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OFICINA ESPAÑOLA DE
PATENTES Y MARCAS
ESPAÑA
19
Número de publicación:
51 Int. CI.:
C12N 1/36 (2006.01)
C12N 9/24 (2006.01)
C12P 7/64 (2006.01)
C12R 1/89 (2006.01)
12 TRADUCCIÓN DE PATENTE EUROPEA T3
96 Fecha de presentación y número de la solicitud europea: 30.03.2016 E 18199852 (7)
97 Fecha y número de publicación de la concesión europea: 22.12.2021 EP 3447124
Microalgas adaptadas a condiciones de cultivo heterótrofas Título:54
30 Prioridad:
31.03.2015 US 201562141167 P
45 Fecha de publicación y mención en BOPI de la
traducción de la patente:
28.04.2022
73 Titular/es:
CORBION BIOTECH, INC. (100.0%)
One Tower Place Suite 600
South San Francisco, CA 94080, US
72 Inventor/es:
WEE, JANICE LAU;
YUAN, DAWEI;
LU, WENHUA;
REGENTIN, RIKA y
VILLARI, JEFFREY
74 Agente/Representante:
TOMAS GIL, Tesifonte Enrique
Aviso:En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín Europeo de Patentes, de
la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea
de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se
considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del
Convenio sobre Concesión de Patentes Europeas).
 2 
DESCRIPCIÓN 
 
Microalgas adaptadas a condiciones de cultivo heterótrofas 
 
Referencia cruzada a solicitudes relacionadas 5 
 
Financiación gubernamental 
 
[0001] Algunas formas de realización de esta invención se realizaron con el apoyo del estado de California bajo la 
Subvención de la Comisión de Energía de California (California Energy Commission Grant) número pir-08-048. Dicho 10 
organismo tiene algunos derechos sobre esta invención. 
 
Campo técnico 
 
[0002] La presente invención se refiere a cepas de microalgas adaptadas a condiciones de cultivo heterótrofas y a 15 
métodos para producir tales cepas. Estas cepas son particularmente útiles para la producción de productos de 
cultivo como triglicéridos y ácidos grasos, así como productos derivados elaborados a partir de productos de cultivo, 
como productos oleoquímicos. 
 
Antecedentes 20 
 
[0003] Algunas microalgas son capaces de convertir fuentes de energía de carbono fijo en productos de mayor valor, 
como triglicéridos, ácidos grasos, carbohidratos y proteínas. Además, las propias microalgas pueden ser valiosas 
como fuente de alimento. Algunas especies de microalgas se han modificado genéticamente para producir "aceites 
modificados”, lo que significa que su contenido de triglicéridos muestra distribuciones de longitudes de cadena y 25 
saturación alteradas de ácidos grasos con respecto a las cepas de las que se derivaron. Véanse las publicaciones 
PCT n.º 2008/151149, 2009/126843, y 2010/045358. Si bien las cepas de Chlorella han sido el foco de muchos 
esfuerzos en el desarrollo de métodos de producción de triglicéridos, más recientemente se han identificado cepas 
del género Prototheca como aún más prometedoras como nuevas fuentes de triglicéridos, incluyendo los aceites 
modificados para aplicaciones específicas. Véanse las publicaciones PCT n.º 2010/063031 y 2010/063032 y las 30 
solicitudes PCT n.º US11/038463 y US11/038464. 
 
[0004] Un desafío importante en el uso de microalgas para la producción de triglicéridos y otros productos químicos 
valiosos es el coste de usar una fuente de energía de carbono fijo. Las materias primas de carbono fijo se refieren a 
fuentes de carbono que no son dióxido de carbono, que tiene una energía libre demasiado baja para ser óptima para 35 
su uso como fuente energética para el cultivo de microalgas heterótrofas. Las fuentes de carbono fijo que se han 
utilizado para el cultivo de microalgas incluyen glucosa, fructosa, sacarosa y glicerol. Cuando se utiliza azúcar 
purificado (por ejemplo, sacarosa o glucosa) como materia prima de carbono fijo para un cultivo, la purificación del 
azúcar a partir de material vegetal como caña de azúcar, remolacha azucarera y materiales celulósicos procesados 
incrementa considerablemente los costes generales del cultivo. La purificación suele ser necesaria, ya que la 40 
materia prima de carbono fijo puede contener sustancias inhibidoras o tóxicas para las microalgas. Por ejemplo, las 
grandes cantidades de sales de potasio y/o sodio y compuestos como xilosa y furfurales presentes en estas fuentes 
de azúcar de bajo coste pueden inhibir el crecimiento de microalgas y la producción de triglicéridos. 
 
[0005] Como añadido a estos problemas, es posible que las microalgas no conviertan gran parte de la fuente de 45 
carbono fijo añadida a un cultivo en el producto deseado debido a las vías metabólicas competitivas de las 
microalgas. 
 
[0006] Finalmente, muchas especies de microalgas poseen un crecimiento óptimo a temperaturas que requieren un 
enfriamiento del medio de cultivo, lo que añade un coste considerable al cultivo. 50 
 
Resumen 
 
[0007] En un aspecto de la invención, se proporciona un método para producir una cepa de microalgas mejorada 
que tiene al menos una mejora del 5 % en el contenido de aceite en comparación con una cepa de microalgas 55 
original, donde el método comprende cultivar una cepa de microalgas original en presencia de un inhibidor de un 
transportador de monosacáridos y aislar una cepa de microalgas mejorada que es capaz de crecer en presencia del 
inhibidor del transportador de monosacáridos y que tiene al menos una mejora del 5 % en el contenido de aceite en 
comparación con una cepa de microalgas original. 
 60 
Breve descripción de los dibujos 
 
[0008] Las características anteriores de la invención se entenderán más fácilmente con referencia a la siguiente 
descripción detallada, tenida en cuenta con referencia a los dibujos adjuntos, en los que: 
 65 
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 3 
La figura 1 es un gráfico de barras en el que se muestra la biomasa de triglicéridos y la biomasa que no son 
triglicéridos (NTB) de una cepa de microalgas no adaptada en comparación con la de una cepa adaptada en 
condiciones de control y una concentración de sal elevada; 
La Fig. 2 es un gráfico de barras en el que se muestra el tiempo de duplicación de una cepa original ("control") 
no adaptada, un cultivo mutagenizado de la cepa original y una serie de cultivos de la cepa original 5 
mutagenizada adaptados para utilizar glucosa como fuente primaria de carbono más de manera más eficiente 
(véase el Ejemplo 2); 
En la Fig. 3 se muestra la producción de aceite de varios cultivos de control y adaptados a células a lo largo del 
tiempo utilizando sacarosa purificada y jarabe de caña; 
En la Fig. 4 se muestra un transcurso de tiempo para la acumulación de potasio para varias cepas de 10 
microalgas en sacarosa y en jarabe de caña; 
En la Fig. 5 se muestra un transcurso de tiempo para la producción de aceite por las cepas de microalgas de la 
Fig. 4 en sacarosa y jarabe de caña; y 
En la Fig. 6 se muestra el transcurso de tiempo del rendimiento en términos de gramos de aceite producidos 
por gramo de azúcar fermentable para las cepas de las Fig. 4 y 5. 15 
 
Descripción detallada de formas de realización de la invención 
 
Definiciones 
 20 
[0009] Como se usa en el presente documento, el término "adaptar" o "adaptado/a” se refiere a cambios persistentes 
en una cepa de microalgas resultantes de la exposición de una población de microalgas derivadas de la cepa a una 
presión de selección. Los cambios incluyen cualquier cambio persistente, incluidos los cambios genéticos y 
epigenéticos. El término "adaptado/a en laboratorio" se refiere a una cepa de microalgas producida por selección no 
natural, es decir, la que resulta cuando el ser humano la expone a una presión de selección (independientemente de 25 
si esta selección se lleva a cabo literalmente en un "laboratorio" o en cualquier otra instalación). 
 
[0010] Como se usa en el presente documento, la expresión "cepa de microalgas mejorada" se refiere a una cepade 
microalgas que se ha derivado de una cepa original y que tiene al menos una propiedad que se ha mejorado con 
respecto a la cepa original. 30 
 
[0011] "Cultivado/a", y variantes como "fermentado/a", se refieren al fomento intencional del crecimiento de una o 
más células mediante el uso de condiciones seleccionadas y/o controladas. Entre los ejemplos de condiciones 
seleccionadas y/o controladas se incluyen el uso de un medio definido (con características conocidas como pH, 
fuerza iónica y fuente de carbono), temperatura especificada, tensión de oxígeno, niveles de dióxido de carbono y 35 
crecimiento en un biorreactor. “Cultivado/a” no se refiere al crecimiento o propagación de microorganismos en la 
naturaleza o de otro modo sin intervención humana. 
 
[0012] Como se usa en el presente documento, "crecimiento" abarca aumentos en el tamaño celular, el contenido 
celular y/o la actividad celular y/o aumentos en el número de células mediante la mitosis. 40 
 
[0013] "Tiempo de duplicación" se refiere a la duración del tiempo necesario para que una célula o cultivo de células 
se duplique en número en condiciones seleccionadas. Cuando el tiempo de duplicación de una cepa de microalgas 
(por ejemplo, una cepa adaptada) se expresa en comparación con el tiempo de duplicación de otra cepa de 
microalgas (por ejemplo, una cepa original), se entiende que estos tiempos de duplicación se determinan en las 45 
mismas condiciones de cultivo. 
 
