Bacteriologia (Microbiologia Veterinária Básica)

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Escolhe-se o meio, pesa e disolve-se em água
destilada, esteriliza-se, distribuição em tubos e
placas e ai sim isolar o micro organismo e fazer
testes.
Semear = espalhar numa super�cie para ele
crescer.
Incubação: 18 a 24h
Quando o microorganismo está num ambiente
ideal como o laboratório ele pode deixar de
expressar algumas características (domesticado), e
essas características seriam importantes para, por
ex., produzir vacinas.
Depois de isolar e fazer a morfologia, devemos fazer
colorações.
Algumas colorações já nos dão algumas respostas,
por exemplo o gram ajudam a discernir quais tipo
de antimicrobianos pode-se usar para tratar.
Depois da coloração já podemos escolher como
identificar o microorganismo.
Pode-se trabalhar com teste bioquímico e
fisiológico fornecendo suprimentos para o
microorganismo e ver se ele utiliza ou não esses
substratos.
Sequenciamento de DNA (principalmente RNAr 16s
para bac e 18s para fungos ) em laboratórios com
serviços mais avançados.
Isolar e extrair proteínas pelo aparelho MALDI TOF
e ver o perfil bioquímico através do perfil proteico
do microorganismo ajudando a identifica-lo.
Nomenclatura bacteriana
- Gênero: staphylococcus; Espécie: aureos.
- O nome da espécie de um indivíduo deve ser
sempre diferente do restante do texto.
Exemplo:
- O Staphylococcus aureus é a espécie mais
frequente causando mamites em bovinos.
- O Staphylococcus aureus também causa
dermatites.
- O Staphylococcus aureus produz toxinas
potentes.
Posso usar abreviações para falar sobre o gênero ou
alguma espécie específica.
Ao redigir um texto, a primeira citação deve ser
feito com o nome por extenso, por exemplo,
Staphylococcus aureus,. A partir deste momento
pode se utilizar a abreviação S. aureus (também em
destaque) no texto.
- S. Aureus: as espécie staphylococcus aureus
- S. epidermidis: a espécie staphylococcus
epidermidis.
Mas se você for escrever sobre várias espécies de
Staphylococcus você deve usar Staphylococcus sp.
(sp. sem destaque).
- Staphylococcus sp. ou spp: o gênero
staphylococcus; as espécies desses gêneros.
- Exemplo: Os Staphylococcus sp. podem ou
não causar patologias.
Diversidade metabólica dos microorganismos:
→ Autotrofo: não precisa de compostos orgânicos no
ambiente, ele mesmo fixa o dióxido de carbono.
→ Heterotrofo: precisa de fontes nutritivas do
ambiente.
→ Quimiotrofo: para obter energia precisa realizar
reações químicas para obter nutrientes.
→ Fototrofo: obtém energia através da luz.
→ Organotrofo: precisa de compostos orgânicos
como fonte.
Para ele terminar de usar esses compostos
orgânicos, alguns usam a respiração anaeróbia,
onde o último aceptor de elétrons são compostos
inorgânicos ou orgânicos (fermentação). E outros
usam a respiração aeróbia, onde o último aceptor é
o oxigênio.
→ Litotrofo: fonte de energia é inorgânica.
Compondo grupos:
→ Quimiolitotrófico: Organismo que obtém energia
a partir da oxidação de compostos inorgânicos.
→ Quimiorganotrófico: Organismo que obtém
energia a partir da oxidação de compostos
orgânicos.
→ Foto-heterotrófico: Organismo que utiliza a
energia luminosa como fonte de energia e
compostos orgânicos como fonte de carbono.
→ Fotoautotrófico: Organismo capaz de utilizar a
energia luminosa como única fonte de energia e o
CO2 como única fonte de carbono.
→ Mixotrófico: Organismo que utiliza compostos
orgânicos como fonte de carbono, mas que utiliza
compostos inorgânicos como doadores de elétrons
→ Auxotrófico: Organismo que desenvolveu uma
necessidade nutricional a partir de uma mutação.
