RELATÓRIO Bioq 2

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RELATÓRIO – Aula prática de Fermentação
Bioquímica II
Aluna: Lara Silva Fonseca.	Matrícula: 17114020268.
Pólo: DCA.
INTRODUÇÃO
 	A fermentação consiste em um conjunto de reações enzimáticas onde uma molécula glicose passa por sucessivas oxidações para liberar energia, glicólise. Essa liberação de energia ocorre na ausência de oxigênio, ou seja, é um processo de respiração celular anaeróbico. Porém, seu rendimento de moléculas de energia (ATP), é pequeno quando comparado com a respiração aeróbica, ou seja, com a presença de oxigênio.
Há duas formas de fermentação: Alcoólica e Lática. A diferença é dada pelas enzimas existentes em e pelo produto final do processo para cada organismo que realiza esse tipo de respiração. A fermentação alcóolica a enzima catalizadora é a álcool desidrogenase, onde ao final, há a formação de etanol. Já para a fermentação láctica, a enzima é a lactato desidrogenase que ao final forma o ácido láctico.
OBJETIVO 
O objetivo da aula prática foi monitorar a fermentação alcoólica através do aparecimento de um dos seus produtos (CO2) e do consumo do substrato (sacarose), utilizando leveduras como organismo fermentador.
 
REAGENTES, MATERIAIS e EQUIPAMENTO 
Levedura Saccharomyces cerevisae (fermento biológico de pão)
Sacarose
Água destilada
Solução de Seliwanoff
Solução Sacarose 10% (estoque) e 1%
2 tubos Falcon 
Pipetas de 1, 5 e 10 mL
Becker de 500mL
Becker de 250mL
Balança
Tubos de ensaio
Banho-maria
Estufa
Colorímetro
PROCEDIMENTO E RESULTADOS 
A prática foi iniciada com o preparo da solução de levedura, onde foi colocado 3g de levedura em um Becker com 60mL de água destilada e dissolvida.
Em seguida, foi feita a solução estoque de sacarose, onde foi diluído 10g de sacarose em 100mL de água destilada, assim com uma concentração final de 10%. Assim, para diluir a 1%, utilizamos 30mL da solução estoque (10%) diluídos em 270mL de água destilada, resultando em uma solução final com 300mL. Para mais uma diluição (0,1%), diluímos 10mL da solução de 1% em 90mL de água destilada.
	Para dar início ao processo de fermentação, foi preparado dois tubos Falcons de 50mL cada, mas uma das tampas foi furada. Foi pipetado 5mL da solução estoque (10% SAC) em cada tudo, mais 10mL da solução de levedura e o volume foi completado com água. Foi retirado uma alíquota de 2mL do tubo Falcon que não possuía furo, que em seguida, foi colocado no banho-maria a 100ºC por 10 min, para aniquilar as leveduras e ser a amostra zero. Simultaneamente, foi colocado os dois tubos Falcons num Backer, sendo o tubo furado orientado para baixo, com solução 1% SAC no banho-maria a 40ºC. Uma caneta foi utilizada para marcar a medida da bolha de ar nesse tudo.
	Dessa forma, o tempo foi marcado. No tempo zero e a cada 30 min, foi retirado 2mL do tubo sem furo e marcado com caneta a nova orientação da quantidade, e no tudo furado, apenas foi feita uma nova marcação.
	Cada alíquota retirada foi aquecia a 100ºC por 10 min no banho-maria. Após, foi retirado0,5mL do sobrenadante de cada um dos tubos e adicionado 4,5mL de água destilada. Dessa diluição foi retirada 0,5mL e adicionado 2,0mL da solução de Seliwanoff para cada tudo, sendo assim nossas mostras.
	O preparo da curva de calibração foi realizado com 11 tubos de ensaio enumerados de 1 a 11, contendo as seguintes medidas:
	Tubo
	Solução de sacarose 0,1% (mL)
	Água (mL)
	1
	0
	1,0
	2
	0,1
	0,9
	3
	0,2
	0,8
	4
	0,3
	0,7
	5
	0,4
	0,6
	6
	0,5
	0,5
	7
	0,6
	0,4
	8
	0,7
	0,3
	9
	0,8
	0,2
	10
	0,9
	0,1
	11
	1,0
	0
	