[0014] El término "iones de sodio y potasio combinados totales" se refiere al valor de concentración obtenido al 
sumar la concentración de iones de sodio y la concentración de iones de potasio de una solución, por ejemplo, 
medios de cultivo o solución de azúcar, incluyendo jugo de caña de azúcar, jugo de remolacha, melaza o jugo de 50 
sorgo, o soluciones de celulosa despolimerizada o hemicelulosa despolimerizada. Este término no pretende implicar 
que ambos iones deban estar presentes, sino que abarca valores de concentración en los que todos los iones 
pueden ser sodio o, por el contrario, todos los iones pueden ser potasio, o están presentes tanto iones de sodio 
como iones de potasio. 
 55 
[0015] El término "producto de microalgas" se refiere a cualquier material producido por y/o derivado de una 
microalga. El término abarca productos secretados, productos que se extraen de la microalga (por ejemplo, 
triglicéridos y/o ácidos grasos), la biomasa residual que queda después de cualquier proceso de extracción y 
cualquier componente de la biomasa de microalgas. El término también abarca cualquier producto derivado que 
incorpore cualquier material producido por una microalga y/o derivado de esta. 60 
 
[0016] El término "materia prima" se refiere a una materia prima (entrada) introducida en un proceso para su 
conversión en algo diferente (salida). Este término se usa en este caso para describir la(s) sustancia(s) orgánica(s) 
suministrada(s) a un cultivo de microalgas para proporcionar al menos algunos de los requisitos de energía y 
carbono de las algas cuando el cultivo es heterótrofo. Una materia prima que contiene un azúcar (monosacáridos o 65 
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 4 
disacáridos simples u oligosacáridos o polisacáridos complejos) se denomina en el presente documento "materia 
prima de azúcar". 
 
[0017] Como se usa en este documento, un material se describe como "desionizado" cuando el material (por 
ejemplo, jugo de caña de azúcar) se ha sometido a un paso de procesamiento para eliminar iones, como, por 5 
ejemplo, cromatografía de intercambio iónico. El término no implica que todos los iones se eliminen necesariamente 
del material. 
 
[0018] El término "azúcar VHP”, por sus siglas en inglés, se refiere a lo que comúnmente se conoce como azúcar de 
muy alta polaridad, azúcar de alta polaridad o azúcar de uso alimenticio. Por ejemplo, el azúcar VHP puede tener un 10 
valor ICUMSA de entre 600 y 1200. 
 
[0019] El término “contenido de aceite" se usa en este caso para referirse al contenido de aceite presente en una 
microalga o cultivo de microalgas. Tal como se usa en referencia a los métodos de adaptación del presente 
documento, el contenido de aceite se expresa a menudo como un porcentaje del contenido de aceite de la cepa de 15 
microalgas original. 
 
[0020] Los términos "idéntico/a" o "porcentaje de identidad", en el contexto de dos o más secuencias de aminoácidos 
o nucleótidos, se refieren a dos o más secuencias o subsecuencias que son iguales o que tienen un porcentaje 
específico de residuos de aminoácidos o nucleótidos que son iguales, cuando se comparan y alinean para obtener la 20 
máxima correspondencia, medido usando uno de los siguientes algoritmos de comparación de secuencias o 
mediante inspección visual. 
 
[0021] Para la comparación de secuencias para determinar el porcentaje de identidad de nucleótidos o aminoácidos, 
normalmente una secuencia actúa como secuencia de referencia con la que se comparan las secuencias de prueba. 25 
Cuando se usa un algoritmo de comparación de secuencias, las secuencias de prueba y de referencia se introducen 
en un ordenador, se designan las coordenadas de la subsecuencia, si es necesario, y se designan los parámetros 
del programa del algoritmo de secuencia. A continuación, el algoritmo de comparación de secuencias calcula el 
porcentaje de identidad de secuencia para la(s) secuencia(s) de prueba en comparación con la secuencia de 
referencia en función de los parámetros de programa designados. La alineación óptima de las secuencias para la 30 
comparación se puede realizar utilizando BLAST configurado con los parámetros predeterminados. 
 
Métodos para crear cepas de microalgas mejoradas 
 
[0022] La presente invención proporciona métodos para fabricar cepas de microalgas con propiedades mejoradas en 35 
comparación con las cepas de las que se derivan. En formas de realización ilustrativas, los métodos se llevan a cabo 
para producir cepas de microalgas adaptadas para su uso en la producción industrial de productos de biomasa 
derivados de microalgas, incluyendo, entre otros, triglicéridos y ácidos grasos, o productos derivados de estos, 
incluyendo combustibles, alimentos, tensioactivos y productos oleoquímicos. 
 40 
[0023] Según formas de realización ilustrativas de la invención, se adaptan cepas de microalgas heterótrofas para su 
uso en la producción industrial de productos de biomasa derivados de microalgas, incluyendo triglicéridos y ácidos 
grasos. Puede emplearse cualquier cepa de microalgas heterótrofas en los métodos descritos en el presente 
documento, y las cepas iniciales (originales) adecuadas pueden variar, dependiendo del producto de biomasa 
derivado de microalgas que se vaya a producir. Entre las cepas originales o no adaptadas adecuadas para las 45 
aplicaciones descritas en este documento se incluyen las descritas en los documentos US 2010/0239712, publicado 
el 23 de septiembre de 2010, y US 2011/0294174, publicado el 1 de diciembre de 2011. Los ejemplos específicos de 
cepas adecuadas para su uso en los métodos descritos en este documento incluyen especies del género Prototheca 
o Chlorella, por ejemplo, Prototheca moriformis o Chlorella protothecoides, por ejemplo, cualquiera de las cepas 
UTEX 1435, 1806, 411, 264, 256, 255, 250, 249, 31, 29, 25 y las cepas CCAP 211/17 y 211/8d. 50 
 
[0024] La longitud de la cadena y la distribución de la saturación de los ácidos grasos producidos por las células de 
microalgas se pueden adaptar utilizando métodos de ingeniería genética, incluidos los que se describen en los 
documentos WO2008151149, WO2010063032, y la solicitud de PCT n.º US11/38463, ya sea antes o después de la 
adaptación. Las microalgas pueden comprender una o más de una acil-ACP tioesterasa (incluida una acil-ACP 55 
tioesterasa con actividad o especificidad por C8, C10, C12, C14, C16 o C18), sacarasa o desaturasa de ácidos 
grasos exógena. Como alternativa, o además, las microalgas pueden comprender una inactivación o atenuación de 
una desaturasa de ácidograso o acil-ACP tioesterasa endógena. Una mutación (incluyendo una inactivación) o 
inhibición (por ejemplo, usando antisentido o ARNi) de uno o más genes endógenos de desaturasa (por ejemplo, 
una esteroil-ACP desaturasa o un desaturasa de ácidos grasos que incluye una desaturasa de ácido graso delta 12) 60 
puede reducir o eliminar la actividad de la desaturasa para producir un perfil de triglicéridos con una saturación más 
completa. Las microalgas también pueden comprender una mutación (incluyendo una inactivación) o una inhibición 
(que incluye antisentido o ARNi) de un gen de cetoacil sintasa endógeno y/o pueden comprender un gen de cetoacil 
sintasa exógeno. En algunas formas de realización, las cepas se adaptan en el laboratorio para mejorar su 
crecimiento en medios con alto contenido de sal, su crecimiento en una fuente de carbono alternativa, su crecimiento 65 
a temperatura elevada, para mejorar la eficiencia de conversión de azúcar en triglicéridos, para mejorar el contenido 
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de aceite y/o para mejorar los niveles de C18:0 y/o C18:1. En formas de realización adicionales, las cepas 
adaptadas se usan para producir productos tales como ácidos grasos o triglicéridos. 
 
Adaptación para el crecimiento en condiciones adversas 
 5 
[0025] La presente invención proporciona métodos para fabricar cepas de microalgas adaptadas para el crecimiento 
o la supervivencia en condiciones adversas. Como resultado de la adaptación de la cepa, esta puede tener una 
producción sustancialmente inalterada o incrementada de un producto deseado, tal como triglicéridos de microalgas 
en esa condición o incluso en otras condiciones. En algunas formas de realización, el método produce cepas que 
poseen mayores tasas de crecimiento en comparación con la cepa no adaptada (por ejemplo, como puede medirse 10 
mediante el tiempo de duplicación, la tasa de crecimiento específica o la constante de tasa), en condiciones de 
cultivo que inhiben el crecimiento de una cepa no adaptada (es decir, una presión de selección). Por ejemplo, una 
cepa adaptada en el laboratorio puede caracterizarse por una tasa de crecimiento que es un 5 % mayor que una 
cepa original o una cepa natural de esa especie, cuando se cultiva en las mismas condiciones. En diversas formas 
de realización, el método comprende cultivar la cepa no adaptada en condiciones inhibidoras del crecimiento durante 15 
múltiples generaciones hasta que se produzca una cepa adaptada. Normalmente, el cultivo continuará durante al 
menos 10 a 20 generaciones, incluyendo, por ejemplo, al menos 50 generaciones o al menos 70, 80 o 150 
generaciones. El cultivo de múltiples generaciones bajo la presión de selección se puede realizar en un quimiostato 
o mediante subcultivos sucesivos (por ejemplo, en matraces de agitación). En algunas formas de realización, el 
proceso implica la adaptación de una cepa mutagenizada. Las condiciones que inducen las mutaciones adecuadas 20 
incluyen la exposición a un mutágeno químico y/o radiación UV o de otro tipo. Por lo general, al final del período de 
adaptación, se obtienen, se caracterizan y se almacenan cepas aisladas del cultivo para uso futuro. En una forma de 
realización, se elige una cepa aislada que mantiene un nivel mínimo de producción de triglicéridos (por ejemplo, una 
producción comparable a la cepa original, por ejemplo, una producción medida por el % de peso en seco de las 
células del producto final, el rendimiento por volumen de medio de cultivo, y/ o la tasa de producción de triglicéridos 25 
por célula). En formas de realización específicas, la cepa adaptada es capaz de producir entre un 10 % y un 90 %, 
por ejemplo, de 20 a 30, de 30 a 40, de 40 a 50, de 60 a 70, de 70 a 80, de 80 a 90 o de 75 a 85 % de triglicéridos 
por peso en seco de las células. Como apreciarán fácilmente los expertos en la técnica, la capacidad de producir 
estas cantidades de triglicéridos se puede determinar utilizando condiciones adecuadas para la producción de 
triglicéridos. Por ejemplo, la falta/la limitación de nitrógeno es un inductor conocido de la lipogénesis en 30 
microorganismos oleaginosos y, por lo tanto, la producción de triglicéridos puede, en algunas formas de realización, 
llevarse a cabo en condiciones de bajo nitrógeno, por ejemplo, como se describe en el documento US 
2011/0294174, publicado el 1 de diciembre de 2011. 
 