Ou seja ele precisa obrigatoriamente de um
composto par se sobreviver
● Fatores �sicos: temperatura, pH e
osmolaridade.
- Psicrófilos: microbiota animal, vegetal,
ambiente. Podem degradar alimentos e
serem patogênicos.
- Mesófilos: animal, vegetal, ambiente,
produção de alimentos, vitaminas, alcool,
vinagre,.. Produzem toxinas, degradam
alimentos, couro, papel, metais, patologias,..
- Termófilos/Hipertermófilos: microbiota de
determinados ambientes, enzimas,.. Pode
degradar alimentos, metais e produção de
toxinas.
Zona de perigo: quando a temperatura de
crescimento do microorganismo é o mesmo das
células do organismo do hospedeiro. Ou seja, de
20ºc a 50ºc. Frio não é relacionado com morte do
vírus, mas sim com retardo do crescimento
microbiano. Já o frio causa morte.
Acidófilos e alcalino�licos - geralmente não
relacionados à patologias.
Osmolaridade
- Meio isotônico: ideal
- Meio hipotônico: tem poucos nutrientes do
lado de fora, então como a célula é mais rica
em solutos do lado de dentro acaba puxando
água e se rompendo. Não é favorável para
muitos microorg.
- Meio hipertônico: célula perde água para
manter equilíbrio e fica inviável. Geralmente
não mata os microorganismos, mas
inviabiliza a multiplicação.
Osmotolerante: microorganismo que tolera e é
capaz de crescer em várias [osmóticas].
Ex: staphylococcus aureos - fungos
Halófilo: requer altas [sal], >0,2M.
Ex: halobacterium sp
● Fatores químicos
Fatores de crescimento: aminoácidos, vitaminas,
purinas, pirimidinas.
Microorganismo fastidioso: precisa de uma
composição mínima para crescer (exigente, não é a
maioria).
Necessidade de O2
- Aeróbios obrigatórios: cresce só na parte
superior do tubo.
- Anaeróbios facultativos: cresce muito bem
em cima mas também cresce um pouco no
restante do tubo.
- Anaeróbios obrigatórios: cresceu somente no
fundo do tubo.
- Anaeróbios aerotolerantes: cresce ao longo
do tubo e não demonstra necessidade de
crescer em cima mas tolera o O2, não o
utiliza.
- Microaerófilos: são aeróbios mas precisam
de uma menor [O2] para crescer.
- Capela de anaerobiose: não tem O2 dentro. É
cara e complicada de ser trabalhada.
Qualquer anaeróbio, principalmente
obrigatórios.
- Cuba para anaerobiose: usada para -
anaeróbio aerotolerante.
- Jarra com vela/cuba microaerobiose:
microaerófilos.
→ Quimicamente definido: conhecemos todos os
componentes e sabemos quantificar cada um.
→ Meio complexo: alguns componentes presentes
não podem ser quantificados quimicamente.
Ex: extrato de soja, de carne, de plantas. Sabe-se
“grosseiramente” qual o componente.
Classificação de acordo com o objetivo:
→ diferenciais: diferencia algum grupo de
microorganismo.
→ seletivos: impedem o crescimento do grupo x e
estimula do y;
→ seletivos e diferenciais
→ enriquecimento: parecido com os seletivos,
porém os seletivos geralmente são sólidos e os de
enriquecimento são líquidos.
⏩ Meio complexo enriquecido e diferencial
- facilitar o isolamento de bac fastidiosas
- diferenciar as bac através da produção de
hemolisina.
Agar-agar: da consistência de gelatina mas não é
utlizado pelos microorganismo.
- Diferenciação: presença ou não de hemólise, tipo
de hemolisina.
Não hemolítico porque no entorno das colônias o
sangue se mantém inalterado.
Halo dourado: destruição das hemácias (hemólise
total).
⏩ Meios seletivos e diferenciais
● Seletivos: corantes, antimicrob., NaCl,
açúcar, pH.
● Diferenciais: indicadores de pH, substratos
diferentes.
Seletivo e diferenciais: pode-se adicionar um
corante que seja tóxico para um grupo.
