útil 
para estudiar especímenes vivos. 
 
Microscopio de interferencia: es una modificación del anterior que permite la cuantificación de masa en los 
tejidos. 
 
Microscopio de interferencia diferencial: también es una modificación del microscopio de contraste de 
fase, que permite estudiar las propiedades de superficie de las células. 
 
Microscopio de fluorescencia: permite la observación de estructuras fluorescentes, ya sea naturales o 
artificiales. 
 
Microscopio de barrido con focal: se usa para estudiar la estructura de sustancias biológicas. Combina 
partes de un microscopio de campo claro con equipo fluorescente y un sistema de barrido que emplea un 
rayo láser. A través de una computadora se reconstruye la imagen tomada por planos, a una imagen 
tridimensional. 
 
Microscopio de luz ultravioleta: sus resultados se registran fotográficamenteya que la luz U.V. no es 
visible y daña la retina. Se utiliza en la detección de ácidos nucleicos, que absorben esta luz. 
 
Microscopio de luz polarizada: es una modificación del microscopio de campo claro. Debido al fenómeno 
de birrefringencia se pueden observar sustancias cristalinas y moléculas fibrosas. 
 
 
MICROSCOPIO ELECTRONICOS 
 
Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza un haz de electrones para producir la imagen. 
Permite la observación de detalles a escala macromolecular. 
Microscopio electrónico de barrido (MEB): en este caso el haz de electrones no atraviesa la muestra, sino 
que choca contra su superficie. Permite una gran magnificación de las imágenes. 
 
 
http://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/link/link.asp?url=http://photonics.cnb.uam.es/Photonic_sp/Review/fluores.htm
http://www.anatomohistologia.uns.edu.ar/link/link.asp?url=http://photonics.cnb.uam.es/Photonic_sp/Review/confocal.htm