Alto contenido de sal 35 
 
[0026] La condición inhibidora del crecimiento puede ser un medio de cultivo que tenga una concentración de sal 
más elevada en comparación con una concentración típica para la cepa original, en el que la concentración de sal 
más elevada limita el crecimiento (denominada en este documento "concentración de sal elevada” o “condición de 
sal elevada”). La concentración de sal elevada puede ser el resultado de sales que incluyen cationes de potasio, 40 
sodio, calcio y/o magnesio. En varias formas de realización, una concentración de sal elevada incluye, por ejemplo y 
sin limitación, concentraciones de iones de potasio y/o sodio (por ejemplo, "iones de sodio y potasio combinados 
totales") de 10 a 1000, 50 a 900 o 100 a 800 mM más altas que las típicas para el crecimiento de una cepa no 
adaptada (es decir, una cepa original o una cepa natural) en las mismas condiciones de crecimiento. Por ejemplo, la 
concentración de iones de potasio o sodio (individualmente o en total) puede ser 10, 50, 100, 200, 300, 400 o 45 
500 mM mayor que la concentración típica para el crecimiento de una cepa no adaptada, cuando se cultiva en 
condiciones de cultivo convencionales para esa cepa. Las condiciones convencionales para especies de Prototheca 
y Chlorella incluyen, por ejemplo, las divulgadas en los documentos US 2010/0239712, publicado el 23 de 
septiembre de 2010, y US 2011/0294174, publicado el 1 de diciembre de 2011 (por ejemplo, crecimiento en 4,2 g/L 
de K2HPO4, 3,1 g/l de NaH2PO4, 0,24 g/L de MgSO4·7H2O, 0,25 g/L de ácido cítrico monohidrato, 0,025 g/L de CaCl2 50 
2H2O, 2g/L de extracto de levadura más glucosa al 2 % durante 7 días a 28 °C con agitación (200 r.p.m.)). En 
particular, el "nivel típico" de la concentración de iones de potasio y/o sodio es el nivel que proporciona la tasa de 
crecimiento más alta (por ejemplo, un aumento en el número de células) de la cepa no adaptada en condiciones 
seleccionadas. Este nivel se puede determinar cultivando la cepa no adaptada en un rango de diferentes 
concentraciones de sal y determinando la tasa máxima de crecimiento a partir de una gráfica de la tasa de 55 
crecimiento frente a la concentración de sal. Como ejemplo, la concentración típica de sodio y/o potasio para una 
cepa no adaptada puede ser de aproximadamente 40 mM. La concentración elevada pero subletal de sal empleada 
en el método puede ser de 100 a 1000 mM de iones de sodio y/o potasio, por ejemplo, de 100, 200, 300, 400, 500, 
600, 700, 800, 900, o 1000 mM o iones de sodio y/o potasio. La sal puede obtenerse mediante el uso de fuentes de 
carbono económicas (por ejemplo, jugo de caña de azúcar, azúcar VHP, jugo de remolacha, jugo de sorgo, melaza, 60 
glicerol sin refinar o material celulósico despolimerizado, incluyendo celulosa despolimerizada y/o preparaciones de 
hemicelulosa). Estas preparaciones de azúcar pueden tener concentraciones de sal que, cuando se añaden a un 
cultivo, producen mayores concentraciones de sal que la concentración de sal típica para una cepa determinada. 
 
[0027] Después de varias generaciones (por ejemplo, 5-50, 100, 150 o más) de cultivo en condiciones de alto 65 
contenido de sal, el cultivo contiene células que se multiplican más rápido que la cepa original en condiciones de alto 
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contenido de sal. A continuación, se pueden aislar una o más células del cultivo para establecer una nueva cepa 
adaptada, que luego se caracteriza por las características de producción deseadas, como la productividad de 
triglicéridos y la distribución de la longitud y la saturación de la cadena deácidos grasos. La cepa adaptada puede 
usarse entonces para producir triglicéridos en presencia de concentraciones de sal elevadas (incluyendo 
condiciones de sal elevadas en un grado menor que la condición de evolución). Como resultado, se pueden usar 5 
fuentes de carbono con alto contenido de sal y de bajo coste sin costosos pasos de eliminación de sal 
(desionización) o con una combinación de fuentes de carbono con bajo contenido de sal y alto contenido de sal para 
mejorar la economía de la producción de triglicéridos. Tales formas de realización son particularmente útiles en 
comparación con especies de microalgas que no han evolucionado de manera natural para ser tolerantes a la sal; es 
decir, especies que no son especies marinas o halófilas. 10 
 
Fuentes de carbono alternativas 
 
[0028] Las células se pueden adaptar para que crezcan con azúcar VHP como fuente de carbono primaria o única. 
 15 
[0029] La condición inhibidora del crecimiento puede ser una fuente de carbono distinta de la fuente de carbono 
típica, tal como la glucosa purificada, como fuente de carbono primaria. Las fuentes alternativas de carbono pueden 
ser glicerol, sacarosa, particularmente en forma de jugo de remolacha, azúcar VHP, melaza, jugo de sorgo 
(típicamente extraído de la caña de la planta de sorgo, por ejemplo, mediante trituración, trituración o corte), jugo de 
caña de azúcar y xilosa, particularmente xilosa derivada de materiales celulósicos. Tales fuentes de carbono 20 
"alternativas" producen tasas de crecimiento más bajas que las fuentes de carbono que se emplean 
convencionalmente para el cultivo, en condiciones de cultivo definidas. La fuente de carbono puede ser una materia 
prima de origen vegetal que sea predominantemente sacarosa, glucosa o fructosa, o un material celulósico 
hidrolizado. Entre los ejemplos de tales materias primas se incluyen extracto de caña de azúcar (incluyendo jugo 
claro o jarabe), extracto de remolacha azucarera (incluyendo jugo claro o jarabe), azúcar de palma o rastrojo de 25 
maíz despolimerizado o bagazo de caña de azúcar. La cepa se puede adaptar para que metabolice y/o tolere 
azúcares de cinco carbonos, incluidos, por ejemplo, xilosa, arabinosa y ribosa, o para que tolere sustancias 
inhibidoras que se encuentran en material celulósico, como los furfurales. 
 
Sustancias inhibidoras 30 
 
[0030] La condición inhibidora del crecimiento puede ser un medio de cultivo que contenga una sustancia, distinta de 
sodio o potasio, que sea inhibidora del crecimiento. En particular, la sustancia inhibidora del crecimiento puede ser 
una sustancia presente en el material celulósico despolimerizado. La biomasa celulósica es económica y fácil de 
obtener y generalmente constituye residuos de cultivos energéticos herbáceos y leñosos, así como cultivos 35 
agrícolas, es decir, las partes de la planta, principalmente tallos y hojas, que no se recogen de los campos con el 
alimento principal o el producto de fibra. Entre los ejemplos se incluyen desechos agrícolas como bagazo de caña de 
azúcar, cascarillas de arroz, fibra de maíz (incluidos tallos, hojas, cáscaras y mazorcas), paja de trigo, paja de arroz, 
pulpa de remolacha azucarera, pulpa de cítricos, cáscaras de cítricos; desechos forestales tales como los de 
entresacas de maderas duras y blandas, y residuos de operaciones madereras de maderas duras y blandas; 40 
desechos de madera tales como desechos de aserraderos (astillas de madera, serrín) y desechos de plantas de 
celulosa; desechos urbanos tales como fracciones de papel de desechos sólidos municipales, desechos urbanos de 
madera y desechos verdes urbanos tales como recortes de césped municipal; y residuos de construcción de 
madera. Los celulósicos adicionales incluyen cultivos celulósicos dedicados, como el pasto varilla, la madera de 
álamo híbrido, el miscanto, la caña de fibra y el sorgo de fibra. 45 
 
[0031] La biomasa celulósica se puede despolimerizar para hacer que el azúcar contenido en ella esté disponible 
para las microalgas como fuente de energía, y la biomasa celulósica despolimerizada resultante incluye una serie de 
materiales que pueden inhibir el crecimiento de las microalgas y la producción de triglicéridos. Tales materiales 
incluyen, sin limitación, lignina, hidroximetilfurfural, acetato, concentraciones de sal elevadas y xilosa. Las cepas de 50 
microalgas adaptadas según los métodos de la invención se pueden usar para producir triglicéridos a partir de una 
materia prima de azúcar en presencia de sustancias inhibidoras, incluidas las concentraciones de sal elevadas de 
muchas materias primas celulósicas despolimerizadas. Los altos niveles de sal están presentes de manera natural 
en el material celulósico despolimerizado o surgen del proceso de despolimerización. Por ejemplo, la 
despolimerización de materiales celulósicos puede requerir condiciones altamente ácidas o alcalinas. La 55 
neutralización del pH de las condiciones altamente ácidas o alcalinas da como resultado fuentes de azúcar con 
concentraciones elevadas de potasio y/o sodio. Utilizando las cepas adaptadas de la presente invención, se puede 
reducir o eliminar la necesidad de desionizar una materia prima de azúcar antes de añadirla al medio de cultivo. La 
desionización se puede realizar, por ejemplo, mediante intercambio iónico u ósmosis inversa, y conlleva un coste 
adicional. Por el contrario, los cultivos de las cepas de la presente invención pueden alimentarse con materia prima 60 
no desionizada "sin refinar" o materia prima parcialmente desionizada (es decir, eliminando solo una fracción de la 
sal de la materia prima o mezclando materia prima desionizada con materia prima no desionizada). Como resultado, 
la producción de biomasa, incluyendo los triglicéridos y otros productos derivados de la biomasa, se vuelve más 
rentable debido a una tasa de crecimiento o tasa de producción de triglicéridos que aumenta en comparación con la 
cepa original para una concentración de inhibidor elevada determinada. (En este contexto, el término “alto/a” o 65 
“elevado/a” abarca la presencia de un inhibidor que no suele estar presente en los cultivos convencionales, así como 
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 7 
la presencia de un inhibidor en una cantidad superior a la habitual en los cultivos convencionales). Según los 
métodos adaptativos de la invención, una cepa no adaptada se cultiva continuamente en medios de cultivo que 
contienen una cantidad elevada de uno o más de estos materiales inhibidores o una composición que los 
comprende, es decir, material celulósico despolimerizado, durante múltiples generaciones (por ejemplo, 10-50, 100, 
150, o más) o hasta que el cultivo muestre un aumento en la tasa de crecimiento. 5 
 
