Atlas Medios de Cultivo microbiología

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Gómez-Gamboa L. Cátedra de Microbiología. Escuela de Medicina. Universidad del Zulia. 
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MEDIOS DE CULTIVO. CLASIFICACIÓN. 
 
Medios nutritivos o usuales: son aquellos que contienen las sustancias nutritivas mínimas para el crecimiento 
de las bacterias metabólicamente no exigentes (1). 
Medios enriquecidos: son medios usuales a los que se añade suero, sangre o factores esenciales específicos, 
como vitaminas o cofactores, y permiten el crecimiento de las bacterias exigentes en requerimientos nutritivos, 
como los estreptococos, el neumococo, el gonococo, Haemophilus y otras que no crecen bien en los medios 
usuales. Además en los medios con sangre puede observarse si alrededor de la colonia se ha producido un halo 
de hemólisis por acción de las hemolisinas liberadas por las bacterias. Las colonias pueden producir una 
hemólisis total, de modo que el agar se vuelve transparente alrededor de la colonia (hemólisis β), o una 
hemólisis parcial, formándose un halo verdoso alrededor de la colonia (hemólisis α). Todas estas características 
(tamaño, forma, hemólisis) permiten detectar la presencia de diversos tipos de colonias y orientar sobre el 
microorganismo que las forma (1). 
Medios selectivos: son medios que permiten el crecimiento de una bacteria que está en escasa cantidad, 
inhibiendo al resto de las existentes en la muestra; mediante la adición de sustancias como cloruro sódico a 
concentración elevada, el citrato sódico, el cristal violeta, las sales biliares, así como diversos antibióticos y 
antisépticos. Cada producto inhibe a un grupo de bacterias sin afectar a otras. Existen medios selectivos para 
aislar estafilococos, estreptococos, enterococos, listeria, meningococo y gonococo, salmonelas, shigelas, 
yersinia, campilobacter, vibrio, legionela y nocardia entre otras bacterias, cada uno con su composición 
particular (1). 
Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que cumplen la misma función de los selectivos, es decir, 
permiten la multiplicación de una bacteria patógena e inhiben el crecimiento de otras bacterias flora normal. 
Medios selectivo-diferenciales: son medios que contienen sustancias que confieren un color diferente a las 
colonias según la distinta actividad metabólica de las bacterias que las forman. Para este propósito se utilizan 
azúcares como el manitol, la lactosa, el sorbitol y otros, junto con un indicador de pH (rojo neutro, azul de 
bromotimol, etc) (1). 
 
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Nombre del 
medio de cultivo 
Tipo Composición y función Imagen 
Agar nutritivo Nutritivo Se preparan con una infusión o extracto de carne, agar, pequeña cantidad de peptona, 
extracto de levadura y glucosa. También se puede añadir almidón o carbón, que fijan y 
neutralizan sustancias tóxicas para las bacterias y deben poseer un pH y una osmolaridad 
adecuados para la multiplicación de las bacterias. Se emplean para el cultivo de bacterias 
no exigentes, pero también son utilizados como base para la preparación de otros medios 
(enriquecidos, selectivos, etc) (1) 
Agar sangre Enriquecido Medio nutritivo o usual enriquecido con 5% sangre humana o de carnero, con una base 
de agar sin azúcares. Permite el crecimiento de bacterias exigentes en requerimientos 
nutritivos, como los estafilococos, los estreptococos (S. pyogenes, S. agalactiae, S. 
pneumoniae, S. Grupo Viridans), los enterococos y meningococo (Neisseria meningitidis). 
Permiten además observar la hemólisis. 
 
Streptococcus pyogenes 
 
Streptococcus pneumoniae 
 
Agar gelosa chocolate Enriquecido Medio nutritivo o usual enriquecido con hemoglobina y vitamina NAD, que permite el 
crecimiento de bacterias exigentes en requerimientos nutritivos, como Neisseria 
gonorrhoeae y Haemophilus influenzae. 
Haemophilus influenzae 
 
Staphylococcus aureus 
Enterococcus 
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Agar MaConkey Selectivo- 
diferencial 
Es un medio selectivo para bacilos Gram negativos no exigentes 
(enterobacterias, pseudomonas y otros) debido a la incorporación 
de sales biliares y cristal violeta. Contiene además lactosa y rojo 
neutro, por lo que permite diferenciar las colonias rosadas 
características de las bacterias que utilizan la lactosa (E. coli, 
Klebsiella, etc) de las que no la utilizan que son incoloras 
(Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus). 
 
