Analise do liquido seminal - aula 01 novo com comentarios

Prévia do material em texto

CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
Analise do liquido seminal
O objetivo dessa análise é avaliar o 
p o t e n c i a l d o i n d i v i d u o , o n d e o 
espermograma possibilita a obtenção de 
dados relativos à quantidade e qualidade 
dos espermatozoides. 
Mesmo um espermograma normal não é 
garantia de fertilidade para o homem, pois 
ex i s t e m c e r t a s c a ra c t e r í s t i c a s d o s 
espermatozoides não-identificáveis por meio 
desse exame. 
- Avaliação de doenças testiculares e 
penianas sobre a espermatogênese; 
- Comprovar a eficácia da vasectomia; 
- Detectar sêmen no corpo ou na roupa 
de vítima suspeita de estupro (análise 
forense). 
Porém se esse homem já fez vasectomia 
veremos uma enzima no material chamada 
de “fosfatase ácida” que é liberada e possui 
uma concentração 1.000x maior no sêmen do 
que em qualquer outro líquido corporal. 
✦ Introdução: 
Por razões de padronização e para que 
resultados obtidos em locais diferentes 
sejam comparáveis e confiáveis, os testes 
que envolvem sêmen devem ser realizados 
de acordo com as diretrizes estabelecidas 
pela Organização Mundial de Saúde (OMS) 
de 2010. 
Fisiologia 
✦ Formação do Sêmen: 
 O sêmen é composto por 4 frações 
provenientes das seguintes regiões: 
- Testículos e Epidídimo; 
- Vesículas seminais; 
- Próstata; 
- Glândulas bulbouretrais ou de Cowper. 
As frações diferem entre si em termos de 
composição e a mistura das quatro frações 
durante a ejaculação é necessária para a 
produção de sêmen normal. 
✦ Testículos e epidídimos: 
Os testículos têm duas funções: 
- Produção de espermatozoides (túbulos 
seminíferos): espermatogênese; 
- Produção do hormônio sexual masculino 
(testosterona). 
C é l u l a s d e L e y d i g → p r o d u z e m 
testosterona. 
Células de Sertoli → fazem nutrição das 
células germinativas (espermatogonia) e 
(espermatides). 
1
Análise de sêmen ou espermograma 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
O epidídimo é um pequeno ducto que 
coleta e armazena os espermatozoides 
produzidos pelo testículo. 
Durante o armazenamento no epidídimo 
os espermatozoides amadurecem e 
desenvolvem o flagelo ou cauda. 
✦ Vesícula Seminal: 
N o m o m e n t o d a e j a c u l a ç ã o o s 
espermatozoides são impulsionados do 
epidídimo através do canal deferente até a o 
ducto ejaculatório que recebe tanto os 
espermatozoides do canal deferente quanto 
o fluido das vesículas seminais. 
 
✦ Glândula Prostática: 
A Glândula Prostática localizada logo 
abaixo da bexiga, envolve a uretra e auxilia 
na propulsão dos espermatozoides através 
da uretra por contrações durante a 
ejaculação. 
Próstata: produz cerca 
de 20 a 30% do volume 
do sêmen; composto de 
u m l í q u i d o le i t o s o , 
leve m e n t e a lc a l i n o 
(menos alcalino que o 
fluido seminal); 
 
 Altas concentrações de fosfatase ácida, 
ácido cítrico, zinco e enzimas proteolíticas 
(pepsinogênio, plasminogênioe o antígeno 
prostático específico – PSA) responsáveis 
pela liquefação do sêmen após ejaculação. 
✦ Glandulas Bulbouretriais ou de 
Cowper: 
As Glândulas Bulbouretrais ou de Cowper, 
localizadas abaixo da próstata, contribuem 
com 5% do volume do líquido sob a forma de 
um muco espesso e alcalino que ajuda a 
neutralizar a acidez das secreções da 
próstata e da vagina, além de ter uma 
função lubrificante. 
- É importante que o sêmen seja alcalino 
para neutralizar a acidez vaginal, sem 
e s s a n e u t ra l i za ç ã o , a m o t i l i d a d e 
espermática será reduzida. 
 
O Líquido prostático é levemente alcalino, 
e líquido vesicular é altamente alcalino, a 
mistura dos dois possuem pH de 7,2 a 8,0. 
Se a alcalinidade for mais que 8 pode 
haver alguma alteração na próstata, já se 
houver uma alteração no pH menor que 7 é 
um problema na vesícula. 
- No líquido vesicular, a coagulação não 
ocorre devido à ausência de enzimas 
coagulantes. 
2
- Células de Leydig produzem a 
testosterona, um gatilho para as células 
j o v e n s s e d i f e r e n c i a r e m e m 
espermatozóides. 
- Células de Seroti estão dentro dos 
t u b o s , p a ra f a ze r n u t r i ç ã o d a s 
germinat ivas (espermatogonia ) e 
e s p e r m a t i d e s ( q u a s e u m 
espermatozoide).
1
1. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:06:43
- No líquido vesicular, a 
coagulação não ocorre devido à 
ausência de enzimas 
coagulantes": O líquido vesicular é 
uma parte do sêmen produzida 
pelas vesículas seminais. Quando 
menciona que a coagulação não 
ocorre, significa que esse líquido 
não se torna gelatinoso após a 
ejaculação, como parte do 
processo de coagulação do 
sêmen. Isso ocorre porque não há 
presença das enzimas necessárias 
para essa coagulação.
- Enquanto na vesícula há 
produção de frutose": As vesículas 
seminais são glândulas 
responsáveis pela produção de 
parte do líquido seminal. Elas 
produzem frutose, que é um tipo 
de açúcar, e isso é importante 
para fornecer energia aos 
espermatozoides.
- O que resulta em uma redução 
na motilidade dos 
espermatozoides": Aqui, está-se 
indicando que a presença de 
frutose na vesícula seminal pode 
ter um efeito negativo na 
motilidade dos espermatozoides, 
ou seja, pode diminuir a 
capacidade de movimento deles.
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
O sêmen possui alguns conteúdos que o 
formam e são eles: 
 