Temperatura atípica 
 
[0032] La condición inhibidora del crecimiento puede ser una temperatura diferente a la temperatura típica de 
crecimiento (alrededor de 32 °C para muchas cepas de microalgas). Si bien la forma de realización de la invención 10 
se puede poner en práctica para crear cepas adaptadas al crecimiento y/o la producción de triglicéridos a 
temperaturas por debajo de 32 °C, más típicamente, estas formas de realización se ponen en práctica para crear 
cepas adaptadas para crecer y producir triglicéridos a temperaturas por encima de 32 °C, es decir, de 37 °C y 
superiores. Según los métodos adaptativos de la divulgación, una cepa no adaptada se cultiva continuamente a la 
temperatura deseada hasta que el cultivo contenga células que crecen más rápido y/o producen más triglicéridos 15 
que la cepa no adaptada a esa temperatura. Alternativamente, una cepa de microalgas se adapta a una primera 
temperatura elevada para la cual la cepa original crece o produce triglicéridos a un ritmo subóptimo (por ejemplo, 
reducido en aproximadamente un 70 %). Después de varias generaciones, la cepa se adapta a una segunda 
temperatura elevada que es más alta que la primera temperatura elevada. Si es necesario o se desea, el proceso 
puede repetirse con temperaturas más elevadas.Si se utiliza un método con quimiostato, la temperatura se puede 20 
aumentar al observar un aumento en la densidad celular del cultivo. Como resultado, se produce una cepa 
adaptada, que puede poseer un mejor crecimiento y/o una mejor producción de triglicéridos a una temperatura 
elevada, reduciendo así la energía, los materiales o los bienes de equipo necesarios para enfriar un cultivo 
exotérmico de microalgas. 
 25 
pH atípico 
 
[0033] La condición inhibidora del crecimiento puede ser un pH diferente al pH de crecimiento típico (por ejemplo, 
6,5-8 para muchas cepas de microalgas). En esta forma de realización de la invención, se preparan cepas 
adaptadas al crecimiento y/o a la producción de triglicéridos a pH bajo o alto. Según un método adaptativo de la 30 
presente invención, una cepa no adaptada se cultiva continuamente al pH deseado hasta que el cultivo contenga 
células que crezcan más rápido y/o que produzcan más triglicéridos que la cepa no adaptada a ese pH. 
Alternativamente, una cepa de microalgas se adapta a un primer pH para el cual la cepa original crece o produce 
triglicéridos a un ritmo subóptimo (por ejemplo, reducido en aproximadamente un 70 %). Después de varias 
generaciones, la cepa se adapta a un segundo pH que es más bajo o más alto que el primer pH. Si es necesario o 35 
se desea, el proceso puede repetirse a un pH más bajo o más alto. Si se usa un método con quimiostato, el pH se 
puede disminuir o aumentar al observar un aumento en la densidad celular del cultivo. Como resultado, se produce 
una cepa adaptada, que puede crecer y/o producir triglicéridos en medios de cultivo que tengan un pH bajo o 
elevado. En una forma de realización específica, el pH reducido o elevado es uno que es inferior a 6,5 o superior a 
8, respectivamente. El cultivo de microalgas a un pH inferior a 6,5 o superior a 8 puede ser útil para minimizar la 40 
contaminación del medio de cultivo durante el cultivo. 
 
Adaptación para mejorar la eficiencia en la producción de triglicéridos 
 
[0034] En una forma de realización, el método se lleva a cabo para crear una cepa que convierta una fuente de 45 
carbono, por ejemplo, un azúcar como glucosa, sacarosa o alcohol de azúcar, como glicerol, en un producto final 
deseado, por ejemplo, triglicéridos, de manera más eficiente que una cepa equivalente no adaptada. La eficiencia se 
mide en el sentido metabólico; aumenta el número de moles de triglicéridos por mol de fuente de carbono utilizada. 
En estas formas de realización, el método comprende cultivar la cepa no adaptada en concentraciones que limitan el 
crecimiento de la fuente de carbono durante múltiples generaciones hasta que se produzca una cepa adaptada. 50 
Cuando la fuente de carbono es un azúcar, una "concentración que limita el crecimiento" del azúcar se denomina en 
el presente documento "baja concentración de azúcar" o "condición de bajo contenido de azúcar". Por ejemplo, la 
concentración de azúcares utilizables puede ser inferior a aproximadamente 1,0 g/L, por ejemplo, inferior a alrededor 
de 0,8 g/L, 0,5 g/L, 0,2 g/L, 0,1 g/L, 0,08 g/L, 0,05 g/L, 0,02 g/L, 0,01 g/L, o tan baja como aproximadamente 
0,005 g/L. Como en las otras formas de realización, el cultivo en condiciones adaptativas continúa durante al menos 55 
10 a 20 o más generaciones, es decir, al menos 70 generaciones y, a veces, durante 150 generaciones o más. En 
varias formas de realización, el método implica seleccionar una cepa de microalgas adaptada capaz de producir al 
menos un 50 % de triglicéridos por peso en seco de las células en condiciones de cultivo convencionales, donde el 
crecimiento no está limitado por la concentración de azúcar del cultivo (es decir, donde el azúcar es "no limitante"). 
 60 
[0035] En una forma de realización de la invención, la condición inhibidora del crecimiento es una inhibición de la 
oxidasa alternativa (AOX). La inhibición de la AOX puede ser química o por desactivación o atenuación de genes. La 
inhibición química se puede lograr con ácido salicilhidroxámico (SHAM). Por ejemplo, las células de microalgas se 
pueden mutagenizar químicamente y/o usando radiación. A continuación, las células mutagenizadas pueden 
sembrarse en placas con un inhibidor tal como SHAM y se pueden seleccionar colonias que crezcan vigorosamente. 65 
Luego se puede analizar las tasas de crecimiento, las concentraciones de triglicéridos y la eficiencia en la conversión 
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 8 
de azúcar en triglicéridos de las colonias seleccionadas. Luego se aísla una colonia mutante que tiene una mayor 
eficiencia en la conversión de azúcar en triglicéridos en condiciones de cultivo convencionales. En formas de 
realización particulares de la descripción, la colonia mutante es capaz de producir del 10 al 90 %, por ejemplo, al 
menos el 50 %, de triglicéridos por peso en seco de las células. Sin ceñirse a la teoría, la cepa aislada puede tener 
una o más mutaciones que desvían más carbono a triglicéridos y menos carbono a CO2. En diversas formas de 5 
realización de la invención, estas microalgas sometidas a este método no son de especies marinas o halófilas. 
Cepas ilustrativas de Chlorella y cepas de Prototheca, incluyendo, entre otras, cepas de Chlorella protothecoides y 
cepas de Prototheca moriformis. Las cepas adaptadas se pueden producir utilizando los métodos de adaptación 
proporcionados en este documento. La cepa mutante puede usarse para producir aceite a partir de azúcar con una 
alta eficiencia. El aceite resultante se puede utilizar para fabricar combustibles, productos químicos, alimentos u 10 
otros productos. 
 
Adaptación para un contenido de aceite mejorado 
 
[0036] En determinadas formas de realización, el método se lleva a cabo para aislar una cepa de microalgas 15 
mejorada que tiene un contenido de aceite mejorado en comparación con una cepa original. En algunas formas de 
realización, el método implica cultivar una cepa de microalgas originales en presencia de un inhibidor de un 
transportador de monosacáridos y aislar un mutante de la cepa de microalgas originales que es capaz de crecer en 
presencia de un inhibidor de un transportador de monosacáridos. Los transportadores de monosacáridos incluyen 
proteínas de transporte de membrana que se unen a monosacáridos (como la glucosa) e iones de sodio, que entran 20 
juntos en la célula. Luego, los iones de sodio son bombeados hacia el exterior de la célula por una ATPasa de sodio 
y potasio. La velocidad y la extensión del transporte de azúcar depende de la concentración de iones de sodio. Los 
inhibidores del sistema de transporte de monosacáridos son ampliamente conocidos e incluyen florizina, citocalasina 
B, 2-desoxiglucosa e inhibidores del sistema ATPasa de sodio y potasio, como los glucósidos cardíacos (por 
ejemplo, digoxina y ouabaína). Cualquier inhibidor que sea capaz de inhibir un transportador de monosacáridos de 25 
microalgas puede emplearse en el método. 
 
