Separación del analito de las interferencias

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Separación del analito de 
las interferencias
Dr. Paul Vargas Jentzsch
• Cuando un método tiene un alto grado de 
selectividad para un analito, la tarea de análisis 
se simplifica. Desafortunadamente, tales 
métodos analíticos son raros.
• En ausencia de un interferente, la relación entre 
la señal de la muestra, Smuestra y la 
concentración del analito, CA es:
Smuestra = kA CA
Donde kA es la sensibilidad del analito.
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Introducción
Introducción
• En presencia de un interferente, la ecuación es:
Smuestra = kA CA + kI CI
Donde kI y CI, son la sensibilidad y la 
concentración del interferente, respectivamente.
• Si kA es mayor que kI, el método es más 
selectivo para el analito.
• Aun el método sea más selectivo para el analito, 
podría no poder usarse para determinar la 
concentración del analito si la contribución del 
interferente a la señal (Smuestra) es significativa.
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Introducción
• La separación del analito de las interferencias 
es esencial para lograr la determinación de la 
concentración.
• Esta separación se puede lograr con base a 
propiedades físicas y químicas.
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Principio de separación Técnica de separación
Tamaño Filtración
Diálisis
Cromatografía de exclusión por tamaño (size-
exclusión chromatography)
Masa y densidad Centrifugación
Cambios en el estado físico Destilación
Sublimación
Recristalización
Cambios en el estado 
químico
Precipitación
Intercambio iónico
Electrodeposición
Volatilización
Partición entre fases Extracción
Cromatografía
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Técnicas de separación
Tabla 1. Clasificación de las técnicas de separación
Diálisis
• Es una técnica de laboratorio ampliamente 
usada para remover contaminantes de una 
solución.
• Es una técnica que es comunmente usada para 
remover moléculas pequeñas no deseadas 
como sales, agentes reductores, preservantes, 
etc.
• El Buffer usado para la diálisis se llama 
dialisato.
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Diálisis
• La diálisis funciona por el principio de difusión.
• La difusión es la migración de moléculas desde 
regiones de alta concentración a regiones de 
baja concentración hasta que se alcanza el 
equilibrio
• En la diálisis, la migración de moléculas ocurre 
a través de una membrana semipermeable, la 
cual solo permite el paso de moléculas 
pequeñas.
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Diálisis
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Figura 1. Ilustración de la diálisis. La muestra, que puede ser 
una solución, se coloca en el tubo de diálisis, y se sumerge en 
el solvente (a). Las partículas pequeñas pasan a través de la 
membrana y las partículas grandes se quedan dentro del tubo 
de díalisis (b).
Diálisis
• Si la concentración de una especie en particular 
no es la misma en dos lados de una membrana, 
el gradiente de concentración induce la difusión 
a través de la membrana.
• A pesar de que las partículas pequeñas puedan 
pasar con facilidad, no pasa lo mismo con las 
partículas grandes.
• La diálisis se usa para purificación de proteínas, 
hormonas y enzimas, entre otros.
• DATO: La hemodiálisis remueve úrea, ácido 
úrico, creatinina de la sangre.
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Diálisis
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https://www.youtube.com/watch?v=tHzkRtzVmUM
DIFUSIÓN, ÓSMOSIS Y DIÁLISIS
https://www.youtube.com/watch?v=tHzkRtzVmUM
Destilación
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Figura 2. Esquema de montaje de un equipo típico para 
destilación simple
"Un solo equilibrio líquido-vapor"
Destilación
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Figura 3. Esquema de 
montaje de un equipo típico 
para destilación 
fraccionada
“Varios equilibrios 
líquido-vapor"
Separaciones basadas en la 
partición entre fases
• Probablemente una de las clases de técnicas de 
separación más importantes está basada en la 
partición selectiva de un analito o un interferente 
entre dos fases inmiscibles.
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Constante de Distribución
o
Coeficiente de Partición
• También debe considerarse la extracción en 
fase sólida, “Solid-Phase Extractions”
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Separaciones basadas en la 
partición entre fases
Extracción
Líquido-líquido (embudo
de separación)
Sólido-Líquido (Soxhlet)
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Separaciones basadas en la 
partición entre fases
https://www.youtube.com/watch?v=8bZl7mcG0Ew
Extracción Líquido-Líquido
https://www.youtube.com/watch?v=8bZl7mcG0Ew
• ¿Qué es mejor, una 
extracción con 60 mL de 
solvente, o tres 
extracciones con tres 
porciones de solvente de 
20 mL cada una?
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Separaciones basadas en la 
partición entre fases
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Separaciones basadas en la 
partición entre fases
https://www.youtube.com/watch?v=fQ8pJ_DPgyo
Extracción Sólido-Líquido
https://www.youtube.com/watch?v=fQ8pJ_DPgyo
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Separaciones basadas en la 
partición entre fases
Extracción Sólido-Líquido
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Separaciones basadas en la 
partición entre fases
https://www.youtube.com/watch?v=kB3l8TCOY14
Solid-Phase Extractions
https://www.youtube.com/watch?v=kB3l8TCOY14
• Microextracción en fase sólida (solid phase
microextraction, SPME)
• Microextracción en fase líquida (liquid-phase
microextraction, LPME)
• Extracción asistida por microondas (microwave-
assisted extraction, MAE)
• Extracción asistida por ultrasonido (ultrasound-
assisted extraction, UAE)
• Extracción acelerada con solvente (accelerated
solvent extraction, ASE)
• Extracción con fluido supercrítico (supercritical
fluid extraction, SFE) 
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Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
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Microextracción en fase sólida (SPME)
Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
https://www.youtube.com/watch?v=Gno-S8FBpXM
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Microextracción en fase líquida (LPME)
Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
Diagrama de un sistema de 
microextracción en fase líquida -
espacio de cabeza (HS-LPME) 
(Bicchi et al., 2012)*
* https://www.sciencedirect.com/topics/chemistry/liquid-phase-microextraction
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Extracción asistida por microondas (MAE)
Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
https://www.youtube.com/watch?v=dzURn8rCOTQ
https://www.youtube.com/watch?v=dzURn8rCOTQ
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Extracción asistida por ultrasonido (UAE)
Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
https://www.youtube.com/watch?v=kfHNSjVG6tc
https://www.youtube.com/watch?v=kfHNSjVG6tc
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Extracción acelerada con solvente (ASE)
Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
https://www.youtube.com/watch?v=n6r8HCmxBsk
https://www.youtube.com/watch?v=n6r8HCmxBsk
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Extracción con fluido supercrítico (SFE)
Otros procedimientos basados 
en la partición de fases
https://www.youtube.com/watch?v=AipBc6yBOF4
https://www.youtube.com/watch?v=AipBc6yBOF4