É n e c e s s á r i o re a l i z a r u m j e j u m 
(abstinências) de no mínimo 2 e no máximo 7 
dias, pois é preciso visualizar um maior 
n ú m e r o d e c é l u l a s m a d u r a s 
(espermatozoide) e não germinativas e 
imaturas (espermatogonia e espermatides). 
São separados por tipos de análises: 
Só inicia a análise após a coagulação ser 
toda desfeita. 
- 1˚ análise: TDC → tempo de duração do 
coágulo; 
É crucial realizar uma coleta cuidadosa 
para garantir uma avaliação precisa da 
fertilidade masculina. 
 
- Um ponto importante a passar para o 
paciente é que não pode desprezar nada, 
é necessário estar tudo no frasquinho! 
Para isso , o paciente deve receber 
orientações detalhadas: 
✦ Orientações Prévias: 
- Prazo de abstinência: de 2 a 7 dias (OMS 
-2010) ou de 3 a 5 dias (outros autores). 
- Período de abstinência maior: maior 
volume, mais espermatozoides mortos e 
baixa motilidade. 
- Período de abstinência menor: formas 
imaturas (espermátides) e diminuição na 
c o n c e n t r a ç ã o e v o l u m e d o s 
espermatozóides. 
Cuidados: O paciente deverá urinar antes da 
coleta do esperma, e após proceder 
assepsia (lavar as mãos e o pênis com 
sabonete neutro e enxugá-los com toalha 
limpa ou papel toalha). 
- Aproximadamente 30% dos pedidos 
médicos tem cultura associada. 
Método de coleta: por automasturbação. 
- N ã o s e r e c o m e n d a o u s o d e 
preservativos na coleta de amostra para 
exames de infertilidade, pois podem 
conter substâncias espermaticidas e 
lubrificantes. 
- O coito interrompido não é aceitável 
para a coleta de material porque pode 
ser perdida a primeira porção (que 
contêm a maior concentração de 
espermatozoides), além da contaminação 
vaginal. 
3
Composição do Sêmen 
Análise do Sêmen 
Coleta 
3
4
2
2. Vitória Isabel 
12 de março de 2024 às 10:57:30
O período de abstinência produz 
melhores resultados na 
concentração dos 
espermatozóides, na sua 
motilidade, além de proporcionar 
melhor volume espermático.
3. Vitória Isabel 
12 de março de 2024 às 10:56:30
O coágulo do sêmen é uma 
substância gelatinosa que se 
forma após a ejaculação. É 
composto principalmente por 
proteínas e mucopolissacarídeos, 
e sua formação é facilitada pela 
presença da enzima chamada 
transglutaminase, que atua na 
coagulação do sêmen. Essa 
coagulação inicial ajuda a manter 
o sêmen dentro do trato 
reprodutivo feminino após a 
ejaculação, fornecendo um meio 
favorável para os espermatozoides 
alcançarem o óvulo. 
Posteriormente, o coágulo se 
liquefaz devido à ação de enzimas 
específicas, permitindo que os 
espermatozoidesse movam mais 
livremente em direção ao óvulo.
4. Vitória Isabel 
12 de março de 2024 às 10:57:08
Se pegarmos parte dessa amostra 
coagulado e fazer uma prova de 
motilidade, ela vai estar reduzida 
pois os espermatozoides vão estar 
aprisionados nas fibras do 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
C o m p a ra ç ã o d o s e f e i t o s d o l á t e x 
(preservativo) sobre os espermatozoides em 
função do tempo: 
 
- Método de avaliação em lâmina-
lamínula com volume 1:1 de esperma e 
solução salina de eosina amarela a 0,5%. 
- Espermatozoide inativos, mesmo que 
separados do ambiente com látex, não 
mais se reativam com solução de Ringer 
Frutose com 0,01% de cloreto de magnésio, 
0,01% de cloreto de cálcio e 10 mM de 
pentoxifilina . 
- Locais de Coleta: de preferência em sala 
reservada do laboratório (a temperatura 
do ambiente e do recipiente não deve ser 
inferior a 20˚C ou superior a 37˚C). 
- Coleta em domicílio: somente por 
solicitação médica, por escrito, ou 
indicada pelo analista, quando os valores 
forem borderline. 
- Prazo para entrega da amostra: (coleta 
fora do laboratório): ideal até 30 min, 
a c e i t áve l a t é 6 0 m i n ( m a n t e r e m 
temperatura ambiente). 
No inverno a amostra deve ser protegida do 
frio, mantendo-a junto ao corpo. 
Deve ser evitada a exposição à luz excessiva. 
 
Quando a avaliação do tempo de duração 
da coagulação (TDC) for necessária, a coleta 
deverá ser feita no laboratório. 
- A análise do sêmen só pode produzir 
um diagnóstico após serem realizados, 
com um entre os testes, dentro de três 
exames consecutivos com um intervalo 
mínimo de 2 semanas entre os testes, 
dentro de um período de 10 a 11 semanas. 
O paciente deve ser atendido antes da 
coleta por um atendente do sexo masculino, 
que explicará como deve ser colhido o 
material, em especial o cuidado para não 
perder nenhuma das frações da amostra. 
  
P e rg u n t a r e a n o t a r o t e m p o d e 
abstinência e qual a finalidade do exame. 
  