Adaptación para niveles mejorados de C18:0 y/o C18:1 
 
[0037] En formas de realización particulares, el método se utiliza para aislar una cepa de microalgas mejorada que 30 
tiene niveles aumentados de C18:0 y/o C18:1 en comparación con una cepa original. En algunas formas de 
realización de la invención, el método implica cultivar una cepa de microalgas originales en presencia de un inhibidor 
de una β-cetoacil-ACP sintasa (KAS) o de una reductasa de proteína transportadora de enoil-acilo (ACP), y aislar un 
mutante de la cepa de microalgas original que sea capaz de crecer en presencia del inhibidor. Se puede inhibir 
cualquier β-cetoacil-ACP sintasa (KAS) presente en una célula de microalgas, incluidos, por ejemplo, KASI, KASII 35 
y/o KASIII. El inhibidor puede ser selectivo para una de estas enzimas o puede inhibir más de una. Los inhibidores 
ilustrativos de KAS incluyen cerulenina del hongo Cephalosporium caerulens, tiolactomicina (TLM) del actinomiceto 
Nocardia spp., isoniazida (hidrazida del ácido isonicotínico), etionamida y triclosán [5-cloro-2-(2,4-diclorofenoxi)-fenol]. Como alternativa a la inhibición de KAS, o además, se puede inhibir cualquier reductasa de proteína 
transportadora de enoil-acilo (ACP) (ENR) presente en una célula de microalgas, incluyendo ENR (NADPH, 40 
especificidad por A) y/o ENR (NADPH, especificidad por B). El inhibidor puede ser selectivo para una de estas 
enzimas o puede inhibir más de una. Los inhibidores de ENR ilustrativos incluyen triclosán, triclocarbán, atromentina 
y leucomelona. En algunas formas de realización de la invención, el inhibidor inhibe tanto KAS como ENR; el 
triclosán, por ejemplo, inhibe ambas enzimas. 
 45 
Consideraciones generales para los métodos 
 
[0038] En las formas de realización de los métodos adaptativos de la invención, la condición inhibidora del 
crecimiento y/o la producción de un producto deseado mantenida durante el proceso de adaptación no es letal para 
las células y no evita completamente la división celular. Al contrario, las condiciones de cultivo se mantienen de tal 50 
modo que la división celular es más lenta que la observada en condiciones convencionales, de modo que existe una 
presión de selección sobre el cultivo que experimenta la adaptación. Por ejemplo, se puede utilizar una condición 
que disminuya la tasa de crecimiento (que extienda el tiempo de duplicación) entre un 5 y un 95 %. En diversas 
formas de realización, la velocidad de crecimiento se ralentiza entre un 20 % y un 90 %, entre un 30 y un 85 %, entre 
un 40 y un 75 % o entre un 50 y un 70 %. En una forma de realización particular, la tasa de crecimiento se ralentiza 55 
en aproximadamente un 70 %. 
 
[0039] En formas de realización de los métodos adaptativos de la invención, el cultivo para múltiples generaciones 
se puede realizar en un quimiostato o mediante subcultivos sucesivos en matraces de agitación. Además, en estas 
diversas formas de realización, la cepa que se desea adaptar puede mutagenizarse antes del cultivo en las 60 
condiciones de adaptación o en cualquier punto o de forma continua a lo largo del proceso de adaptación. La 
mutagénesis se puede lograr fácilmente por medios conocidos por los expertos en la técnica, que incluyen, sin 
limitación, la exposición a un mutágeno químico; por ejemplo, N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina, metanosulfonato 
de etilo o 2-metoxi-6-cloro-9-[3-(etil-2-cloroetil)aminopropilamino]acridina diclorhidrato o rayos UV, rayos X , rayos 
gamma u otra radiación electromagnética o de partículas. 65 
 
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 9 
[0040] En formas de realización de los métodos adaptativos de la invención, los métodos se utilizan para adaptar 
una cepa de microalgas a una serie de parámetros diferentes, como dos o más de las condiciones inhibitorias 
descritas anteriormente. Por ejemplo y sin limitación, una cepa puede adaptarse para que tolere tanto el cultivo a 
alta temperatura como a concentraciones de sal elevadas. En otras formas de realización, la cepa se puede adaptar 
para que utilice una fuente de carbono de manera más eficiente y para que tolere concentraciones de sal elevadas. 5 
En otras formas de realización, la cepa se puede adaptar al cultivo a alta temperatura y a una concentración de sal 
elevada, así como para que utilice una fuente de carbono de manera más eficiente. En diversas formas de 
realización, estas cepas adaptadas de forma múltiple se adaptan en un proceso en el que todas las adaptaciones se 
realizan simultáneamente. En otras formas de realización, estas cepas adaptadas de forma múltiple se adaptan en 
una serie de procesos de adaptación secuenciales. 10 
 
[0041] En formas de realización de los métodos adaptativos de la invención, el profesional puede aislar células 
individuales de un cultivo adaptado. Los aislados de una sola célula se caracterizarán para confirmar que tienen uno 
o más de los atributos deseados del cultivo adaptado, como un aumento en la producción de triglicéridos, un 
aumento en la eficiencia de conversión de azúcar en triglicéridos o la capacidad de producir triglicéridos con una 15 
distribución deseada de ácidos grasos, y los aislados confirmados de este modo se almacenarán o se "guardarán" 
para un uso futuro, incluso para una adaptación adicional. 
 
Cepas de microalgas mejoradas 
 20 
[0042] En otro aspecto, la presente invención también proporciona cepas de microalgas producidas mediante los 
métodos de la invención. Estas cepas, que pueden denominarse en el presente documento "cepas adaptadas en 
laboratorio", muestran, en comparación con las cepas de las que se derivaron, un crecimiento y/o producción de 
triglicéridos mejorados en condiciones inhibidoras del crecimiento y/o la producción de triglicéridos de las cepas no 
adaptadas. En diversas formas de realización, entre estas cepas adaptadas se incluyen cepas que poseen una tasa 25 
de crecimiento más rápida y/o una mayor producción de triglicéridos que las cepas equivalentes no adaptadas para 
una condición particular. En varias formas de realización, estas cepas adaptadas poseen una tasa de crecimiento 
más rápida y/o una mayor producción de triglicéridos en comparación con las cepas no adaptadas en una o más 
condiciones, como una temperatura de cultivo más alta, por ejemplo, temperaturas de 37 grados C o más, donde la 
cepa no adaptada se cultiva típicamente a temperaturas de unos 32 grados C; concentraciones de sal más altas, por 30 
ejemplo, de sal de potasio y/o sodio, por ejemplo, concentraciones de sal de 100 a 800 mM más altas que la 
concentración de sal en medios de crecimiento típicos (por ejemplo, potasio 40 mM); y condiciones en las que la 
fuente de carbono principal es una fuente de carbono distinta de la glucosa, por ejemplo, glicerol. En diversas formas 
de realización, estas cepas adaptadas son capaces de convertir un tipo específico de fuente de carbono en un 
producto final deseado, por ejemplo, triglicéridos, con mayor eficiencia que la cepa no adaptada de la que se 35 
derivaron. En diversas formas de realización, estas cepas de microalgas de la invención no son de especies marinas 
o halófilas. Entre las cepas de Chlorella y las cepas de Prototheca ilustrativas, se incluyen, entre otras, cepas de 
Chlorella protothecoides y cepas de Prototheca moriformis. Las cepas adaptadas se pueden producir utilizando los 
métodos de adaptación proporcionados en este documento. 
 40 
Tolerancia a la sal 
 
[0043] En una forma de realización, la presente invención proporciona una cepa adaptada de microalgas de una 
especie que es capaz de ser cultivada de manera heterótrofa. Gracias a la adaptación, la cepa es capaz de crecer 
en presencia de concentraciones de sal elevadas, por ejemplo, de 100 a 800 mM, o 700 mM más que la 45 
concentración típica utilizada para cultivar las microalgas. En algunas formas de realización, la concentración de sal 
más alta es una concentración de una sal de sodio y/o potasio que es al menos 100 mM, al menos 300 mM o hasta 
800 mM mayor que la concentración típica para la cepa no adaptada. Por ejemplo, la concentración de sal elevada 
puede provenir del uso de una materia prima de azúcar que tiene al menos 50, 100, 150 o 200 mM de iones de 
sodio y/o potasio. En algunas formas de realización, la cepa muestra una tasa de crecimiento específica en las 50 
concentraciones de sal elevadas que es al menos un 5 %, al menos un 10 %, un 20 %, al menos un 30 % o al 
menos un 50 % más rápida (por ejemplo, medida por aproximación a la cinética de primer orden o tiempo de 
duplicación) que la de la cepa no adaptada bajo las mismas concentraciones de sal. 
 
[0044] En algunas formas de realización, la cepa adaptada tiene un tiempo de duplicación en concentraciones de sal 55 
elevadas de 12 horas o menos, por ejemplo, alrededor de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 horas, por ejemplo, 
alrededor de 4-5 horas, cuando las microalgas de esa especie de origen natural tienen un tiempo de duplicación 
mayor o igual a 12 horas en las concentraciones de sal elevadas. En diversas formas de realización, la reducción del 
tiempo de duplicaciónpuede ser de al menos 15 minutos, al menos 30 minutos, al menos 1 hora o al menos 2 horas 
o más. En diversas formas de realización, la reducción del tiempo de duplicación puede estar en el rango de 15 60 
minutos a 8 horas, de 2 a 48 horas, de 3 a 24 horas o de 3,5 a 12 horas. El tiempo de duplicación se puede medir de 
manera conveniente usando lecturas de densidad óptica, como se ilustra en los ejemplos siguientes y como se hace 
comúnmente en la técnica para otras aplicaciones, o mediante cualquier otro método adecuado. En varias formas de 
realización, la cepa adaptada posee dicho tiempo de duplicación reducido en medios en los que la concentración de 
sal está en el rango de 50 a 800 mM, 100 a 600 mM o 200 a 400 mM mayor que la concentración de sal típica para 65 
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 10 
la cepa no adaptada. Por ejemplo, la concentración combinada de sodio y potasio puede ser de 100 a 1000, de 100 
a 200, de 200 a 300, de 300 a 400, de 400 a 500, de 500 a 600, de 700 a 800, de 800 a 900 o de 900 a 1000 mM. 
 
