Cobrir o esfregaço com a solução Cristal Violeta - 1minuto
Escorrer o cristal violeta,lavar com água .
Cobrir com Lugol- 1m
Escorrer o Lugol ,lavar com fio de àgua .
Descorar com alcool ( +- 20s)
Fucsina (30s)
Lavar
secar com papel filtro com cuidado
secar na chama do Bico de busen
Colocar gota de òleo
Observar:
Cor cristal violeta (+) =BACTRÉRIA GRAM ( +)
Roseo (-) =BACTÉRIA GRAM (-)
A coloração de Gram é utilizada para diferenciar bactérias gram-positivas de gram-negativas.
As bactérias são fixadas (pelo calor ou de outra forma) na superfície de uma lâmina, sendo coradas pelo cristal violeta, um corante que é precipitado pelo lugol e, posteriormente, o corante em excesso e não ligado é removido pelo descorante, contendo acetona, e pela água. Um contracorante, safranina, é adicionado, corando todas as células descoradas. Este processo demora menos de 10 minutos. O cristal violeta é precipitado pelo lugol e é retido na espessa camada de peptideoglicao nas gram-positivas. O descorante dispersa a membrana externa das gram-negativas e retira o cristal violeta através da fina camada de peptideoglicano. As gram-positivas ficam com a cor púrpura do cristal violeta e as gram-negativas ficam com um tom rosado do contracorante.
Portanto, concluímos que as etapas da coloração de Gram são: fixação das bactérias, coloração com cristal violeta, precipitação com lugol, remoção do excesso pelo descorante (acetona) e pela água e, por último, coloração com contracorante (safranina).
MURRAY, Patrick R.; ROSENTHAL, K. S.; PFALLER, Michael A. Microbiologia médica (7ª). Elsevier, 2009.
A coloração de Gram é utilizada para diferenciar bactérias gram-positivas de gram-negativas.
As bactérias são fixadas (pelo calor ou de outra forma) na superfície de uma lâmina, sendo coradas pelo cristal violeta, um corante que é precipitado pelo lugol e, posteriormente, o corante em excesso e não ligado é removido pelo descorante, contendo acetona, e pela água. Um contracorante, safranina, é adicionado, corando todas as células descoradas. Este processo demora menos de 10 minutos. O cristal violeta é precipitado pelo lugol e é retido na espessa camada de peptideoglicao nas gram-positivas. O descorante dispersa a membrana externa das gram-negativas e retira o cristal violeta através da fina camada de peptideoglicano. As gram-positivas ficam com a cor púrpura do cristal violeta e as gram-negativas ficam com um tom rosado do contracorante.
Portanto, concluímos que as etapas da coloração de Gram são: fixação das bactérias, coloração com cristal violeta, precipitação com lugol, remoção do excesso pelo descorante (acetona) e pela água e, por último, coloração com contracorante (safranina).
MURRAY, Patrick R.; ROSENTHAL, K. S.; PFALLER, Michael A. Microbiologia médica (7ª). Elsevier, 2009.
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