Se possível procurar obter dados clínicos 
(infecções, resultados de exames anteriores, 
uso de medicamentos, álcool, tabaco etc.). 
Fornecer o recipiente próprio para a 
coleta (recipientes estéreis de boca larga e 
de preferência de vidro). 
Todas as amostras de sêmen são 
potenciais reservatórios de vírus HIV, 
Hepatite B, Herpes vírus e outros agentes de 
DSTs. 
4
Quadros de febre acima de 38˚C podem 
dar interferência na produção de 
espermatozoide por até 180 dias. 
 
Entrevista 
Manuseio da amostra 
5
5. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:07:50
não são mortos!
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
Precauções devem ser observadas em 
todos os momentos da análise, como jaleco 
de manga longa, luvas etc. 
As amostras são descartadas como 
resíduos de risco biológico. 
 
Para que os espermatozoides fertilizem 
um óvulo, ele precisa de uma série de 
propriedades: 
- formato adequado (oval); 
- movimentos direcionados; 
- reconhecer e aderir ao óvulo; 
- e, posteriormente, penetrar no seu 
interior para fertilizá-lo. 
É fácil entender que o potencial de 
fertilização depende da integração de todas 
estas propriedades, que contribuem para 
sua competência. 
(Valores de referência de acordo com os 
dados da OMS 2010)! 
 