[0045] En formas de realización particulares, una cepa de microalgas adaptada en laboratorio se puede someter a 
cultivo heterótrofo para que crezca en presencia de ion potasio 100 mM con un tiempo de duplicación de 12 o menos 5 
horas, por ejemplo, de aproximadamente 2, 3, 4, 5 , 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 horas, por ejemplo, de alrededor de 4-5 
horas, mientras que la cepa original no adaptada de la microalga adaptada o la microalga natural de esa especie es 
incapaz de crecer o tiene un tiempo de duplicación mayor o igual a 12 horas en presencia de ion potasio 100 mM. 
Por ejemplo, en determinadas formas de realización, el tiempo de duplicación de la cepa adaptada está entre 2 y 12 
horas en presencia de ion potasio 100 mM. En diversas formas de realización, la cepa adaptada en laboratorio es 10 
capaz de crecer en presencia de iones de potasio y/o sodio 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o 1000 mM. La 
cepa adaptada en laboratorio es capaz, en algunas formas de realización, de producir un 10-90 % de triglicéridos por 
peso en seco de las células. 
 
[0046] Es importante destacar que, como lo demuestran los ejemplos que aparecerán a continuación con respecto a 15 
las sales de potasio y sodio, los métodos para adaptar las cepas de microalgas a concentraciones de sal elevadas 
se pueden poner en práctica con una sal, como el potasio, un inhibidor del crecimiento común que se encuentra en 
materias primas de azúcar como el jugo de caña de azúcar, para generar una cepa adaptada que muestre 
características mejoradas de crecimiento y/o producción de triglicéridos en presencia de concentraciones elevadas 
de otras sales, incluyendo, entre otras, sales de sodio, de calcio o de magnesio. 20 
 
Tolerancia a fuentes de carbono alternativas 
 
[0047] En determinadas formas de realización, una cepa de microalgas adaptada en laboratorio es capaz de 
someterse a cultivo heterótrofo para que crezca en un medio de cultivo que comprende jugo de caña de azúcar, jugo 25 
de remolacha o jugo de sorgo, en el que el jugo de caña de azúcar, jugo de remolacha o jugo de sorgo comprende 
ion potasio y/o sodio, y en el que el medio de cultivo comprende al menos 100 mM de ion potasio e ion sodio 
combinados en total. La cepa adaptada tiene un tiempo de duplicación de 12 horas o menos, por ejemplo, unas 2, 3, 
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 horas, por ejemplo, alrededor de 4-5 horas, en estas condiciones, mientras que la cepa 
original no adaptada de las microalgas adaptadas o las microalgas naturales de esa especie es incapaz de crecer o 30 
tiene un tiempo de duplicación mayor o igual a 12 horas en presencia de ion potasio 100 mM Por ejemplo, en 
determinadas formas de realización, el tiempo de duplicación de la cepa adaptada está entre 2 y 12 horas, por 
ejemplo, menos de 8 horas, en presencia de ion potasio 100 mM. En diversas formas de realización, la cepa 
adaptada en el laboratorio es capaz de crecer en presencia de iones de potasio y/o sodio 250, 350, 450, 550, 600, 
700, 800, 900 o 1000 mM. El jugo de caña de azúcar, jugo de remolacha o jugo de sorgo puede ser desionizado, 35 
parcialmente desionizado o no desionizado. En diversas formas de realización, el jugo de caña de azúcar, jugo de 
remolacha o jugo de sorgo está desionizado a una cantidad de aproximadamente 300 mM de iones de sodio y 
potasio combinados en total. La cepa adaptada en laboratorio es capaz, en algunas formas de realización, de 
producir 10-90 % de triglicéridos por peso en seco de las células. 
 40 
Eficiencia mejorada en la producción de triglicéridos 
 
[0048] En una forma de realización de la invención, se proporciona una cepa de microalga adaptada en laboratorio 
de una especie adaptada en condiciones de azúcar limitante para que tenga un mayor rendimiento, por ejemplo, en 
al menos un 3 %, de triglicéridos en comparación con una cepa original en las mismas condiciones de cultivo. En 45 
varias formas de realización de la descripción, esta cepa adaptada en laboratorio tiene un tiempo de duplicación de 
entre 2 horas y 24 horas en condiciones de cultivo convencionales (es decir, donde el azúcar no es limitante). La 
cepa adaptada en laboratorio es capaz, en algunas formas de realización, de producir un 10-90 % de triglicéridos por 
peso en seco de las células. 
 50 
Contenido de aceite mejorado 
 
[0049] Otro aspecto de la invención incluye una cepa de microalgas mejorada que tiene un contenido de aceite 
mejorado, en comparación con una cepa de microalgas original. En algunas formas de realización, la cepa de 
microalgas mejorada es una cepa adaptada en el laboratorio producida aislando un mutante de la cepa original de 55 
microalgas que se ha expuesto a un inhibidor de un transportador de monosacáridos, como se ha descrito 
anteriormente. En formas de realización particulares, la cepa de microalgas mejorada se produce aislando un 
mutante de la cepa original de microalgas que se ha expuesto a 2-desoxiglucosa. En diversas formas de realización, 
la cepa de microalgas mejorada tiene al menos una mejora del 5 % en el contenido de aceite, por ejemplo, al menos 
una mejora en el contenido de aceite del 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 % o más, por 60 
ejemplo, hasta 16 %, 17 %, 18 %, 19 % , 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 % o 25 %, en comparación con la cepa de 
microalgas original. La cepa de microalgas mejorada también puede tener un porcentaje de mejora en el contenido 
de aceite que se encuentre dentro de cualquier rango delimitado por cualquiera de estos valores, por ejemplo 5 % - 
25 %, 10 % - 20 % y 11 % - 15 %. el contenido de aceite se puede medir usando cualquier método convencional; 
generalmente se utiliza el mismo método para medir el contenido de aceite de la cepa mejorada frente a la original. 65 
 
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 11 
Niveles de C18:0 y/o C18:1 mejorados 
 
[0050] Otro aspecto de la invención incluye una cepa de microalgas mejorada que es capaz de producir aceite con 
un porcentaje mayor de C18:0 y/o C18:1 que una cepa de microalgas original. En algunas formas de realización de 
la invención, la cepa de microalgas mejorada es una cepa adaptada en laboratorio producida mediante el 5 
aislamiento de un mutante de la cepa de microalgas original que se ha expuesto a un inhibidor de una β-cetoacil-
ACP sintasa (KAS) y/o de una reductasa de proteína transportadora de enoil:acilo (ACP). En algunas formas de 
realización de la invención, el inhibidor incluye cerulenina. En algunas formas de realización de la invención, el 
inhibidor incluye triclosán. En diversas formas de realización, la cepa de microalgas mejorada tiene un aumento de al 
menos un 10 % en el porcentaje de C18:0 y/o C18:1, en comparación con la cepa original. Por ejemplo, aumento de 10 
al menos el 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 %, 16 %, 17 %, 18 %, 19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 %, 25 %, 26 %, 
27 %, 28 %, 29 %, 30 % o más, por ejemplo, de hasta el 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 % o 60 % en el porcentaje de 
C18:0 y/o C18:1. Lacepa de microalgas mejorada también puede tener un aumento porcentual en los niveles de 
C18:0 y/o C18:1 dentro de cualquier rango delimitado por cualquiera de estos valores, por ejemplo, 10 % - 60 %, 
15 % - 50 %, y 20 % -30 %. Los niveles de C18:0 y C18:1 se pueden medir usando cualquier método convencional; 15 
generalmente se utiliza el mismo método para medir el contenido de aceite de la cepa mejorada frente a la original. 
El "aumento en el porcentaje de C18:0 y/o C18:1" puede ser un aumento en el porcentaje de C18:0 solo o un 
aumento en el porcentaje de C18:1 solo o un aumento en los niveles combinados de C18:0 y C18 :1. 
 
[0051] En algunas formas de realización, la cepa de microalgas mejorada es capaz de producir ácidos grasos que 20 
incluyen al menos un 70 % de C18:0 y/o C18:1, por ejemplo, al menos un 73 %, 75 %, 78 %, 80 %, 83 %, 85 %, 
86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 % o más, por ejemplo, hasta un 93 % o 95 % C18:0 y/o C18:1. La cepa de microalgas 
mejorada también puede tener un porcentaje de C18:0 y/o C18:1 que se encuentre dentro de cualquier rango 
delimitado por cualquiera de estos valores, por ejemplo, 70 % - 95 %, 75 % - 90 % y 80 % - 85 %. Como se ha 
indicado anteriormente, estos porcentajes se pueden calcular en función de C18:0 solo, C18:1 solo o los niveles 25 
combinados de C18:0 y C18:1. 
 
[0052] En algunas formas de realización, el contenido de aceite de la cepa de microalgas mejorada es de al menos 
el 98 % de la cepa de microalgas original, por ejemplo, al menos el 99 % o equivalente a la cepa de microalgas 
original. En algunas formas de realización, el contenido de aceite es al menos un 5 % mayor, por ejemplo, al menos 30 
un 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, 10 %, 11 %, 12 %, 13 %, 14 %, 15 % o mayor, por ejemplo, hasta un 16 %, 17 %, 18 %, 
19 %, 20 %, 21 %, 22 %, 23 %, 24 % o un 25 % mayor que la cepa de microalgas original. La cepa de microalgas 
mejorada también puede tener un aumento porcentual en el contenido de aceite que se encuentre dentro de 
cualquier rango delimitado por cualquiera de estos valores, por ejemplo, 5 % - 25 %, 10 % - 20 % y 11 % - 15 %. 
 35 
Consideraciones generales para mejorar cepas de microalgas 
 
[0053] En algunas formas de realización, cualquiera de las cepas de microalgas mejoradas mencionadas 
anteriormente es de una especie que no es una especie marina o halófila. En determinadas formas de realización, la 
cepa de microalgas mejorada es capaz de producir del 10 al 90 % de triglicéridos en peso en seco de las células. En 40 
formas de realización particulares, la cepa de microalgas mejorada es de una especie del género Prototheca o 
Chlorella. En diversas formas de realización, la especie es Prototheca moriformis o Chlorella protothecoides. En 
diversas formas de realización, la cepa de microalgas mejorada es capaz de producir al menos un 50 % de 
triglicéridos por peso en seco de las células. 
 45 
Ingeniería genética de cepas de micoalgas originales o mejoradas 
 
[0054] En diversas formas de realización de todos los métodos de la invención, la cepa progenitora o adaptada se 
manipula genéticamente para que exprese uno o más genes exógenos, ya sea antes o después del proceso de 
adaptación. Por ejemplo, la cepa progenitora o adaptada puede manipularse genéticamente para que produzca una 50 
distribución alterada de longitudes de cadena de ácidos grasos y/o saturación de ácidos grasos. En formas de 
realización particulares, la cepa de microalgas empleada en los métodos de la invención se habrá modificado 
genéticamente para que exprese un gen de sacarasa exógeno de manera que la cepa produzca suficiente sacarasa 
para permitirle metabolizar sacarosa de manera eficiente. En muchas de estas formas de realización, el gen de 
sacarasa codificará una sacarasa que se secreta en el medio de cultivo. Como alternativa o además, la cepa de 55 
microalgas puede manipularse genéticamente para que exprese una acil-ACP tioesterasa exógena, una desaturasa 
exógena o una β-cetoacil-ACP sintasa (KAS) exógena o para suprimir una tioesterasa o desaturasa endógena. 
 
