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PRACTICA MICROBIOLOGIA 1. Diferencias entre flora normal, residente y transitoria. La Flora normal o microbiota se define como el conjunto de microorganismos que frecuentemente se encuentran colonizando piel y mucosas, en individuos sanos. Flora Residente Flora Transitoria Compuesta por microorganismos relativamente fijos. Compuesta por microorganismos que no se establecen permanentemente, sino solo por horas, días o semanas. No son Patógenas. Si la flora residente es perturbada, estos microorganismos transitorios proliferan y pueden producir enfermedad, ejemplo: cambio de flora en el paciente hospitalizado. Se multiplican en capas profundas están ubicados en las capas superficiales, por ellos puede ser removidos con el lavado de manos por arrastre mecánico 2. Recomendaciones para poder tomar una buena muestra. a. Escoger la muestra más representativa, es decir, la cantidad suficiente para poder realizar todos los exámenes requeridos. A mayor cantidad de muestra, mayor probabilidad de aislar el agente causal. b. La toma de la muestra debe realizarse antes de la administración de drogas antimicrobianas y en el momento oportuno. c. Aplicar las técnicas de asepsia y antisepsia que deben implementarse durante la toma de la muestra a fin de evitar su contaminación con bacterias de la flora normal o del medio ambiente. d. Determinar la cantidad de muestra ideal a tomar para una cantidad de medio de cultivo específico. e. La muestra debe ser enviada al laboratorio de inmediato en medios de transporte o en envases estériles adecuados. f. El personal que toma la muestra debe proveer la información completa o llenar la solicitud de estudio donde se incluyan datos referentes tanto al paciente como a la muestra, como: nombre, edad, sexo, tipo de muestra, examen requerido, diagnóstico presuntivo y, tratamiento antimicrobiano (si lo recibe). 3. Consideraciones para tomar y transportar una muestra de anaerobios. La técnica más adecuada para la toma de la muestra es la aspiración mediante aguja y jeringa. Evitar, en lo posible, la contaminación con las bacterias de la flora normal, así como la excesiva exposición de la muestra al oxígeno atmosférico. Este tipo de técnica es recomendable para muestras de: líquidos corporales, abscesos cerrados, exudados broncopulmonares y aspiración supra-púbica para muestras de orina. Si la cantidad de muestra es muy escasa, es recomendable aspirar previamente 1ml de caldo prerreducido (Caldo tioglicolato) antes de tomar la muestra. Siempre se debe evitar tomar muestras para cultivo de anaerobios con hisopos, ya que en estos existe un rápido secado de la muestra y la subsiguiente pérdida de la viabilidad de las bacterias. Las muestras para cultivo de anaerobios deben transportarse rápidamente al laboratorio, desde el punto de vista práctico se recomienda transportar la muestra en la jeringa en la que ha sido obtenida, con la aguja doblada y que la inyectadora no contenga aire. Si el tiempo que demora su envío al laboratorio es mayor de 30 minutos, la muestra preferiblemente debe depositarse en un tubo con caldo tioglicolato pre-reducido, o caldo carne prerreducido o en el medio de transporte Cary-Blair prerreducido; este último medio de transporte es el más recomendable cuando se toma la muestra con hisopo. 4. Medios de cultivo. MEDIOS ESPECIALES Medias enriquecidos o mejorados. Son medios comunes líquidos o sólidos, en los cuales se aumentan las propiedades nutritivas agregando sustancias albuminoideas, carbohidratos o vitaminas. Entre los medios líquidos están: Caldo glucosado, Caldo glicerinado, Caldo sangre, Caldo suero, Caldo líquido ascítico; y entre los sólidos: Agar sangre, Agar chocolate, Agar GC Hemoglobina, Agar suero, Agar líquido ascítico. Medios selectivos. Son medios que contienen sustancias que inhiben o retardan el crecimiento de la flora bacteriana asociada, grampositiva o gramnegativa, dependiendo de la sustancia inhibidora incorporada al medio de cultivo. Ejemplo: medio de Chapman para estafilococos, medio de MacConkey para enterobacterias, medio de Bilis- Agar, para cándidas y la mayoría de estos medios, además de ser selectivos son diferenciadores. Medias de Enriquecimiento. No deben confundirse con los medios enriquecidos. Son siempre medios líquidos y se utilizan cuando la especie bacteriana que interesa aislar crece más lentamente, con más dificultad o cuando se encuentra en condiciones de marcada inferioridad numérica respecto a la flora bacteriana asociada, inhibiendo el desarrollo de microorganismos no deseados (fase de retardo prolongada). El caldo tetrationato para las salmonellas, el agua peptonada alcalina para el vibrión colérico. Medios diferenciadores. Los medios de conservación se utilizan para mantener viables los microorganismos o cepas de colección, aun cuando la liofilización continua siendo el mejor método para la conservación de cepas. Ejemplo: el medio de Sabouraud- conservación para hongos y el medio Agar cisteína tripticasa (CTA) para bacterias MEDIOS PARA BACTERIAS ANAERÓBICAS Medios no selectivos. agar sangre de conejo 5% suplementado con extracto de levadura, hemina, vitamina B1, L- cisteína. En este medio crecen bien B. melaninogenicus, F. necrophorum, C. haemolyticum, Bacteroides sp Medios selectivos. debido a que las muestras provenientes de abscesos y de heridas infectadas contienen frecuentemente mezclas de anaerobios obligados, facultativos y aerobios, se recomienda el uso de medios selectivos. Ejemplo: medio feniletil alcohol, donde crecen bacterias anaerobias gramnegativas y grampositivas, pero que inhibe el crecimiento de organismos anaerobios facultativos gramnegativos, (incluyendo Proteus sp); medio de huevo - neomicina, el cual permite el aislamiento de especies de clostridios.
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