Quais são as etapas para a obtenção dos cortes histológicos??

FIXAÇÃO: Utiliza-se formol a 10%. Esta substância tem como característica evitar o processo de autólise da célula, impedir a destruição do tecido por procariontes, endurecer o material para melhor tratamento posterior e aumentar a capacidade de coloração do material. O tempo de fixação pode variar entre 12 e 24 horas, dependendo do material a ser processado e a sua finalidade posterior.

2- DESIDRATAÇÃO – O material é mergulhado em frascos contendo álcool de concentrações crescentes de álcool a 85%; 95%. Absoluto I, Absoluto II, Absoluto III. O álcool absoluto correponde a 99% de pureza.

3- DIAFANIZAÇÃO OU CLAREAMENTO – Utiliza-se Xilol para permitir melhor a penetração de parafina na peça, num total de 3 banhos de xilol.

4- INCLUSÃO: O material em recipientes contendo parafina líquida a 60º C e colocado em estufa na mesma temepratura, num total de 3 banhos de parafina, cada um com duração de 30 minutos cada. Em seguida, faz-se a inclusão propriamente dita, derramando-se numa forma plástica a parafina com o material.

5- MICROTOMIA: Os blocos de parafina são cortados para a obtenção de cortes da material, utilizando-se para isso o aparelho denominado micrótomo. Os cortes tem a espessura de 5 a 6 micrômetros.

6- “BANHO-MARIA”: Os cortes são distendidos em água aquecida a 56º C em aparelho aquecedor com termostato para evitar microdobras no material.

7- PESCAGEM: Consiste em mergulhar a lâmina na água e coletar o material esticado sobre a lâmina. Em seguida a lâmina é colocada sobre uma platina aquecedora para que seja feita a secagem, a fusão da parafina impregnada no tecido e evitar o aparecimento de microdobras.

8- COLORAÇÃO: Processa-se através dos seguintes passos:

8.1 – Desparafinar em xilol durante 10 min.

8.2 – Hidratar em álcool.

8.2.1 – Imersão em álcool absoluto.

8.2.2 – Imersão em álcool absoluto.

8.2.3 – Imersão em álcool 95%.

8.2.4 – Imersão em álcool 95%.

8.3 – Lavar a lâmina em água corrente durante 3 min. mais ou menos.

8.4 – Corar pela hematoxilina (corante básico) durante 5 min.

8.5 – Lavar a lâmina em água corrente durante 5 min. mais ou menos.

8.6 – Corar, pela eosina (corante ácido) durante 30 segundos.

8.7 – Desidratar o corte em álcool

8.7.1 – Imersão em álcool 95%

8.7.2 – Imersão em álcool 95%

8.7.3 – Imersão em álcool absoluto

8.7.4 – Imersão em álcool absoluto

8.8 – Diafanização ou clareamento.

8.8.1 – Imersão em xilol

8.8.2 – Imersão em xilol

8.8.3 – Imersão em xilol

9 – MONTAGEM: Coloca-se uma gota de resina sintética (Entelan®) sobre o corte ou sobre uma lamínula. Esta é então, colocada e comprimida sobre o corte, de modo a espalhar-se a resina em fina camada entre a lâmina e lamínula.

10 – SECAGEM: Tem a finalidade de secar a resina fixando a lâmina sobre a lamínula. Esta etapa pode ser feita em estufa a 37º C ou deixada em temperatura ambiente.