Agar Levine o EMB 
(eosina methilen blue) 
Selectivo- 
diferencial 
Es un medio para bacterias Gram negativas no exigentes. Los colorantes contenidos en 
el medio inhiben el crecimiento de las bacterias gram positivas, excepto el enterococo. 
Con ello, se permite la diferenciación de las enterobacterias fermentadoras de la lactosa 
(color violeta intenso) de las no fermentadoras (grisáceas). E. coli aparece violeta, como 
lactosa positiva, pero con un brillo metálico característico. Permite el crecimiento de 
nocardia formando colonias típicas (1). 
 
Agar Salmonella Shigella Selectivo- 
diferencial 
Medio para el aislamiento de Salmonella y 
Shigella. Los elementos selectivos de las sales 
biliares, citrato sódico y férrico, tiosulfato y el 
colorante verde brillante. El carácter diferencial 
se basa en la fermentación de la lactosa, siendo el 
indicador utilizado el rojo neutro. Las colonias 
lactosa positivas son de color rosado mientras 
que las colonias lactosa negativas son 
transparentes. El tiosulfato sódico y el citrato 
férrico amónico permiten detectar las colonias 
productoras de H2S (centro negro) (1). 
Salmonella (colonias transparentes 
con el centro negro) 
Shigella (colonias transparentes) 
 
Agar Xilosa lisina 
desoxicolato 
Selectivo- 
diferencial 
Utilizado para el aislamiento de bacterias enteropatógenas de muestras de heces. 
Contiene azúcares y extracto de levadura como base nutritiva, desoxicolato sódico como 
agente selectivo y rojo de fenol como 
indicador. La presencia de tiosulfato 
sódico y de citrato férrico amónico 
permite la detección de colonias 
productoras de H2S. La presencia de 
xilosa y lisina ayuda a la 
diferenciación de las colonias de 
shigela y salmonela (1). 
Salmonella (colonias amarillas con 
centro negro). y Shigella (colonias 
rojas) 
 
Selenito Enriquecimiento Contiene selenito sódico tamponado que en ocasiones se suplementa con cisteína, 
diseñado para permitir el crecimiento de Salmonella y Shigella a partir de muestras de 
heces, e inhibir el crecimiento de la flora intestinal normal en las primeras 8 horas de 
incubación. El selenito presente en el medio inhibe el crecimiento de los coliformes y 
los enterococos en las 8-12 primeras horas de incubación, por el contrario las 
salmonelas y los proteus son poco inhibidos. Se resiembra en XLD y SSA (1). 
 
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Agua peptonada 
alcalina 
Enriquecimiento Es un caldo preparado con agua, peptona y una concentración de cloruro sódico de 7 a 
10 g/L que se ha ajustado el pH a 8,4, por lo que este medio permite el enriquecimiento 
de las especies de Vibrio a partir de muestras de heces, e inhibe el crecimiento de la 
flora intestinal normal durante 6 a 8 horas de incubación. Se resiembra en agar TCBS 
(1). 
 
Agar Triple azúcar hierro 
(TSI) 
Selectivo-
diferencial 
Se utiliza para determinar la habilidad de la bacteria de atacar un carbohidrato 
específico incorporado en un medio de crecimiento basal (glucosa 0,1%, lactosa 1% y 
sacarosa 1%), con o sin producción de gas y con la determinación de producción de H2S 
(pigmento negro) (2). 
Permite diferenciar a las bacterias en: 
1. fermentadoras de la glucosa solamente (ácido/alcalino o amarillo/rojo), 
2. aquellas que fermentan la glucosa + lactosa y/o sacarosa (ácido/ácido o 
amarillo/amarillo) y 
3. aquellas bacterias no fermentadoras de la glucosa (Pseudomonas, Acinetobacter, 
Burkholderia, Stenotrophomonas, Chryseobacterium,etc.) 
Sólo algunas Enterobacteriaceae producen H2S 
Aeromonas y Vibrio pertenecen a los grupos 1 y 2 y se diferencian de las 
enterobacterias porque son Oxidasa positiva. 
 