✦ A) Exames macroscópicos: 🔎 ✨ 
1. Tempo de Duração do Coágulo (TDC) 
ou Tempo de Liquefação; 
2. pH; 
3. Viscosidade; 
4. Cor; 
5. Aspecto. 
6. Volume; 
✦ A) Exames microscópicos: 🔬 ✨ 
1. Investigação microscópica inicial e 
graus de motilidade; 
2. Análise microscópica quantitativa; 
3. Morfologia dos espermatozoides; 
4. Morfologia das células germinativas; 
5. Morfologia dos leucócitos. 
A) EXAMES MACROSCÓPICOS 🔎 
Logo após emitido, o esperma coagula e 
volta a se liquefazer de 05 a 30 minutos após 
a coleta (podendo chegar a 60 min. sendo 
também considerado normal); 
- Portanto a anotação do horário da 
coleta é essencial para a avaliação da 
liquefação do sêmen; 
- Se após 1 hora a amostra não tiver se 
liquefeito, enzimas proteolíticas, como 
alfaquimotripsina, podem ser adicionadas 
para que o restante das análises seja 
realizado; 
- As substâncias que promovem a 
coagulação se originam das vesículas 
seminais, e as que liquefazem o coágulo 
são produzidas principalmente na 
próstata (pepsinogênio, plasminogênio e 
antígeno prostático específico (PSA). 
Falha na liquefação pode ser causada por 
deficiência de enzimas prostáticas e deve ser 
relatado. 
✦ Técnica visual: 
Levar a amostra para estufa (37°C) até a 
liquefação, fazer as observações de 3 em 3 
minutos. 
✦ Observação microscópica em 
lâmina-lamínula: 
Logo após a coleta, dois ou mais coágulos 
podem ser “pescados”, separados do 
esperma e colocados sobre lâmina e 
lamínula e levados para observação ao 
microscópio. 
- Fazer as observações de 5 em 5 
minutos. 
- Observar as fibras de coágulo que se 
apresentam organizadas em paliçadas, 
5
Análise do sêmen 
Análise da rotina 
1. Tempo de duração do coágulo (TDc) 
ou tempo de liquefação: 
6
7
8
9
6. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:08:17
Sempre com movimento rápido e 
linear para frente!
7. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:08:30
Para acontecer a fecundação na 
mulher!
8. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:08:50
tem interferência muito grande 
quando colocado em contato com 
oxigênio, por isso realizamos sua 
análise em 2 lugar
9. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:09:07
confecciona uma lamina a fresco, 
uma corada, camara de newbaer e 
fazer um esfregaço para montar 
uma coloração hematológica!
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
com espermatozoides imobilizados dentro 
das fibras. 
- As fibras longas , para le las com 
espermatozoides imobilizados vão se 
rompendo, deixando áreas claras entre as 
fi b ra s o n d e o s e s p e r m a t o z o i d e s 
apresentam motilidade livre. 
Quando a amostra já chega liquefeita, 
colocamos que TDC está normal! 
✦ Estados físicos do esperma: 
- F a s e i n i c i a l l i q u e fe i t a : p e r í o d o 
extremamente curto. 
- Fase de coagulação: função de proteger 
os espermatozoides do pH vaginal e evitar 
a dispersão. 
- Fase de liquefação secundária ou final. 
Valor normal do Tempo de Liquefação ou 
TDC: 05 a 30 min. (podendo chegar a 60 
minutos , sendo considerado normal 
(OMS-2010). 
Primeiras Porções do Sêmen: 
- rica em espermatozoides; 
- líquido prostático e do epidídimo; 
- al ta quant idade de substâncias 
relacionadas com a liquefação; 
- quantidades mínimas de fatores da 
coagulação. 
Porções Finais do Sêmen: 
- ricas em secreções das vesículas 
seminais; 
- produz coágulos firmes; 
- baixas quantidades de substâncias 
líticas. 
Espermatozoides e líquido epididimário: 
não possuem participação na coagulação-
l i q u e f a ç ã o d o s ê m e n ( p a c i e n t e s 
vasectomizados apresentam esse fenômeno 
normalmente). 
Testosterona e Dihidrotestosterona: 
reg u la m a s ec reç ã o d a s g lâ n d u la s 
acessórias e influenciam altamente na 
coagulação do sêmen. 
N a v a s e c t o m i a é re a l i z a d o u m a 
interrupção no canal deferente, e se não for 
muito separadas pode 
sofre anastomose em alguns casos se 
ligando novamente. 
✦ Interpretação: 
Ausência de Coagulação: 
- falta completa ou parcial de fatores da 
coagulação → alterações nas vesículas 
seminais; 
- baixos níveis de testosterona ou 
dihidrotestosterona. 
Ausência de Liquefação Secundária ou 
Final: 
- baixas quantidades de substâncias de 
liquefação (alterações na próstata). 
6
⚠ Condensador baixo, luz moderada e 
objetiva de 20 ou 40X.
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
- Espermolisinas são totalmente inativas 
em pH superior a 8.0, o que pode levar a 
ausência de liquefação secundária. 
É a primeira avaliação feita após a 
liquefação e homogeneização do sêmen. 
- O pH do esperma é o resultado da 
mistura das secreções das vesículas 
seminais (pH mais alcalino) e da secreção 
prostática(pH menos alcalino). 
- A perda de CO2 provoca a elevação do 
pH por ação da anidrase carbônica. 
(É importante manter o frasco tampado). 
Valores normais segundo a OMS (2010): pH ≥ 
7.2 (acima de 8,0 pode ser prejudicial ao 
sêmen); 
- O pH pode ser medido usando tiras 
com escala de 6.5 a 10,0 (Merck – 109543), 
antes de uma hora após a coleta; 
- Realizar a leitura da fita imediatamente 
após o contato com o esperma; também 
podem ser usadas as tiras reagentes 
utilizadas em urinálise. 
Acidificação ou alcalinização: alteram a 
motilidade dos espermatozoides. 
- pH >8.0 : deficiência da glândula 
prostática – ausência de liquefação 
secundária. 
- pH ácido < 6.8: deficiência das vesículas 
seminais – ausência de coagulação. 
- pH alcalino próximo de 9.0: indica ação 
da enzina anidrase-carbônica (frasco com 
amostra aberto). 
Refere-se a consistência do fluído, 
depende da ação resultante dos fatores de 
coagulação e liquefação. 
- Pode ser avaliada introduzindo-se a 
ponta um bastão de vidro na amostra e 
retirando-a rapidamente. 
- Com a repetição rápida do movimento 
pode-se perceber a formação de um 
filamento. 
Amostras com viscosidade normal formam 
filamentos de até 2 cm. 
- O aumento da viscosidade pode ser 
percebido pela maior dificuldade para 
pipetar a amostra ou preparar os 
esfregaços. 
Amostras com viscosidade aumentada são 
difíceis de homogeneizar e apresentam 
baixa reprodutividade nas contagens. 
- Viscosidade aumentada: dificultam a 
movimentação dos espermatozoides 
(astenozoospermia) → deficiência de 
fatores de liquefação → próstata. 
- Viscosidade diminuída: deficiência de 
fatores da coagulação → vesículas 
seminais. 
A viscosidade pode ser relatada como: 
- b a i xa ( n ã o f o r m a u m fi la m e n t o 
contínuo); 
- normal (formação de filamento de aprox. 
2 cm); 
- elevada ( formação de filamentos 
e x t e n s o s o u g r u m o s q u e n ã o s e 
desprendem do bastão). 
7
  *Demais exames são realizados após a 
liquefação e homogeneização da amostra. 
*Homogeneizar com delicadeza para 
preservar a integridade dos gametas e 
células redondas (que necessita de núcleo). 
2. PH 
⚠ Durante exame não deixar frasco aberto. 
3. Viscosidade 
10
10. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:10:12
movimentação mais lenta do 
espermatozóide
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
- Cor normal: branco-opaco, podendo 
apresentar colorações amareladas 
consideradas normais, devido a presença 
d e flav i n a s d o s e s p e r m a t o zo i d e s 
principalmente quando há grandes 
concentrações de gametas (períodos 
longos de abstinência sexual). 
- A cor intensa: casos de icterícia. 
- Coloração róseo até fracamente 
hemorrágico: rupturas de vasos na 
ejaculação; processos inflamatórios da 
próstata e vesículas seminais, pacientes 
com deficiência de fatores da coagulação 
(hemofílicos), estados carenciais de 
vitamina K, freqüentemente apresentam 
episódios de espermorragias. 
Analisado após liquefação por simples 
inspeção à temperatura ambiente. 
Sofre direta influência da liquefação e 
coagulação. 
- Amostra normal: aparência homogênea 
de opalescência acinzentada. 
- Ausência de coagulação: aspecto 
homogêneo do esperma desde a sua 
emissão. 
- Ausência de liquefação secundária: 
aspecto heterogêneo devido a ausência de 
espermolisinas e conseqüente persistência 
da fase de coágulo. 
- Medido em pipeta ou proveta graduada. 
- Representa a somatória das secreções 
das glândulas anexas do trato genital 
masculino, como líquido prostático, 
seminal, fluido epididimário, testicular, 
glândulas bulbouretrais. 
Volume normal: ≥ 1,5 mL (1,4 – 1,7 mL) - (OMS – 
2010). 
Hipoespremia: volume < 1,5 ml: 
- i n s u fi c i ê n c i a o u a u s ê n c i a d e 
abstinência sexual; 
- nsuficiência das vesículas seminais 
(Chlamydia ou Mycoplasma); 
- baixos níveis séricos de testosterona. 
Hiperespermia: volume > 5,0 ml: 
- excesso de tempo de abstinência; 
- infecções próstato-vesiculares, tumores 
malignos ou benignos. 
- Aspermia: ausência de ejaculação: 
- agenesias; 
- ejaculação retrógrada (anormalidades 
na uretra); 
- alterações no controle neurológico da 
ejaculação. 
Para a parte microscópica trabalhamos com 3 
lâminas e a câmara de neubauer! 
A) EXAMES MICROSCÓPICOS 🔬 
Esta análise fornece uma estimativa 
subjetiva da: 
A. concentração; 
B. graus de motilidade; 
C. a g l u t i n a ç ã o ( q u a n d o o s 
espermatozoides se ligam e não se 
desgrudam mais); 
8
4. Cor 
5. Aspecto 
6. Volume 
1. Investigação Microscópica inicial 
11
12
13
14
15
11. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:10:32
importante para ativar a cascata 
de coagulacao
12. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:10:54
anomalidade que acontece entre 
ducto ejaculatorio e uretra
13. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:11:07
problemas neurológicos 
14. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:11:31
já vai para o laudo
15. Vitória Isabel 
13 de março de 2024 às 09:11:43
já vai para o laudo
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
D. morfologia (veremos as alterações 
relacionadas aos espermatozoides); 
E. p re s e n ç a d e o u t ro s e le m e n t o s 
celulares (células epiteliais, leucócitos e 
células da espermatogênese). 
Realizada em temperatura ambiente (20-40 
0C) em amostras bem homogeneizadas. 
A: Concentração: para se ter uma idéia 
da concentração dos espermatozóides/ml 
que possui um esperma e qual a melhor 
diluição para a leitura em câmara de 
Neubauer proceder da seguinte maneira: 
1˚ lâmina: 
Procedimento: 
- 01 gota de sêmen (10 μl) em lâmina e 
lamínula; 
- Focalizar a preparação com objetiva de 
40X (aumento de 400X); 
- Contar todos os espermatozoides 
visualizados no campo; 
As diluições devem ser realizadas de 
acordo com a seguinte tabela: 
B: Graus de Motilidade ou Motilidade de 
Primeira Hora: 
- Realizar até 60 minutos após a coleta; 
- A mot i l idade é ava l iada pe la e 
velocidade e direção; 
- Avaliar em objetivas de pequeno 
aumento (10X ou 40X); 
Segundo os critérios da OMS, devem ser 
examinados à fresco pelo menos 6 campos 
p a ra a v a l i a r 1 0 0 e s p e r m a t o z o i d e s 
consecutivos, obtendo a porcentagem nas 
categorias abaixo: 
- Grau A ou Grau 3: Espermatozoides com 
motilidade rápida e linear; 
- Grau B ou Grau 2: Motilidade linear ou 
não linear lenta → que faz círculos 
grandes; 
- Grau C ou Grau 1: Motilidade não 
progressiva → em círculos pequenos; 
- Grau D ou Grau 0: Imotilidade. 
Classificação atual segundo a OMS (2010) é: 
Valores normais (OMS-2010)! 
- Motilidade total= Graus A+ B + C ≥ 50 %; 
- Motilidade Progressiva =Graus A + B ≥ 
32%. 
Interpretação: 
Astenospermia (motilidade diminuída): 
abaixo de 40 % nas categorias A+B+C 
Astenospermia pode estar relacionada com: 
- aumento da viscosidade (deficiência de 
fatores de liquefação –próstata). 
- nível baixo ou ausente de frutose 
(alterações na vesícula seminal). 
C: Aglutinação: esse termo é utilizado 
p a r a i n d i c a r a l i g a ç ã o e n t r e 
espermatozoides móveis mediada por 
anticorpos anteespermatozoides. 
- Utilizar o condensador de luz do 
microscópio baixo, com luz mediana para 
obter um melhor contraste. 
- A primeira observação deve ser feita em 
aumento de 100X, o que irá detectar os 
9
⚠ Progressiva (A + B); 
⚠ Não progressiva (C); 
⚠ Imóvel (D). 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
grumos de aglutinação com maior 
facilidade. 
- As aglutinações podem ter um padrão 
constante ou misto como: 
- Aglutinação cabeça-cabeça; 
- Aglutinação cauda-cauda; 
- Peça intermediária-peça intermediária; 
- Aglutinação cauda-cabeça. 
Aglutinação ≠ Agregação 
- A g r e g a ç ã o : c o r r e s p o n d e a 
espermatozoide imóveis unidos entre si, ou 
a espermatozoides móveis agregados com 
células epiteliais, debris ou filamentos de 
muco. 
- Aglutinação:indica espermatozoides 
i m ó v e i s u n i d o s e n t r e s i o u 
espermatozóides móveis agregados há 
célulasepiteliais ou filamentos de muco. 
- Normal é ter ausência de aglutinação e 
agregação. 
Aglutinação Espermática: 
 