Foi preparado mais um conjunto de 11 tubos de ensaios, porém esses enumerados de 1’ até 11’. Retiramos uma alíquota de 0,5mL dos tubos 1-11e colocamos em seus respectivos 1’-11’. Em seguida os tubos (1’-11’) foram completados com 2,0mL da solução de Seliwanoff. Posteriormente esses tubos foram fervidos por 10 min e depois, lidos no espectrofotômetro.
Segue os dados obtidos:
	Número do tubo
	Abs
	Concentração
	1
	0
	0
	2
	0,074
	0,01
	3
	0,182
	0,02
	4
	0,155
	0,03
	5
	0,194
	0,04
	6
	0,320
	0,05
	7
	0,330
	0,06
	8
	0,374
	0,07
	9
	0,437
	0,08
	10
	0,479
	0,09
	11
	0,510
	0,1
	Após a retirada da última alíquota, os tubos da curva de calibração foram colocados juntos com as amostras no banho-maria por 100ºC por 10 min. Apresentando posteriormente uma cor acastanhada e lidas no espectrofotômetro a 520nm.
Todos os tubos foram lidos pelo espectrofotômetro. A curva de calibração obteve os seguintes resultados:
	Curva de calibração
	x
	y
	Concentração
	Absorbância
	0
	0
	0,01
	0,077
	0,02
	0,128
	0,03
	0,161
	0,04
	0,227
	0,05
	0,277
	0,06
	0,296
	0,07
	0,311
	0,08
	0,357
	0,09
	0,425
	0,1
	0,447
	Os dados foram colocados em um gráfico (Curva de Calibração) para melhor visualização dos resultados obtidos:
	A curva de calibração obteve um aumento gradativo, porém não seguiu por completo o linear esperado. Podendo assim, trazer alguns erros de medida ou de leitura.
	Com a equação da reta resultante da curva de calibração, foi realizado os cálculos para avaliar o consumo de sacarose da levedura, em relação ao tempo, com os seguintes resultados:
	Tempo (min)
	Sacarose (%)
	Sacarose (concentração)
	ABS
	0
	8,90
	0,089
	0,412
	30
	9,58
	0,096
	0,441
	60
	8,06
	0,081
	0,376
	90
	7,99
	0,080
	0,373
	120
	7,02
	0,070
	0,332
	150
	6,69
	0,067
	0,318
	
	O gráfico Sacarose (%) x Tempo (min) foi montado com os resultados da tabela anterior.
	Esse resultado mostra que a levedura utilizada consumiu pouca sacarose ao decorrer do tempo.
E ao final, calcular o volume de produção de CO2 em relação ao tempo, com as seguintes tabelas (1 e 2):
1)
	Amostras
	Tempo (min)
	Abs
	Concentração (%)
	Volume de CO2 (mL)
	1
	T0
	0
	0
	0
	2
	T30
	0,074
	0,05
	0,5
	3
	T60
	0,182
	0,05
	0,5
	4
	T90
	0,155
	0,1
	1
	5
	T120
	0,194
	0,2
	2
	6
	T150
	0,320
	0,3
	3
	2)
	Tempo (min)
	Volume (mL)
	0
	0
	30
	0,5
	60
	0,5
	90
	1
	120
	2
	150
	3
	
Formando o seguinte gráfico:
	Podemos observar que há um aumento gradativo na concentração de CO2 encontrada nos tubos.
CONCLUSÃO
De acordo com os resultados obtidos nesse trabalho, podemos dizer que essa levedura se comportou de forma “eficiente’, já há pouco consumo de sacarose e aumento na produção de gás carbônico.
REFERÊNCIAS
Apostila CEDERJ – Bioquímica II
Sites:
<https://www.sobiologia.com.br/conteudos/bioquimica/bioquimica3.php>;
<https://www.todamateria.com.br/fermentacao/>.
Curva de Calibração
y	Absorbância	0	0.01	0.02	0.03	0.04	0.05	0.06	7.0000000000000007E-2	0.08	0.09	0.1	0	7.6999999999999999E-2	0.128	0.161	0.22700000000000001	0.27700000000000002	0.29599999999999999	0.311	0.35699999999999998	0.42499999999999999	0.44700000000000001	Sacarose (%) x tempo(min) 
Sacarose (%)	0	30	60	90	120	150	8.902983321587973	9.5842142353770274	8.0573173596429406	7.9868451961475211	7.0237256283767922	6.6948555320648362	Volume de CO2(mL) x tempo (min)
Volume (mL)	0	30	60	90	120	150	0	0.5	0.5	1	2	3