Qual o objetivo do teste para citocromo-oxidase?

A principal função desse teste é diferenciar as enterobactérias das Pseudomonas spp. Também é utilizado para ajudar na diferenciação entre os gêneros Moraxella e Neisseria. Esse teste é muito utilizado nas enzimas oxidase do citocromo que é uma enzima muito importante presente nas células. Essa enzima é do complexo 4 e ela é a responsável pelo transporte de elétrons dentro da célula.  Ela está presente em células de organismos aeróbicos, ou seja, organismos que não são capazes de realizar a respiração e ela está diretamente ligada ao oxigênio, pois durante o contato com o oxigênio, o citocromo realiza a oxidação da enzima, fazendo com que a mesma consiga gerar o transporte dos elétrons dentro da célula. Essa enzima foi descrita em 1985 pelo cientista e biólogo Sies em um de seus artigos de pesquisa.

O teste de oxidase é baseado na produção de uma enzima oxidase intracelular pela bactéria. As bactérias que possuem atividade de citocromo-oxidase (oxidase positiva) provocam uma oxidação rápida do reativo, que quando reduzido é incolor e desenvolve coloração púrpura intenso quando oxidado. Esta prova é muito útil para diferenciar as enterobactérias (oxidase-negativas) das Pseudomonas spp. (oxidase-positivas). É utilizada também para ajudar na diferenciação entre os gêneros Moraxella e Neisseria (oxidase-positivos) de Acinetobacter (oxidadenegativo), e entre Aeromonas, Plesiomonas e Vibrio (oxidase-positivos) de Enterobacteriaceae.

MATERIAS NECESSÁRIOS E NÃO FORNECIDOS COM O PRODUTO
Bico de Bunsen e alça bacteriológica de platina.

AMOSTRA
Colônias de bacilos ou cocobacilos gram-negativos isoladas em placas de meios de cultivo primários seletivos ou de crescimento geral.

CUIDADOS COM MANUSEIO DA AMOSTRA
Por tratar-se de material biológico, manusear a amostra clínica de acordo com as normas de biossegurança e utilizar equipamentos de proteção individual (luvas, avental e máscara) de preferência em cabine de segurança biológica classe II.

TÉCNICA DE USO
Umedecer a tira com uma gota de água destilada estéril. Utilizando alça de platina ou descartável (mas não de níquel-cromo) transferir uma porção da colônia a ser testada para a tira pré-umedecida. Friccionar a colônia na tira e observar o desenvolvimento de cor dentro de alguns segundos.
OBS.: O teste de oxidase não deverá ser realizado em colônias isoladas em meios contendo glicose: a fermentação inibe a atividade da oxidase, o que resultará em reações falso-negativas.

LEITURA E INTERPRETAÇÃO
O aparecimento de uma cor púrpura intensa indica positividade da prova. As cepas de Pseudomonas spp. (especialmente P. aeruginosa) geralmente oxidam a tira em menos de 20 segundos. Entretanto outras espécies de bacilos gram-negativos nãofermentadores podem apresentar reações tardias e/ou fracas. Cepas de BGN oxidase-positivas provavelmente são não-fermentadores e devem ser identificadas por um sistema de provas bioquímicas adequado para este grupo (p.ex.: Mini-kit ÑF-Prov). As cepas oxidase-negativas são provavelmente enterobactérias, devendo ser identificadas por provas bioquímicas específicas (Kit para identificação de Enterobactérias). Eventualmente os isolados oxidasenegativa podem ser não-fermentadores, como as cepas de Acinetobacter ou Stenotrophomonas maltophilia, por exemplo. Nestes casos é necessário verificar as características da amostra e das colônias isoladas e a fermentação ou não da glicose para prosseguir a identificação.

Fonte:
Newprov Produtos para Laboratório, 2010.