Coloracion Wright - Giemsa UAP

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Coloración Wright - 
Giemsa
BREVE HISTORIA
Fue desarrollada por el patólogo James 
Homer Wright en 1902 a partir de la 
modificación de la existente tinción de 
Romanowsky, utilizada para 
diferenciar elementos formes la sangre. 
TINCIÓN DE WRIGHT
● Es la tinción más empleada en frotis de 
sangre periférica o de médula ósea. Está 
clasificada como tinción policromática, ya 
que tiñe compuestos básicos y ácidos de las 
células.
● Diferencia bien la morfología de los 
linfocitos, tiñendo el núcleo de púrpura y 
citoplasma levemente azulado.
● Los agrupamientos de ácidos nucleicos, las 
proteínas de los núcleos celulares y el 
citoplasma inmaduro reactivo, fijan el azur 
B, colorante básico.
● La eosina Y, colorante ácido, se fija a las 
proteínas básicas.
PREPARACIÓN DE TINCIÓN WRIGHT
Materiales
● Colorante de Wright. Para 100 mL se requiere:
● Pesar 0.3 gr de colorante de Wright, medir 97 
ml de metanol y 3 ml de glicerol.
Preparación
● En un mortero colocar la cantidad pesada del 
colorante de Wright e ir incorporando poco a 
poco el glicerol hasta que el polvo quede 
totalmente disuelto.
● Posteriormente se agrega el metanol, se mezcla 
y se vierte en un frasco ámbar.
● Antes de usar se debe agitar la solución con 
movimientos suaves y filtrar.
Solución amortiguadora tamponada
● En un litro de agua destilada se agrega 3,76 g 
de hidrofosfato disódico (Na2HPO4 2H20) 
más 2,1 gr de fosfato de potasio 
dihidrogenado (KH2PO4)
● Mezclar muy bien hasta disolver todos los 
reactivos incorporados. Ajustar el pH a 7,2. 
Verter en un frasco de vidrio y mantener a 
temperatura ambiente.
MATERIALES PARA REALIZAR LA TINCIÓN
● Frotis sanguineo.
● Puente de tinción.
● Coloración Wright.
● Solucion Buffer pH 7,2.
● Piseta.
● Cristalizador o vertedero.
● Pipeta Pasteur.
● Tubo de ensayo.
● Cubreobjetos.
PROCEDIMIENTO
1. Se coloca el puente de tinción en el 
cristalizador o en un vertedero con el frotis 
encima.
2. Se cubre de colorante wright utilizando una 
pipeta Pasteur. Espera un minuto, escurrir y 
enjuagar con solución buffer.
3. Dejar secar verticalmente.
4. Mezclar en un tubo de ensayo o.5ml de Wright 
y 0.5ml de solución buffer.
5. Aplicar en la muestra y deja actuar de 3 a 5 
minuto.
6. Escurrir exceso de colorante y enjuagar con 
agua destilada.
7. Lavar de nuevo con solución buffer.
8. Escurrir y dejar secar verticalmente de nuevo.
9. Finalmente, colocar cubreobjetos una vez haya 
secado. 
Coloración Wright (1 minuto). Mezcla de Wright y solución tampón ( 
3 - 5 minutos)
VALORES NORMALES
● Neutrófilos 60 - 70%
● Eosinófilos 2- 4%
● Basófilos 0,5 - 1%
● Linfocitos 20 - 25%
● Monocitos 3 - 8%
COMO SE OBSERVAN LAS ESTRUCTURAS DE LA MUESTRA SANGUÍNEA CON LA TINCION WRIGHT
TINCIÓN GIEMSA
BREVE HISTORIA
En 1904 el Dr. alemán Gustav Giemsa publicó un 
libro en el que detalla los procedimientos 
optimizados por él mismo para teñir eucariotas 
flagelados, células sanguíneas y bacterias. En 
este libro Giemsa exponía las mejorar que había 
realizado sobre la tinción de Romanowsky (de 
eosina y azul de metileno), incorporando 
glicerol a la mezcla para estabilizar ambos 
compuestos permitiendo una mayor 
reproducibilidad de las observaciones 
microscópicas.