 
As aglutinações devem ser anotadas nos 
resultados especificando sua intensidade em 
cruzes: 1 (+) a 4 (+) ou ausente. 
D: Morfologia: dá para ter-se uma ideia 
da morfologia das células presentes no 
líquido seminal a fresco, que deve ser 
confirmada no esfregaço corado. 
E: Presença de células redondas: pode-se 
ter uma idéia da presença destas células, 
que também devem ser confirmadas no 
esfregaço corado. 
- espermatogônia; 
- espermatócito primário; 
- espermatócito secundário; 
- espermátide; 
- leucócitos; 
*é uma prova que é realiza na 1˚ hora. 
F: presença de outros tipos celulares: 
- cé lu las prostát icas co lunares e 
superficiais; 
- células superficiais do aparelho 
genitourinário. 
R e s u m i n d o , n e s t a lâ m i n a ava l i a - s e 
subjetivamente: 
- motilidade de Primeira Hora (Grau A, B, 
C e D); 
10
Análise do Sêmen 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
- Indica a diluição certa a ser realizada 
p a ra a c o n t a g e m d o n ú m e ro d e 
espermatozoides na Câmara de Neubauer; 
- observação de estruturas que sugerem 
a p r e s e n ç a d e a u t o - a n t i c o r p o s 
(aglutinações); 
- porcentagem de espermatozóides vivos 
e mortos (confirmar posteriormente pela 
eosina-nigrosina); 
- a v a l i a a m o r f o l o g i a d o s 
espermatozóides adultos (confirmar 
posteriormente pela eosina-nigrosina ou 
Leishmann). 
✦ 2.1 Avaliação da vitalidade: 
A vitalidade é um termo que se refere ao 
número de formas vivas e mortas, expresso 
em porcentagem (%), cuja análise é feita logo 
após a liquefação do ejaculado (se demorar 
muito tempo os espermatozoides morrem e a 
proporção de espermatozoides mortos será 
alta); 
Utiliza-se o método de coloração com os 
corantes supravitais como Eosina-Nigrosina 
ou somente Eosina a 0,5%. 
2˚ lâmina: 
Para montagem do tubo utiliza-se 100µl de 
sêmen + 100µl de eosina + 200µl de nigrosina, 
homogeiniza e prepara a lâmina. 
Coloração com Eosina-Nigrosina: 
- Eosina: penetra em membranas mortas, 
corando de vermelho os espermatozoides 
mortos. 
- Nigrosina hidrossolúvel: corante de 
fundo, os espermatozoides vivos ficam 
brancos (incolores). 
- C o n t a r 1 0 0 e s p e r m a t o z o i d e s , 
discriminando os espermatozoides mortos 
(corados de vermelho e imóveis) e os 
espermatozoides vivos, não corados 
(brancos), móveis e imóveis. 
Valores Normais (OMS – 2010): 
- ≥ 58 % de espermatozoides vivos. 
- Necrospermia : acima de 42% de 
espermatozoides mortos (deficiência de 
frutose). 
Neste esfregaço corado por eosina-
nigrosina é possível fazer a morfologia dos 
espermatozóides vivos. Porém a morfologia é 
real izada com maior frequência em 
preparações coradas com corantes 
hematológicos. 
                    