Agar Lisina hierro (LIA) Diferencial Se utiliza para medir la habilidad enzimática de una bacteria de descarboxilar el 
aminoácido lisina y formar un grupo amino que alcaliniza el medio +CO2. El indicador es 
púrpura de bromocresol, que en pH ácido (5,2) esamarillo y en pH alcalino (6,8) da un 
color morado. Si la bacteria deamina la lisina, produce un color rojo (pH 8,3) (2). Es útil 
en el coprocultivo para la diferenciación de las bacterias enteropatógenas (Salmonella, 
Shigella, Aeromonas, Plesiomonas shigelloides y Vibrio) que descarboxilan o no la lisina 
(color morado o amarillo), mientras que bacterias de la flora intestinal normal, como 
Proteus, Morganella y Providencia deaminan este aminoácido, produciendo un color rojo 
en el medio. 
 
Manitol salado agar Selectivo-
diferencial 
Contiene gran cantidad de cloruro sódico, que inhibe a la mayoría de las bacterias pero 
permite el crecimiento de los estafilococos (medio selectivo para estaphilococo), al que 
se le añade manitol y rojo de fenol como indicador. El medio, cuyo pH es neutro, posee 
un color rosa pálido y las bacterias que no utilizan el manitol, como la mayoría de las 
especies de estafilococo, forman colonias blancas, mientras que S.aureus metaboliza el 
manitol produciendo catabolitos ácidos y la colonia y el medio alrededor de ella 
adquieren color amarillo intenso, ya que a ese pH el indicador rojo de fenol cambia el 
color de rosa a amarillo. Este medio permite detectar S. aureus por sus colonias amarillas, 
diferenciándolo de la gran mayoría de estafilococos no patógenos que también crecen 
en el medio dando lugar a colonias rosadas o blancas (1). 
 
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Tiosulfato citrato sales 
biliares (TCBS) 
Selectivo-
diferencial 
Es un medio selectivo para las especies de Vibrio, 
debido a las altas concentraciones de tiosulfato 
sódico, citrato férrico y cloruro sódico que inhiben la 
mayoría de las enterobacterias. Por la presencia de 
sacarosa y el azul de timol y bromotimol como 
indicadores, permite diferenciar los microorganismos 
que fermentan este azúcar como V. cholerae (colonias 
amarillas), de otros que no lo fermentan, como V. 
parahaemolyticus (colonias verdes) y entre éstos, los 
productores de H2S (generalmente Proteus sp) (1). 
 
 
 
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ENSAYOS O PRUEBAS BIOQUÍMICAS PARA IDENTIFICACIÓN DE 
BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA 
 
Nombre del 
ensayo 
Tipo Fundamento Bacterias control 
de calidad 
Imagen 
Coagulasa Prueba 
bioquímica 
La coagulasa es capaz de activar específicamente la cascada de 
coagulación por activación conformacional (no proteolítica) de la 
protrombina. Este proceso desencadena la conversión de 
fibrinógeno en fibrina lo cual da lugar a la coagulación aún en 
presencia de anticoagulantes como el citrato o el oxalato. El 
resultado es la formación de coágulos o grumos cuando se mezcla 
una suspensión bacteriana con plasma. Esta prueba se utiliza para 
diferenciar microorganismos del género Staphylococcus (2) 
Positivo= 
Staphylococcus aureus 
Negativo= otros 
estafilococos 
 
Catalasa Prueba 
bioquímica 
Esta enzima se encuentra en la mayoría de las bacterias aerobias 
y anaerobias facultativas. Es una hemo-proteína. Uno de sus 
sustratos es el H2O2 que se forma durante la degradación de los 
azúcares. Este compuesto es tóxico si se acumula en la célula. Su 
descomposición puede producirse a través de dos enzimas, 
catalasa y peroxidasa. La prueba se realiza a partir de un cultivo 
del microorganismo en caldo nutritivo, agregando unas gotas de 
agua oxigenada y observando la formación de burbujas. Es 
importante partir de cultivos libres de sangre ya que los glóbulos 
rojos contienen la enzima.(2) 
Staphylococcus es 
positivo, mientras que 
Streptococcus y 
Enterococcus son 
negativos 
 