▶ No caso do Mac Conkey, tem o cristal violeta que
é tóxico para bac gram +. Além disso ele tem os sais
biliares que também são tóxicos para as gram+.
▶ Meios com antimicrobianos (tetraciclina, por
ex), elimina os que são sensíveis à ela.
▶ Pode-se adicionar sal, como no caso do ágar sal
manitol que isola staphylococcus de pele e
alimentos. O sal só tolera as bactérias halófilas
tolerantes nesse meio.
▶ Apresentam indicador de pH e contém também
substratos que demonstram sua utilização pela
mudança de pH. Por exemplo o Mac Conkey ele
possui lactose que é uma fonte de carbono, e como
ele tem um indicador de pH, se a bac usa lactose
muda o pH e o meio fica da cor que ficou. No caso da
ágar sal manitol, ele possui o manitol.
Tem açúcar e pH baixo, a maioria das bac não
cresce e seleciona os fungos somente. Não é
diferencial.
▶ Ágar MacConkey: meio complexo seletivo e
diferencial
- favorece o crescimentode bactérias gram -
- diferencia as bactérias pela utilização ou não
de lactose.
Enriquece uma amostra antes de colocar na placa.
⏩ Meio enriquecido, complexo, seletivo e líquido.
- Meios líquidos, que favorecem o crescimento
do microorg. desejado, inibindo alguns
microorg. competidores da microbiota, a
partir de uma amostra muito contaminada.
● Antimicrobiano natural - antibiótico
(produzido por um ser vivo)
● Antibiótico semi sintético (inicialmente
produzido por um ser vivo, mas modificado
depois).
● Antimicrobiano sintético: sulfas,
quinolonas, nitrofuranos (síntese totalmente
artificial).
Halo de inibição: essas duas colônias produzem
algum antimicrobiano que impediu que a bac
problema crescesse perto dela, ou seja, ela produz
antibiótico.
▶ Espectro de ação
Pegamos a colônia que teve atividade antim.
isolamos e semeamos ela em uma placa.
Incubamos e pegamos micro organismos
problemas e semeamos e incubamos e observamos.
B, C e E são sensíveis a esse antimicrobiano pois não
cresceram perto.
▶ Quem produz os antibióticos? ▶ Antibiograma
▶ Leitura de antibiograma
Só tem halo não significa que o antimicrobiano vai
matar a bac problema, precisamos medir e olhar
em uma tabela o tamanho do halo para saber a
eficiência.
▶ Associação de antimicrobianos
Bactericida = mata; Bacteriostático = inibe
crescimento
▶ Citologia Bacteriana
● Tamanho e forma dos procariotos
● Diâmetro X Comprimento: ajuda a definir se
são cocos ou bastonetes.
● óleo de imersão: aumenta o número de raios
luminosos que entram na objetiva.
▶ Arranjos celulares
- maioria monomórfico: forma não varia ao
longo do tempo
- poucos pleomórficos: a forma varia ao longo
do tempo as vezes dentro do mesmo cultivo.
▶ Planos de divisão celular
A forma de coco está relacionada com a ausência de
algumas enzimas intracelulares.
a) Cocos em cadeia ou estreptococos
b) Diplococos
c) Tétrades
d) Cubo ou sarcina
e) Cocos em cachos de uva ou estafilococos
Bastonetes ou bacilos unicelulares
Diplobacilos
Estreptobacilos ou bastonetes em cadeia
Bastonetes com arranjo de letras
Bactérias filamentosas
- Pode ter filamentos que parecem cocos
Formas espiraladas: espirilos e espiroquetas
- Espirilos: flagelos externos, células rijaz.
- Espiroquetas: endoflagelos, células flexíveis.
Formas incomuns
▶ Resumo
● Procariotos: bacteria e archaea
● Eucariotos
▶ Célula procariótica
▶ membrana citoplasmática:
igual dos eucariotos, porém tem um lipídeo
chamado hopanoides que ajudam na agregação de
proteínas na super�cies da membrana.
Vários tipos de transportes.
