As bactérias devem estar presentes em todos os casos da doença.
As bactérias devem ser isoladas do hospedeiro com a doença e cultivadas em cultura pura.
A doença específica deve ser reproduzida quando uma cultura pura da bactéria é inoculada num hospedeiro suscetível saudável.
As bactérias devem ser recuperáveis a partir do hospedeiro infectado experimentalmente
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