Oxidasa Prueba 
bioquímica 
Esta prueba permite determinar la producción de la enzima 
citocromo c oxidasa presente, entre otras, en los géneros 
Neisseria, Pseudomonas, Aeromonas, Vibrio, Chryseobacterium y 
diferenciarlas del grupo oxidasa negativa de la familia 
Enterobacteriaceae. Esta enzima actúa, en presencia de oxígeno, 
activando la oxidación del citocromo "reducido" de la cadena 
transportadora de electrones. Un sustrato artificial (reactivo) 
puede sustituir al dador natural (citocromo reducido) dentro de 
la cadena transportadora. Existen varios reactivos que pueden 
actuar como dadores artificiales de electrones: indofenol, p-
fenilendiamina, como ejemplo. Estos reactivos al ser oxidados 
dan un producto coloreado en forma inmediata, indicando la 
presencia de la enzima (2). 
Positivo para 
Neisseria, 
Pseudomonas, 
Aeromonas, Vibrio, 
Chryseobacterium 
 
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Fermentación 
del manitol 
Selectivo-
diferencial 
Para determinar la habilidad de una bacteria para fermentar 
(degradar) el manitol incorporado en un medio basal y producir 
ácido con o sin gas visible, en presencia de rojo de fenol como 
indicador. El medio, cuyo pH es neutro, posee un color rojo. 
S.aureus metaboliza el manitol produciendo catabolitos ácidos 
que hacen que el medio adquiera un color amarillo intenso. 
Positivo= 
Staphylococcus aureus 
(amarillo) 
Negativo= otros 
Staphylococcus (rojo) 
 
Susceptibilidad a 
la bacitracina 
(Taxo A) 
Prueba 
bioquímica 
La Bacitracina es un antibiótico originalmente aislado de Bacillus 
licheniformis y pertenece a los antibióticos que inhiben la síntesis 
de la pared celular bacteriana (2). 
Streptococcus pyogenes es susceptible a bajas concentraciones 
de bacitracina (0,04 unidades), mientras que otras especies de 
estreptococos son resistentes. 
Susceptible= 
Streptococcus 
pyogenes 
Resistentes= otros 
Streptococcus y 
Enterococcus 
 
Factor Camp Prueba 
bioquímica 
El factor Camp es una proteína difusible, extracelular y 
termoestable producida por Streptococcus agalactiae que lisa 
eritrocitos tratados con la β-hemolisina de Staphylococcus 
aureus, y que manifiesta un sinergismo específico con la 
esfingomielinasa C sobre sangre, ya que es más efectivo cuando 
ocurre antes o simultáneamente con la hidrólisis enzimática de la 
esfingomielina de los eritrocitos. Se observa una punta de flecha 
en la intersección de las hemólisis. 
Positivo para 
Streptococcus 
agalactiae y negativo 
para otros 
Streptococcus. 
 
Susceptibilidad a 
la optoquina 
(Taxo P) 
Prueba 
bioquímica 
Se utiliza para evaluar la susceptibilidad de la bacteria a la 
optoquina. La optoquina prueba la fragilidad de la membrana 
celular bacteriana. Es utilizada específicamente para diferenciar S. 
pneumoniae (susceptible) de otros estreptococos α hemolíticos 
(grupo Viridans) que son resistentes. 
Sensible: S. 
pneumoniae 
Resistente: 
estreptococos del 
grupo Viridans 
 
Crecimiento en 
bilis esculina 
Prueba 
bioquímica 
Permite determinar la habilidad de la bacteria para hidrolizar el 
glucósido esculina a esculetina y glucosa, en presencia de bilis. 
Los Enterococcus dan la prueba positiva, observando un 
pigmento marrón a negro. 
Enterococcus = 
positivo 
Streptococcus= 
negativo 
 
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Crecimiento en 
NaCl 6,5% 
Prueba 
bioquímica 
Permite determinar la habilidad de la bacteria de crecer en 
presencia de altas concentraciones de cloruro de sodio. Los 
Enterococcus dan la prueba positiva. 
Enterococcus = 
positivo 
Streptococcus= 
negativo 
 