Câmara de Neubauer: 
✦ 2.2 Contagem de espermatozoides 
(câmara de Neubauer: 
Utilizar o fator de diluição obtido na 
Investigação Microscópica Inicial visto nessa 
tabelinha: 
 
11
2. Análise microscópica quantitativa 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
 
São contados apenas espermatozoides 
maduros com cauda. 
- Carregar a Câmera de Neubauer dos 
dois lados esperar 5 minutos para a 
sedimentação dos espermatozóides e 
proceder a contagem; 
- Fazer a média das duas contagens e ver 
a diferença entre as duas (ler nos dois 
retículos da câmara) se essa diferença for 
menor que 20% entre uma e outra as duas 
contagens são aceitáveis; 
- O resultado para o laudo é a média 
aritmética simples entre as contagens; 
- Se a diferença nas contagens entre as 
diluições for maior que 20% , fazer nova 
diluição e contar novamente. 
Cálculo com a Câmara de Neubauer: 
- N° de espermatozóides contados 
(milhões/ml) : espermatozóides contados 
nos quadrantes (A+B+C+D+E) x 5 x 10.000 x 
inverso da diluição (se for exemplo: 1:20 
será 20 o inverso da diluição). 
Valor de Referência: 
- ≥ 1 5 . 0 0 0 . 0 0 0 ( m i l h õ e s ) d e 
espermatozoides/ml (OMS-2010). 
Líquido Diluidor: 
- Bicarbonato de sódio...................5,0 g; 
- Formalina (formol 10%)...............1,0 ml; 
- Água destilada.............................100ml. 
Obs.: Utilizamos mais o formol que é 
importante para reduzir a motilidade dos 
espermatozoides para podermos contá-los. 
Classificação de acordo com o número de 
espermatozoides contados: 
- N o r m o z o o s p e r m i a : n ú m e r o d e 
espermatozoides normal. 
- O l i g o z o o s p e r m i a : n ú m e r o d e 
espermatozóides abaixo do valor normal. 
- Oligozoospermia permanente: n. de 
espermatozoides nunca atinge os níveis 
mínimos normais. Dentre as causas pode-
se inc lu i r doenças congêni tas ou 
adquiridas do hipotálamo, hipófise, etc. 
- Oligozoospermia periódica: geralmente 
s ã o d e s c o b e r t a s a t r a v é s d e 
espermogramas seriados (intervalos de 2 
semanas por um período de 3 meses). 
Aparecem em casos de varicocele, 
infecção do trato genital, alterações 
h o r m o n a i s o u a b s t i n ê n c i a s ex u a l 
insuficiente. 
- Azoospermia: quando há ausência de 
espermatozóides no sêmen. 
12
*se eu contar os 25 quadradinhos não é 
necessário dividir por 5. 
*se a amostra estiver homogênea e eu 
contar os 5 quadradinhos é necessário 
dividir por 5. 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
Os fatores que produzem azoospermia 
s ã o o s m e s m o q u e p r o d u z e m 
oligozoospermia, além de agenesias de 
células germinativas, agenesia do epidídimo, 
agenesia das vesículas seminais, como 
também ausência das células de Sertoli. 
- Na vasectomia é esperado azoospermia 
(ausência de espermatozoides). 
✦ 2.3 Contagem global de leucócitos: 
É realizada na Câmara de Neubauer 
j u n t a m e n t e c o m a c o n t a g e m d o s 
espermatozóides maduros. 
Neste exame é difícil diferenciar leucócitos 
d e c é l u l a s g e r m i n a t i v a s i m a t u ra s 
( e s p e r m a t i d e , e s p e r m a t o g o n i a , 
espermatócito. . ) que não apresentam 
caudas. 
A diferenciação é possível pela coloração 
de Leishmann. Utilizamos portanto o 
seguinte subterfúgio: 
  