[0055] En formas de realización ilustrativas de las cepas de microalgas mejoradas descritas anteriormente y 
métodos relacionados, la microalga se modifica genéticamente para que produzca una longitud de cadena de ácido 60 
graso alterada y/o una distribución de la saturación mediante la supresión de una tioesterasa endógena y la 
introducción de un gen que codifica una β-cetoacil-ACP sintasa (KAS). Por ejemplo, se puede introducir un KASII 
exógeno. 
 
65 
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 12 
Métodos para producir productos a partir de cepas de microalgas mejoradas 
 
[0056] En otro aspecto, la invención proporciona métodos para producir productos útiles a partir de cepas de 
microalgas adaptadas. En diversas formas de realización, estos métodos se ponen en práctica para producir 
triglicéridos que, a su vez, se utilizan como alimento, materia prima química, ingrediente cosmético o combustible. 5 
En varias formas de realización, estos métodos implican cultivar la cepa adaptada en una fuente de carbono (por 
ejemplo, un azúcar) en la que una cepa no adaptada crecería más lentamente o produciría menos producto deseado 
que la cepa adaptada. En varias formas de realización, estos métodos implican cultivar la cepa adaptada en un 
medio de cultivo en el que una cepa no adaptada crecería más lentamente que la cepa adaptada. En diversas 
formas de realización, estos métodos implican cultivar la cepa adaptada a una temperatura a la que una cepa no 10 
adaptada crecería más lentamente que la cepa adaptada. En determinadas formas de realización, los métodos 
implican el cultivo de una cepa de microalgas mejorada (por ejemplo, una que tenga un contenido de aceite 
mejorado o niveles de C18:0 y/o C18:1 mejorados). En diversas formas de realización, se combinan dos o más de 
los métodos descritos aquí, es decir, una cepa adaptada que crece más rápidamente en glucosa y en medios de 
cultivo con alto contenido de sal se cultiva con glucosa en un medio de cultivo con alto contenido de sal para 15 
producir triglicéridos. En diversas formas de realización, el producto deseado es biomasa de microalgas, que se 
incorpora, directamente o después del procesamiento, en un producto alimentario. En varias formas de realización, 
el producto deseado es triglicérido de microalgas que se aísla de la biomasa de microalgas y luego se incorpora 
directamente, o después de un procesamiento adicional, en el alimento. En varias formas de realización, el producto 
deseado es triglicérido de microalgas que se aísla de la biomasa de microalgas y luego se procesa para obtener un 20 
combustible, como biodiésel, diésel renovable, combustible para aviones u oleoquímico. 
 
[0057] Por ejemplo, en una forma de realización, la invención proporciona un método para producir un producto de 
microalgas, en el que el método implica el cultivo heterótrofo de una microalga en un medio de cultivo que tiene una 
concentración de sal elevada, en el que la microalga está adaptada para crecer en condiciones de alto contenido de 25 
sal, y recuperar el producto de microalgas. El producto de microalgas puede, por ejemplo, incluir un triglicérido o un 
ácido graso, en cuyo caso el método puede incluir la separación del triglicérido o ácido graso de la biomasa de 
microalgas restante. En varias formas de realización, la microalga es capaz de producir un 20 % y hasta 
aproximadamente un 90 % de triglicéridos por peso en seco de las células, por ejemplo, en el rango de 
aproximadamente 20-30 %, 30-40 %, 40-50 %, 60-70 %, 70-80 %, o 80-90 %. En diversas formas de realización, la 30 
microalga no es de especies marinas o halófilas. Las microalgas adecuadas ilustrativas incluyen cepas de Chlorella 
y cepas de Prototheca, incluyendo, entre otras, cepas de Chlorella protothecoides y cepas de Prototheca moriformis. 
La microalga adaptada puede cultivarse en una condición de sodio o potasio que sea al menos 100, 200, 300, 400 o 
500 mM mayor que la condición típica(por ejemplo, condiciones de salinidad del agua dulce, por ejemplo, agua con 
menos de 500 partes por millón (ppm) de sales disueltas, alrededor de 7 mg/L o menos de iones de sodio y 35 
alrededor de 3 mg/L o menos de iones de potasio) para el crecimiento de la cepa original o natural. En algunas 
formas de realización, el cultivo se alimenta con una materia prima que es un producto derivado vegetal que es 
predominantemente sacarosa, glucosa o fructosa, una celulosa hidrolizada y/o hemicelulosa hidrolizada. La 
concentración de sal elevada en el medio de cultivo de este método puede deberse a la adición al medio de una 
materia prima de azúcar con alto contenido de sal. En formas de realización particulares, el cultivo se alimenta con 40 
una materia prima que tiene una concentración de sal de al menos 100 mM, 150 mM, 200 mM o 250 mM de iones 
de sodio o potasio combinados totales para elevar la concentración de iones de sodio o potasio combinados totales 
del medio de cultivo a más de 50 mM. En algunas formas de realización, el cultivo se alimenta con una materia prima 
de azúcar que se desioniza en menor grado que el que sería necesario sin el uso de la microalga adaptada. Por 
ejemplo, la materia prima de azúcar se puede desionizar a un nivel de 300 mM o 150 mM de iones de sodio y 45 
potasio combinados totales y, en algunas formas de realización, el tiempo de duplicación de la microalga a esta 
concentración de sal es de 5 horas o menos, por ejemplo, de 4, 3 o 2 horas. La microalga adaptada se puede 
producir, como se describe en este documento, mediante propagación en una concentración de sal alta pero 
subletal, cuya propagación se puede llevar a cabo durante al menos 10 generaciones, por ejemplo, al menos 20, 30, 
40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 o más generaciones. En diversas formas de realización, la 50 
concentración elevada pero subletal de sal está entre 100 y 1000 o entre 500 y 900 mM de iones de sodio o potasio 
combinados totales. En diversas formas de realización, la concentración de sal elevada es superior o igual a 100, 
200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 o 1000 mM de iones de sodio o potasio combinados totales. En algunas 
formas de realización, la microalga adaptada se produce por mutagenización de la microalga antes de la 
propagación en presencia de una concentración de sal elevada pero subletal. 55 
 
[0058] En otra forma de realización, la invención proporciona un método para producir un producto de microalgas, en 
el que el método implica el cultivo heterótrofo de una microalga en un medio de cultivo, en el que la microalga está 
adaptada para crecer en condiciones de bajo azúcar y recuperar el producto de microalga. En algunas formas de 
realización, la microalga adaptada produce al menos un 20 % de triglicéridos por peso en seco de las células en 60 
condiciones de cultivo convencionales (es decir, donde el azúcar no es limitante), y la adaptación de la microalga da 
como resultado una mayor eficiencia de conversión de azúcar en ácido graso. El producto de microalga puede, por 
ejemplo, incluir un triglicérido o ácido graso, en cuyo caso, el método puede incluir la separación del triglicérido o 
ácido graso de la biomasa de microalgas restante. En varias formas de realización, la microalga es capaz de 
producir un 20 % y hasta aproximadamente un 90 % de triglicéridos por peso en seco de las células, por ejemplo, en 65 
el rango de aproximadamente 20-30 %, 30-40 %, 40-50 %, 60-70 %, 70-80 % u 80-90 % de triglicéridos por peso en 
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 13 
seco de las células. Las microalgas adecuadas ilustrativas incluyen cepas de Chlorella y cepas de Prototheca, 
incluyendo, entre otras, cepas de Chlorella protothecoides y cepas de Prototheca moriformis. La microalga adaptada 
se puede producir, como se describe en este documento, mediante propagación en presencia de la condición de 
bajo contenido de azúcar durante al menos 10 generaciones, por ejemplo, al menos 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 
100, 110, 120, 130, 140, 150 o más generaciones. En algunas formas de realización, la condición de bajo contenido 5 
de azúcar es una concentración de azúcar de menos de aproximadamente 1,0 g/L, por ejemplo, de menos de 
alrededor de 0,8 g/L, 0,5 g/L. 0,2 g/l, 0,1 g/l, 0,08 g/l, 0,05 g/l, 0,02 g/l, 0,01 g/l, tan baja como alrededor de 0,005 g/L. 
En algunas formas de realización, la microalga adaptada se produce por mutagenización de la microalga antes de la 
propagación en presencia de la condición de bajo contenido de azúcar. 
 10 
[0059] Opcionalmente, después de aplicar una presión de selección como se ha descrito anteriormente para obtener 
una cepa con una tasa de crecimiento más rápida con una condición inhibidora, y la ingeniería genética opcional, se 
aíslan múltiples clones de microalgas y se pone a prueba su capacidad para producir un producto deseado, como un 
triglicérido de cierta longitud de cadena o grado de saturación, o su capacidad para producir mayores cantidades del 
producto deseado. A continuación, se selecciona una cepa clonal que tiene tanto una tasa de crecimiento 15 
aumentada como la capacidad de producción deseada y se almacena para su uso futuro. 
 
