Trabajo-Practico-I-Fiorella-Agustina-Lista

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Universidad Nacional Autónoma de México Facultad de 
Mexico 
 
 
 
CLASE “ QUIMICA” 
 
 
 
trabajo 
 
 
 
 
GRUPO:24 
 
 
 
NOMBRE DEL PROFESOR: JUAN GERMAN RIOS ESTRADA 
 
 
 
NOMBRE DEL ALUMNO: CORTES HERNANDEZ RICARDO 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Objetivos: 
 
• Determinar la concentración de una solución de ovoalbúmina por un 
método colorimétrico y espectrofotométrico. 
 
 
 
2 
 
• Medir la concentración proteica de un homogenato de hígado de rata 
mediante el método colorimétrico de Biuret. 
 
Materiales y métodos: 
 
Según la guía de Trabajos Prácticos - Parte I de Química Biológica 2017, páginas 
11,12 y 13. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Resultados: 
 
Anexo I: Reacción colorimétrica de Biuret 
 
Tabla I: Protocolo de trabajo a partir del cual se realiza la curva de calibración 
 
Tabla II: Concentración de solución patrón de ovoalbúmina en cada tubo 
Tubo 
 
(nº) 
H2O 
 
(ml) 
Solución 
patrón de 
albúmina 
(ml) 
Solución de 
ovoalbúmina 
(ml) 
Homogenato 
de hígado 
de rata 
(dil 1/5) 
Reactivo de 
Biuret 
(ml) 
1-2 2,0 - - - 4,0 
3-4 1,5 0,5 - - 4,0 
5-6 1,0 1,0 - - 4,0 
7-8 0,5 1,5 - - 4,0 
9-10 - 2,0 - - 4,0 
11-12 1,2 - 0,8 - 4,0 
13-14 1,5 - - 0,5 4,0 
 
 
 
3 
 
 
Tubo 
(nº) 
Concentración 
(mg/mL) 
1-2 0,000 
3-4 0,167 
5-6 0,333 
7-8 0,500 
9-10 0,667 
 
Tabla III: Masa de BSA en cada tubo 
 
Tubo 
(nº) 
Masa 
(mg) 
1-2 0 
3-4 1 
5-6 2 
7-8 3 
9-10 4 
 
*Nota: la simplificación de datos puede realizarse ya que se trabaja con un mismo 
volumen final en todos los tubos. 
 
Tabla IV – Análisis espectrofotométrico: Datos de absorbancia para cada tubo 
 
Tubo 
(nº) 
Absorbancia 
(540 nm) 
Tubo 
(nº) 
Absorbancia 
(540 nm) 
1 0,028 8 0,120 
2 0,025 9 0,157 
3 0,073 10 0,167 
4 0,070 11 0,138 
5 0,105 12 0,143 
6 0,095 13 0,197 
7 0,134 14 0,094 
 
*Nota: El valor de absorbancia del tubo nº 13 no ha sido tenido en cuenta para los cálculos 
 
Gráfico I: Absorbancia en función de la concentración de BSA 
 
 
 
 
4 
 
 
 
Ecuación de la recta: y = 0,195x + 0,032 
Regresión lineal: R² = 0,981 
 
 
Gráfico II: Absorbancia en función de la masa de BSA 
 
 
 
 
Ecuación de la recta: y = 0,032x + 0,032 
Regresión lineal: R² = 0,981 
 
Tabla V – Datos de concentración y masa hallados para cada una de las muestras 
incógnitas 
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0 1 2 3 4 5
A
B
SO
R
B
A
N
C
IA
 (
5
4
0
 n
m
)
CONCENTRACION BSA (mg/mL)
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0 1 2 3 4 5
A
B
SO
R
B
A
N
C
IA
 (
5
4
0
 n
m
)
MASA DE BSA (mg)
 
 
 
5 
 
 
TUBO 
(n°) 
MUESTRA 
INCÓGNITA 
CONCENTRACIÓN 
(mg/mL) 
MASA 
(mg) 
11-12 Ovoalbúmina 4,17 4,24 
13-14 Proteínas totales* 19,1 19,4 
 
*En homogenato de hígado de rata 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Anexo II – Medición de la absorbancia a 280 nm 
 
MUESTRA CONCENTRACIÓN 
(M) 
A 3,47 𝑥 10−5 
B 5,81 𝑥 10−5 
C 8,22 𝑥 10−5 
INCÓGNITA 9,93 𝑥 10−5 
 
 
Conclusiones: 
 
Luego de establecer claramente el protocolo de trabajo que se detalla al comienzo de la 
sección de resultados, se logró determinar la concentración de la solución de ovoalbúmina 
y la concentración total de proteínas de una muestra de homogenato de hígado de rata. 
Asimismo, pudieron determinarse las masas correspondientes a cada muestra, ya que al 
trabajar con volúmenes finales iguales en los tubos, pueden simplificarse los cálculos y 
efectuar una curva de calibración tanto para la determinación de la concentración de la 
muestra incógnita como la de la masa. 
 Las determinaciones mencionadas pudieron llevarse a cabo a través de la utilización del 
método colorimétrico de Biuret, en el cual se produce una reacción de iones 𝐶𝑢2+ en 
medio alcalino con compuestos que poseen enlaces peptídicos o amida consecutivos o 
separados por un átomo de carbono intermedio, tales como presentan la ovoalbúmina y 
las proteínas del homogenato. Esta reacción, da un complejo color púrpura, donde la 
intensidad es directamente proporcional a la concentración de proteína/as. Utilizando los 
datos obtenidos de absorbancia para cada una de las diluciones de los patrones de BSA, 
pudieron construirse efectivamente las curvas de calibración. 
 Finalmente, mediante la utilización de la Ley de Lambert y Beer, con 
absorbancias medidas a 280 nm, pudieron calcularse las concentraciones para las 
muestras A, B y C. 
 
 
 
6 
 
Se ha determinado que la muestra incógnita correspondía a la muestra C debido a 
que es esta muestra la que mayor semejanza en concentración presenta respecto de la 
calculada para la muestra incógnita. 
 
 
 
 
Anexo de cálculos: 
 
 
 
 
7 
 
 
 
 
 
8