1) Contam-se todas as células redondas 
encontradas nos quatro quadrantes laterais 
da câmara de Neubauer. 
2) O número encontrado multiplicar por: 
50 (diluição 1:20) ou por 100 (diluição 1:40). 
3) O resultado é considerado número total 
de células redondas/ml. 
VALOR DE REFERÊNCIA: 
- < 5 X106 células redondas/ml. 
4) No esfregaço de sêmen corado pelo 
Leishmann, contar o total de 100 células, 
d a n d o a p o rc e n t a g e m d e c é l u l a s 
germinativas e o porcentual de leucócitos. 
5) Calcular através da regra de três a 
quantidade de leucócitos por mm3 da 
seguinte maneira: 
  Quando X for maior que 1X106/ml deve-se 
fazer a contagem diferencial de leucócitos 
(Leishmann). 
Valor normal: 
- < 1X106/ml. 
- Leucospermia (acima de 1 .000.000 
leucócitos/ml) pode ser encontrada nos 
c a s o s d e P R O STATO V E S I C U L I T E S 
(predomínio de neutrófilos). 
✦ 2.3 Contagem global de hemácias: 
Quando presentes devem ser contadas na 
Câmara de Neubauer juntamente com a 
contagem de espermatozoides. 
1 ) Co n t a m - s e t o d a s a s h e m á c i a s 
encontradas nos quatro quadrantes laterais 
da câmara de Neubauer.; 
2) O número encontrado multiplicar por 
2,6 (diluição 1:5); 20 (diluição 1:10); 50 (diluição 
1:20) ou por 100 (diluição 1:40); 
3) O resultado é dado pelo número total 
de hemácias/ml. 
Valor Normal: 
- <1X106/ml; 
- Eritrospermia: > 1X106/ml sem alteração 
da cor do sêmen. 
- E s p e r m o r ra g i a : s ê m e n c o m c o r 
hemorrágica. 
A presença de hemácias em quantidades 
anormais pode significar um processo 
infeccioso, neoplasias ou sinal precoce de 
hipertensão arterial sistêmica. 
A OMS recomenda o uso dos critérios de 
morfologia estrita descrita por Kruger (1986), 
esses critérios foram correlacionados com à 
capacidade do espermatozóide fertilizar o 
13
3. Morfologia dosespermatozóides 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
óvulo em programas de reprodução 
assistida. 
3˚ lâmina: 
- Co m o s ê m e n c o n f ec c i o n a r u m 
esfregaço fino como para sangue. 
- Secar em temperatura ambiente e corar 
com a coloração de Leishmann ou 
MayGrumWald-Giensa, Papanicolau e 
Panotico (5 segundos no 1 corante + 5s no 
segundo corante + 10 segundos no ultimo 
corante de forma lenta, após isso lavar. 
 
  Contar 200 espermatozóides maduros, 
classificando-os conforme as formas 
encontradas (objetiva de imersão) e vai ser 
dada em porcentagem. 
- Os espermatozoides vivos vão corar a 
cabecinha e os mortos não coram! 
Somente espermatozóides com cauda são 
contados. 
- Cé l u la s i m a t u ra s ( e s p e r m á t i d e , 
espermatócito) não são contadas. 
- Cabeças isoladas não são contadas. 
- O resultado é dado em porcentagem 
dos tipos encontrados. 
- Valor Normal: ≥ 4% de formas normais. 
- Teratospermia: ≤ 4% de formas normais 
(alterações na cabeça, peça intermediária 
e cauda). 
✦ Morfologia descrita por Kruger (1986) 
Espermatozoide Normal: 
- A cabeça é oval de contorno regular, o 
acrossômo (uma parte que possui enzimas 
titicas que quando em contato com o ovo 
quebram a quebra da membrana entrando 
no óvulo) que de 40 a 70% da superfície da 
cabeça). 
- O comprimento da cabeça é de 3 a 5 μm 
e do colo ou pescoço de 2 a 3 μm. 
- A peça intermediária é delgada e 
representa menos da terça parte do eixo 
da cabeça (7 a 8 μm de comprimento). 
- A cauda é delgada, não se enrola e deve 
ter um contorno regular, medindo 
aproximadamente 45 μm de comprimento. 
  
- É imprescindível fazer comentários 
sobre os defeitos prevalentes. 
  