Indol Prueba 
bioquímica 
Permite la diferenciación de especies de Enterobacteriaceae. Se 
utiliza para determinar la capacidad de una bacteria de degradar 
el aminoácido triptofano dando indol.En el proceso de 
degradación de este aminoácido intervienen diversas enzimas 
triptofanasas, que catalizan la reacción de desaminación, 
atacando la molécula de Triptófano en su cadena lateral y dejando 
intacto el anillo aromático en la forma de indol, que luego 
reacciona con el reactivo de p-dimetilaminobenzaldehido 
produciendo un anillo rojo. 
Para identificar 
miembros de la familia 
Enterobacteriaceae 
Positivo: Escherichia 
coli 
Negativo: Klebsiella 
pneumoniae 
 
Ureasa Prueba 
bioquímica 
Es particularmente útil para diferenciar miembros de la familia 
Enterobacteriaceae. El medio de cultivo, formulado por Rustigian 
y Stuart, presenta bajo contenido de nutrientes y alta capacidad 
buffer. El extracto de levadura es la única fuente de carbono, 
nitrógeno, vitaminas y cofactores, y aporta los nutrientes 
esenciales para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfatos 
constituyen el sistema buffer, el rojo de fenol es el indicador de 
pH y la urea es el sustrato de la enzima ureasa. Aquellas bacterias 
que poseen la enzima ureasa, pueden utilizar el nitrógeno 
proveniente de la urea, la hidrolizan, liberando 2 moléculas de 
amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos metabólicos 
alcalinizan el medio, haciendo virar el indicador rojo fenol del 
amarillo al rojo (2). 
Para identificar 
miembros de la familia 
Enterobacteriaceae 
 
Positivo: Klebsiella, 
Proteus, Morganella, 
Providencia 
 
Negativo: Escherichia, 
Salmonella, Shigella 
 
Citrato Prueba 
bioquímica 
Esta prueba se realiza para determinar si un microorganismo es 
capaz de utilizar el citrato como única fuente de C y energía. El 
citrato puede ser metabolizado mediante la enzima citrato 
oxalacetato liasa que lo desdobla en acetato y oxalacetato (Ciclo 
reductivo de Krebs). Este último es convertido luego en piruvato, 
que proporciona así materias primas para la biosíntesis. Para 
evaluar la utilización del citrato se utiliza el medio de Simmons 
que contiene azul de Bromotimol como indicador de pH, citrato y 
sales de amonio. Si la bacteria crece, eleva el pH y hace virar el 
indicador de verde (pH 6.6) a azul (pH 7.7). Las bacterias que 
utilizan el citrato como fuente de C utilizarán el amonio presente 
en el medio de cultivo, como fuente de nitrógeno (2). 
Para identificar 
miembros de la familia 
Enterobacteriaceae y 
especies de 
Acinetobacter. 
 
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Movilidad Prueba 
bioquímica 
Se utiliza para determinar si una bacteria es móvil o inmóvil. La 
mayoría de las bacterias son móviles a través de flagelos, que se 
presentan principalmente en los bacilos, sin embargo algunos 
cocos son móviles también (2). Listeria monocytogenes tiene una 
movilidad en forma de “paragua” en el medio de cultivo. 
Móviles: E. coli, 
Salmonella, Proteus, 
Pseudomonas, 
Burkholderia, 
Aeromonas, Vibrio, 
Listeria 
Inmóviles: Klebsiella, 
Shigella, Acinetobacter 
Descarboxilación 
de aminoácidos 
Selectivo-
diferencial 
Se utiliza para medir la habilidad enzimática de una bacteria de 
descarboxilar el aminoácido y formar un grupo amino que 
alcaliniza el medio +CO2. El indicador es púrpura de bromocresol, 
que en pH ácido (5,2) esamarillo y en pH alcalino (6,8) da un color 
morado. 
Para la identificación 
de 
Enterobacteriaceae, 
bacilos no 
fermentadores de la 
glucosa, Aeromonas, 
Vibrio 
 
Referencias Bibliográficas 
1. Prats G. Microbiología Clínica. Madrid, España: Editorial Médica Panamericana; 2006. 366 p. 
2. MacFaddin JF. Biochemical tests for identification of medical bacteria. Lippincott. Philadelphia, PA 19106 USA; 2000. 453 p.