[0060] En diversas formas de realización, la cepa de microalgas produce triglicéridos que tienen > 25 %, > 30 %, > 
40 %, > 50 %, > 60 %, > 70 %, > 80 %, > 90 % de C12. Alternativamente, o además, la cepa de microalgas produce 
triglicéridos que tienen > 60 %, > 70 %, > 80 %, > 90 % C18:1. Alternativamente o además, la cepa de microalgas 20 
produce triglicéridos que tienen > 20 %, > 30 %, > 40 %, > 50 %, > 60 %, > 70 %, > 80 %, > 90 % C18:0. 
Alternativamente o además, la cepa de microalgas produce triglicéridos que tienen > 30 %, > 40 %, > 50 %, > 60 %, 
> 70 %, > 80 %, > 90 % C12-C14. En formas de realización ilustrativas, la cepa de microalgas produce triglicéridos 
que tienen una de las siguientes características de distribución de ácidos grasos: > 25 % C12, > 60 % C18:1, > 20 % 
C18:0 o > 30 % C12-C14. 25 
 
Perfiles de ácidos grasos de células de microalgas mejoradas 
 
[0061] En algunas formas de realización, la presente invención proporciona una célula de microalgas (por ejemplo, 
una célula tolerante a un alto contenido de sal o una célula que tiene una eficacia mejorada para convertir el azúcar 30 
en triglicéridos) que comprende un aceite de triglicéridos, en el que el perfil de ácidos grasos del aceite de 
triglicéridos se selecciona del grupo consistente en: al menos alrededor del 1 %, al menos alrededor del 2 %, al 
menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 7 %, al menos alrededor del 10 %, o al menos alrededor del 15 % 
C8:0; al menos alrededor del 1 %, al menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 15 %, al menos alrededor del 
20 %, al menos alrededor del 25 %, o al menos alrededor del 30 % de C10:0; al menos alrededor del 1 %, al menos 35 
alrededor del 5 %, al menos alrededor del 10 %, al menos alrededor del 15 %, al menos alrededor del 20 %, al 
menos alrededor del 25 %, al menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos aproximadamente 
el 40 %, al menos aproximadamente el 45 %, al menos aproximadamente el 50 %, al menos aproximadamente el 
55 %, al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 65 %, al menos aproximadamente el 
70 %, al menos aproximadamente el 75 %, o al menos aproximadamente 80 % C12:0; al menos alrededor del 2 %, 40 
al menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 10 %, al menos alrededor del 15 %, al menos alrededor del 
20 %, al menos alrededor del 25 %, al menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos 
aproximadamente el 40 %, al menos aproximadamente el 45 % o al menos aproximadamente el 50 % de C14:0; al 
menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, 
al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 45 
65 %, al menos alrededor del 70 %, almenos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor 
del 85 %, o al menos alrededor del 90 %, C16:0; al menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 10 %, al menos 
alrededor del 15 %, al menos alrededor del 20 %, al menos alrededor del 25 %, al menos alrededor del 30 %, al 
menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, o al menos alrededor del 
50 % C18:0; al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, al menos 50 
alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 %, o al menos alrededor del 90 % 
C18:1; menos del 7 %, menos del 5 %, menos del 3 %, menos del 1 % o alrededor del 0 % C18:2; y al menos 
alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, al menos alrededor del 50 %, al 
menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, 
al menos al menos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 % o al menos 55 
alrededor del 90 % de ácidos grasos saturados. 
 
[0062] En algunas formas de realización, la célula de microalgas comprende aceite de triglicéridos que comprende 
un perfil de ácidos grasos seleccionado del grupo que consiste en: cantidades combinadas totales de C8:0 y C10:0 
de al menos alrededor del 10 %, al menos alrededor del 20 %, al menos alrededor del 30 % %, al menos alrededor 60 
del 40 %, al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 70 %, al menos 
alrededor del 80 %, al menos alrededor del 90 % o alrededor del 100 %; cantidades combinadas totales de C10:0, 
C12:0 y C14:0 de al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 70 %, al 
menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 90 % o alrededor del 100 %; cantidades combinadas totales de 
C16:0, C18:0 y C18:1 de al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 70 %, al menos 65 
aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 % o aproximadamente el 100 %; cantidades 
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 14 
combinadas totales de C18:0, C18:1 y C18:2 de al menos aproximadamente el 60 %, al menos aproximadamente el 
70 %, al menos aproximadamente el 80 %, al menos aproximadamente el 90 % o aproximadamente el 100 %; 
cantidades combinadas totales de C14:0, C16:0, C18:0 y C18:1 de al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor 
del 70 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 90 % o alrededor del 100 %; y cantidades 
combinadas totales de C18:1 y C18:2 de menos del 30 %, menos del 25 %, menos del 20 %, menos del 15 %, 5 
menos del 10 %, menos del 5 %, o alrededor del 0 %, 
 
[0063] En algunas formas de realización, la célula de microalgas comprende aceite de triglicéridos que tiene un perfil 
de ácidos grasos que comprende una proporción de ácidos grasos seleccionados del grupo que consiste en: una 
proporción de C8:0 a C10:0 de al menos aproximadamente 5 a 1, al menos 6 a 1 , al menos 7 a 1, al menos 8 a 1, al 10 
menos 9 a 1, o al menos 10 a 1; una proporción de C10:0 a C12:0 de al menos aproximadamente 6 a 1, al menos 7 
a 1, al menos 8 a 1, al menos 9 a 1 o al menos 10 a 1; una proporción de C12:0 a C14:0 de al menos 
aproximadamente 5 a 1, al menos 6 a 1, al menos 7 a 1, al menos 8 a 1, al menos 9 a 1 o al menos 10 a 1; una 
proporción de C14:0 a C12:0 de al menos 7 a 1, al menos 8 a 1, al menos 9 a 1 o al menos 10 a 1; y una proporción 
de C14:0 a C16:0 de al menos 1 a 2, al menos 1 a 3, al menos 1 a 4, al menos 1 a 5, al menos 1 a 6, al menos 1 a 7, 15 
al menos 1 a 8, al menos 1 a 9, o al menos 1 a 10. 
 
Perfiles de ácidos grasos de composiciones de aceite de triglicéridos de células de microalgas mejoradas 
 
[0064] En algunas formas de realización, la presente invención proporciona una composición de aceite de 20 
triglicéridos de microalgas, en la que el perfil de ácidos grasos del aceite de triglicéridos se selecciona del grupo que 
consiste en: al menos alrededor del 1 %, al menos alrededor del 2 %, al menos alrededor del 5 %, al menos al 
menos alrededor del 7 %, al menos alrededor del 10 % o al menos alrededor del 15 % de C8:0; al menos alrededor 
del 1 %, al menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 15 %, al menos alrededor del 20 %, al menos alrededor 
del 25 %, o al menos alrededor del 30 % de C10:0; al menos alrededor del 1 %, al menos alrededor del 5 %, al 25 
menos alrededor del 10 %, al menos alrededor del 15 %, al menos alrededor del 20 %, al menos alrededor del 25 %, 
al menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 
45 %, al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor 
del 65 %, al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 75 %, o al menos aproximadamente 80 % de C12:0; 
al menos alrededor del 2 %, al menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 10 %, al menos alrededor del 15 %, 30 
al menos alrededor del 20 %, al menos alrededor del 25 %, al menos alrededor del 30 %, al menos alrededor del 
35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 % o al menos alrededor del 50 % de C14:0; al menos 
alrededor del 30 %, al menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, al 
menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, 
al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 35 
85 %, o al menos alrededor del 90 % de C16:0; al menos alrededor del 5 %, al menos alrededor del 10 %, al menos 
alrededor del 15 %, al menos alrededor del 20 %, al menos alrededor del 25 %, al menos alrededor del 30 %, al 
menos alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, o al menos alrededor del 
50 % de C18:0; al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, al menos 
alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 %, o al menos alrededor del 90 % de 40 
C18:1; menos del 7 %, menos del 5 %, menos del 3 %, menos del 1 % o alrededor del 0 % de C18:2; y al menos 
alrededor del 35 %, al menos alrededor del 40 %, al menos alrededor del 45 %, al menos alrededor del 50 %, al 
menos alrededor del 55 %, al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 65 %, al menos alrededor del 70 %, 
al menos al menos alrededor del 75 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 85 % o al menos 
alrededor del 90 % de ácidos grasos saturados. 45 
 
[0065] En algunas formas de realización, la composición de aceite de triglicéridos de microalgas comprende aceite 
de triglicéridos que comprende un perfil de ácidos grasos en el que: la cantidad total combinada de C10:0, C12:0 y 
C14:0 es al menos alrededor del 50 %, al menos alrededor del 60 %, al menos al menos alrededor del 70 %, al 
menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 90 % o alrededor del 100 %; la cantidad total combinada de 50 
C16:0, C18:0 y C18:1 es al menos alrededor del 60 %, al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 80 %, al 
menos alrededor del 90 % o alrededor del 100 %; la cantidad total combinada de C18:0, C18:1 y C18:2 es al menos 
alrededor del 60 %, al menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 90 % o 
alrededor del 100 %; la cantidad total combinada de C14:0, C16:0, C18:0 y C18:1 es al menos alrededor del 60 %, al 
menos alrededor del 70 %, al menos alrededor del 80 %, al menos alrededor del 90 % o alrededor del 100 %; las 55 
cantidades combinadas totales de C8:0 y C10:0 son menos del 50 %, menos del 45 %, menos del 40 %, menos del 
35 %, menos del 30 %, menos del 25 %, menos de alrededor del 20 %, menos de alrededor del 15 %, menos de 
alrededor del 10 %, menos de alrededor del 5 % o alrededor del 0 %. 
 
[0066] En algunas formas de realización, la composición de aceite de triglicéridos de microalgas