14
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
Tipos de Alterações da Morfologia dos 
Espermatozóides Maduros: 
- Macrocefálico; 
- Microcefálico; 
- Cabeça piriforme; 
- Misto (defeito combinado cabeça, peça 
intermediária e cauda); 
- Cabeça alongada; 
- Bicefálico; 
- Cabeça oval pequena; 
- Bicaudal; 
- Amorfo; 
- Cauda enrolada; 
- Gota citoplasmática. 
Geralmente os tipos morfológicos anormais, 
são agrupados em 3 classes: 
- Defeitos na cabeça; defeitos na peça 
intermediária; defeitos na cauda. 
Com certa frequência, as células da 
espermatogênese são encontradas no 
estudo citológico do sêmen humano. 
Na maioria das vezes, sua presença  é 
diretamente proporcional à diminuição da 
q u a l i d a d e e d a q u a n t i d a d e d o s 
espermatozóides. 
As células germinativas imaturas, se 
desprendem dos tubos seminíferos, por 
processos patológicos diversos, como por ex. 
varicocele. 
É comum o encontro de células jovens em 
p ro c e s s o s t ra u m á t i c o s , h i d ro c e le , 
tuberculose, processos infecciosos agudos e 
crônicos. 
As células da espermatogênese que 
podemos encontrar em sêmen humano 
corados pelo Leishmann não possuem 
caudas, portanto ainda não se completou o 
processo de desenvolvimento. 
15
Alguns pesquisadores têm alertado para 
a importância de se descriminar todos os 
t i p o s d e a n o r m a l i d a d e s d o s 
espermatozóides na morfologia estrita, 
p o i s a p re s e n ç a d e fo r m a s c o m o 
bicefálicos, bicaudais, triplóides, etc, 
podem estar relacionados à gestações 
com alterações cromossômicas como 
trissomias,  anencefalias, etc. 
4. Morfologia das Células Germinativas 
Imaturas 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
As células germinativas se classificam de 
acordo com as suas características tintoriais 
e morfológicas. 
- Espermatogônias; 
- Espermatócitos (1° e 2 °); 
- Espermátides. 
✦ Espermatogônias:: 
São células raras de serem encontradas 
no sêmen. 
São redondas (5 a 25 μm), possuem um só 
núcleo corado (basofílico) e homogêneo com 
diâmetro de 6 a 7 μm. 
Podem conter de 1 a 2 nucléolos que 
podem ser vistos junto ao bordo do núcleo 
d e n t ro d e h a lo s c a ra c t e r í s t i c o s . O 
citoplasma é basófilo, de cor azul escuro. 
- Freqüentemente encontramos uma 
reg i ã o m a i s c la ra n o c i t o p la s m a 
envolvendo o núcleo parcial ou totalmente. 
✦ Espermatócitos: 
São células geralmente redondas, maiores 
do que as espermátides, com diâmetro 
variando entre 17 e 20 μm. 
Os núcleos são grandes (11 a 12 μm), 
discretamente basofílicos com cromatina 
filamentosa. 
F r e q u e n t e m e n t e o b s e r v a m - s e 
espermatócitos com 2 núcleos. 
O citoplasma mostra uma coloração azul, 
finamente granulosa, as vezes homogêneo 
ou com vacúolos isolados ou agrupados na 
periferia da célula, provenientes de 
processos degenerativos. 
Cerca de 80% dos espermatócitos 
apresentam uma zona clara adjacente ao 
núcleo, que acredita-se ser a zona de Golgi. 
- Normalmente os espermatócitos 
encontrados no sêmen são do tipo 
primário, por serem abundantes no 
ep i té l io semin í fero , já os do t ipo 
secundário são mais raros e menores do 
que os primários. 
✦ Espermátides: 
São células redondas, ovaladas ou mesmo 
afiladas, com diâmetro variando de 5 a 13 
μm. 
O núcleo tem diâmetro de 4 a 5 μm, com 
cromatina bem condensada, ás vezes com 
alterações nucleares indicativas de morte 
celular (picnose, cariorrexe). 
Na maioria das vezes essas células tem 
um só núcleo, mas podemos encontrar 
16
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
espermátides com 2, 3, 4 ou mais núcleos 
(quando multinucleados são agrupados com 
localização periférica  na célula). 
As espermátides podem ser diferenciadas 
dos leucócitos polimorfonucleares pela falta 
de citoplasma granuloso, ausência de 
pontes nucleares e seus núcleos serem 
esféricos. 
O citoplasma apresenta-se bem corado, 
variando de cianofílico a verde, com 
vacúolos pequenos, as vezes podemos 
observar uma pequena cauda. 
D u r a n t e a c o n t a g e m d o s 2 0 0 
e s p e r m a t o z ó i d e s n a c o l o ra ç ã o d e 
Leishmann (morfologia), já estabelecer a 
proporção de células imaturas quando 
aparecerem. 
Nesta etapa, contamos 100 células 
redondas e estabelecemos as porcentagens 
de cé lu las jovens (espermatogônia , 
espermatócito e espermátide) e leucócitos. 
Valores normais: 
- espermatócitos: até 1%; 
- espermátides : até 3 %. 
C a u s a s : p ro c e s s o s t ra u m á t i c o s , 
s e m i n o m a s , h i d ro c e le , t u b e rc u lo s e , 
processos infecciosos agudos e crônicos. 
Com a porcentagem de leucócitos em 
mãos fazemos a correção da Contagem 
Global de Leucócitos na câmara de 
Neubauer. 
No esfregaço corado pelo Leishmann 
deve-se realizar a contagem diferencial dos 
leucócitos desde que a contagem global na 
Câmara de Neubauer tenha sido maior que 1 
1x106  leucócitos/ml (leucospermia). 
Conta-se 200 leucócitos classificando-os 
conforme morfologia, semelhante ao sangue. 
Um sêmen que tenha uma contagem de 
leucócitos inferior a 1x106/ml apresenta em 
geral predomínio de linfócitos (85%). 
Em casos de processos autoimunes, com 
p r e s e n ç a d e a n t i c o r p o s a n t i -
espermatozóides podemos encontrar até 
25% de eosinófilos. 
Em processos infecciosos teremos 
predomínio de neutrófilos. 
Agentes infecciosos cada vez mais 
notificados pelo acometimento do trato 
genital do homem têm sido clamídias e 
micoplasma. 
17
5. Morfologia das Leucócitos 
CITOPATOLOGIA universidade unicesumar - vitoriaisabel
C) Exame do Sêmen em Pacientes 
Vasectomizados ✨
A análise do sêmen pós-vasectomia é um 
procedimento menos complicado que o da 
infertilidade, já que a única preocupação é 
detectar a presença ou ausência de 
espermatozóides.
O tempo necessário para ocorrência da 
esterelização completa pode variar muito de 
um paciente para outro e depende do tempo 
e do número de ejaculações.
Por isso não é raro encontrarem-se 
espermatozóides viáveis em um paciente 
vasectomizado.
N o r m a l m e n t e a s a m o s t r a s s ã o 
examinadas em intervalos mensais que 
começam aos 2 meses após vasectomia e 
continuam até que duas amostras mensais 
c o n s e c u t i v a s t e n h a m a u s ê nc i a d e 
e s p e r m a t o zó i d e s n o s ê m e n ( í n d i c e 
considerado seguro).
Recomenda-se o exame microscópico  
tanto do material homogeneizado e não 
diluído, como do sedimento da amostra 
centrifugada.
✦ Testes Opcionais: 
- Devem ser solicitados pelo clínico: 
- Cultura seminal; 
- Análise bioquímica do plasma seminal 
(frutose, ácido cítrico, fosfatase ácida); 
- Teste de penetração espermática. 
18