Encontro 6 Antibiograma

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Microbiologia e Imunologia
Aplicadas a 
Medicina Veterinária
Prof. Me Dr Tiago Ladeiro de Almeida
Encontros 7: Antibiograma
Prof. Me Dr Tiago Ladeiro de Almeida
Informações 
qualitativas quanto 
à susceptibilidade 
ao fármaco
Antibiograma
Testes de suceptibilidade antimicrobiana in vitro
Método de Difusão
Informações 
quantitativas 
quanto à 
susceptibilidade ao 
fármaco
Método de Diluição
Antibiograma
Testes de suceptibilidade antimicrobiana in vitro
Depende do sucesso clínico ou da 
ineficácia de um tratamento
Bactéria 
Susceptível?
Bactéria 
Resistente?
Antibiótico
Antibiograma
Método de Diluição
Obtida em laboratório não levando em consideração as defesas do
hospedeiro, a dinâmica da distribuição do fármaco ou a dinâmica da variação
da concentração do medicamento com uma bactéria em um hospedeiro.
Informação Quantitativa
Antibiograma
Método de Diluição
• Antimicrobianos de potência conhecida;
• Preparados em soluções pareadas;
• Concentrações semelhantes às alcançadas nos hospedeiros;
• Diluição mais elevada onde não acontece crescimento bacteriano após
inoculação e incubação: Concentração Inibitória Mínima (CIM);
• Geralmente menor que a Concentração Bactericida Mínima (CBM) para o
fármaco.
Antibiograma
Método de Diluição
Micro-organismos
CIM (µg/mL)
CIM50 CIM90
Bordetella bronchiseptica 2 2
Brucella canis 0,25 0,25
Corynebacterium pseudotuberculosis 0,25 0,25
Escherichia coli 4,0 64,0
Klebsiela pneumoniae 2,0 64,0
Mycoplasma canis 4,0 8,0
Pasteurella multocisa 0,5 0,5
Antibiograma
Método de Diluição
• Utilização: informação pode ser relacionada com o conhecimento das
concentrações do fármaco em tecidos específicos;
• Estimar a dosagem apropriada dos medicamentos;
• Valores de CIM são interpretados seguindo o sistema de classificação
sugerido pelo CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute) nos EUA:
1. Susceptíveis: micro-organismo é inibido pela concentração de
antibiótico verificada no tecido quando administrada a dose usual;
2. Susceptibilidade Intermediária: inibido pela concentração do fármaco
no sangue ou tecido quando se usa dose máxima;
3. Resistentes: resistentes à concentração tolerada do fármaco.
Antibiograma
Método de Difusão
Concentração padrão de uma cultura pura de micro-organismos é colocada
em ágar apropriado e sobre ela são depositados discos de papel-filtro
individuais contendo concentrações conhecidas dos antibióticos testados, o
qual é incubado por 18h em temperatura de 36oC.
Informação Qualitativa
Antibiograma
Método de Difusão
• Zona de Inibição: Halo ao redor de cada disco é mensurado;
• Resultado corresponde a um gráfico que classifica o micro-organismo
como sendo susceptível, susceptível intermediário ou resistente a
determinado antibiótico presente em cada disco;
• Padrões para estes testes são definidos comercialmente;
• Método de Difusão modificado: Etest®: sistema de fitas submetidas a um
gradiente de concentração, o qual fornece resultados quantitativos.
Antibiograma
Realizando um antibiograma de difusão
1 pipetador com volume fixo de 100µL;
Ponteiras esterilizadas;
1 Alça de Drigalski esterilizada;
Placas de Petri com ágar Mueller Hinton;
Discos de Difusão de Antibióticos;
Cultura bacteriana em caldo nutriente.
Material Necessário
Antibiograma
Realizando um antibiograma de difusão
Semear, por espalhamento com alça de Drigalski ou com uma zaragatoa
esterilizada, uma alíquota de 100 µl da cultura bacteriana em uma placa de
Petri contendo meio Ágar de Mueller Hinton;
Em seguida, depositar discos de papel filtro impregnados, separadamente,
com quantidades determinadas de um antibiótico específico sobre a
superfície do meio em disposição ordenada;
Incubar a placa, invertida, a 36oC por cerca de 18-24 horas.
Procedimento
Antibiograma
Realizando um antibiograma de difusão
A formação de um halo transparente
sobre a superfície do meio, ao redor
de um disco de antibiótico, indica
uma região com ausência de
crescimento bacteriano;
Revela a ação inibitória do agente
antimicrobiano sobre a bactéria
ensaiada.
Resultados
Antibiograma
Realizando um antibiograma de difusão
Antibiograma
Antibiograma
Realizando um antibiograma de difusão
Dúvidas?
Antibiograma