COLORACIÓN GIEMSA
Entre las tinciones tal vez una de las más 
conocidas, por su sencillez, bajo coste y eficacia 
es la tinción Giemsa, que permite la 
observación diferencial del núcleo y el 
citoplasma celular, puesto que el ADN queda 
teñido de un fuerte color azul. Esta tinción se 
emplea en organismos sin pared celular y 
eucariotas (con núcleo). Por ser una técnica 
sencilla de realizar, de gran funcionabilidad y 
económica es actualmente muy utilizada en el 
laboratorio clínico para frotis hematológicos, 
muestras de médula ósea y cortes de tejido.
PREPARACIÓN DE TINCIÓN 
GIEMSA
Materiales para la preparación de la solución 
madre
La preparación de la solución madre requiere 
pesar 600 mg de colorante Giemsa en polvo, 
medir 500 cc de alcohol metílico libre de 
acetona y 50 cc de glicerina neutra.
Modo de preparación de la solución madre
● Colocar el polvo de Giemsa pesado en un 
mortero. Si existen grumos se deben pulverizar. 
Posteriormente agregar una cantidad apreciable 
de la glicerina medida y mezclar muy bien. La 
mezcla obtenida se vierte a un frasco color 
ámbar muy limpio.
● El resto de la glicerina se coloca en el mortero. 
Volver a mezclar para limpiar el resto de 
colorante que haya quedado pegado a las paredes 
del mortero y echar al mismo frasco.
● El frasco se tapa y se lleva durante 2 horas en 
baño maría a 55 ºC. Mientras se encuentre en 
baño de maría, realizar ligeras agitaciones de la 
mezcla cada media hora aproximadamente.
● Posteriormente, se deja enfriar la mezcla para 
colocar el alcohol. Previamente, una parte del 
alcohol medido se coloca en el mortero para 
terminar de lavar lo que quede de colorante y 
seguidamente se adiciona a la mezcla junto al 
resto del alcohol.
● Esta preparación se debe dejar madurar durante 
al menos 2 semanas. La porción que se vaya 
utilizando de la solución madre debe ser filtrada.
● Para evitar la contaminación del preparado, se 
recomienda pasar la porción que va a estar en 
constante uso a un frasco ámbar pequeño con 
gotero. Recargar cada vez que se agote el 
reactivo.
MATERIALES
● 2 porta limpios
● pipeta pasteur y chupete
● tubo de ensayo
● gradilla
● muestra de sangre
● Cristalizador
● Puente de tinción
● Frasco lavador
● Cubreobjetos
● Microscopio
● Colorante Giemsa
● Solución Tampón pH 7,2
● Metanol
● Aceite de inmersión
PROCEDIMIENTO
❖ Previo a la coloración se debe tener listo el 
extendido de la muestra sobre un portaobjetos 
limpio.
❖ Las muestras pueden ser sangre, médula ósea, 
cortes de tejidos histológicos o muestras 
cérvico-vaginal. Se recomienda que los 
extendidos sean finos y tengan 1 o 2 horas de 
secado antes de colorearlos.
❖ Sobre un puente de coloración se colocan todas 
las láminas que se tengan para colorear. Se 
trabaja siempre en un mismo orden y se 
identifica bien cada lámina.
❖ Colocar unas gotas de alcohol metílico al 100% 
(metanol) sobre el frotis y dejar actuar por 3 a 5 
minutos, con el fin de fijar y deshidratar la 
muestra.
❖ Descartar el metanol presente en la lámina y 
dejar secar al aire.
❖ Una vez seco colocar con un gotero la solución 
final de tinción hasta cubrir la totalidad de la 
lámina. Dejar actuar por 15 minutos. Algunos 
autores recomiendan hasta 25 min. Depende de 
la casa comercial.
❖ Escurrir el colorante y lavar el frotis con agua 
destilada o con solución buffer a 7,2.
❖ Sobre un papel secante dejar secar las láminas 
al aire libre, dispuestas en forma vertical con 
ayuda de un soporte.
❖ Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa 
o algodón humedecido en alcohol para eliminar 
cualquier resto de colorante.
Los eritrocitos aparecen teñidos en color rosa-salmón y las plaquetas se ven 
muy pequeñitas de color violeta.
COMO SE OBSERVAN LAS ESTRUCTURAS DE LA MUESTRA SANGUÍNEA CON LA TINCION GIEMSA
GRACIAS POR SU ATENCIÓN