Funções da membrana citoplasmática
• Barreira para solutos
• Ancoragem de proteínas e enzimas
- Transporte
- Conservação de energia
• Regulação da passagem metabólitos
- Transporte de nutrientes
- Eliminação ou liberação de substâncias
• Receptores quimiotáticos
• Segregação DNA
• Ancoragem de flagelos, �mbrias
Nitrificantes: usam amônia como fonte de energia e
precisam da enzima monoxidase.
Metanotrofas: tem metano monoxidases, usam
metano como fonte de energia.
▶ Citoplasma
● Genoma
- Cromossomo(s)
- Plasmídeos
• Difuso no citoplasma (mas localizado)
• DNA, fita dupla, circular
- Exceções: Streptomyces sp., Borrelia sp.
• Um único cromossomo
- Exceções: Rhodobacter sp., Brucella sp.,
cianobactérias, Rhyzobium sp.
• Plasmídeos: sequências de DNA que trazem infos
que podem trazer características novas pro
organismo. Trás gasto energético.
- DNA
- Circular, linear
- No citoplasma ou integrado no cromossomo
A carga genética do microorganismo explica o
porque alguns são patógenos ou não.
● Ribossomos
- São importantes no tratamento e
diagnóstico de doenças microbianas.
- A região 18s e 16s são utilizados no
sequenciamento de DNA para identificação
dos microrganismos.
▶ Antimicrobianos que agem inibindo a
replicação e a síntese de proteínas
- Alvos: Alvos: DNA, RNA polimerase,
Ribossomos, Rotas de produção de
precursores de DNA, RNA e proteínas
- Metilfurano e metronidazol quebram o DNA
do microorganismo. Tem amplo espectro.
Não agem nos mesmo microorganismos.
- Quinolonas e novobiocina: espectros
diferentes, atuam na DNA girase.
- Rifampicina impede que a RNA polimerase
funcione, amplo espectro, microorganismos
intracelulares.
- Trimetropin e sulfonamidas: atuam no ácido
fólico, que é precursor para várias estruturas
importantes.
Sulfa é análoga do paba, entrando no lugar do paba
formando uma molécula diferente do ácido fólico.
● Proteínas, lipídeos
● Endósporos
● Corpos de inclusão ou grânulos de reserva
(proteínas, enzimas, sacarídeos, ar, fagos
defeituosos, S0)
▶ Resumindo...
● As bactérias não apresentam organelas como
os eucariotos, mas mantém todas as
atividades celulares essenciais.
● O tamanho do genoma está relacionado com
a capacidade de sobrevivência do
microrganismo no ambiente.
● Existem antimicrobianos que inibem o
crescimento celular inibindo a replicação e a
síntese celular.
● Os antimicrobianos variam em espectro de
atividade, mesmo apresentando o mesmo
alvo de ação.
● Felizmente, nenhum antimicrobiano mata
todos os microrganismos.
● Que os microrganismos podem fazer reserva
energética e de enzimas.
● Que eles podem se posicionar dentro da
coluna de água por vesículas de ar ou pelo
campo magnético da terra.
A coloração de Gram mostra diferenças de
composição de envoltórios de bactérias, dividindo
elas em gram-positivas e gram-negativas.
▶ Peptideoglicano
- formado por filamentos de açúcares e ligados
por aminoácidos (D- Alananina) que são
produzidos dentro do citoplasma.
- Bactoprenol transporta os precursores pro
lado externo da célula, e aí receberam as
atividades das proteínas ligadores de
penicilina, que ajudam a inserir novos
precursores na célula, auxiliando no
crescimento bacteriano e também são alvos
de antimicrobianos.
- Ácido lipoteicóico e teicóico são exclusivos
das gram-positivas. Variam em sua
composição, podendo ter açúcares ou
aminoácidos. Dependendo de como for, terá
fenótipos diferentes e isso determina como
será reconhecido pelas células do nosso
corpo.
▶ Antimicrobianos que impedem a formação da
parede:
• Fosfomicina:
- atua dentro do citoplasma impedindo a
formação do N-acetilmurâmico.
- Amplo espectro.
• Cicloserina:
- impede a ligação da D-alanina.
- É um análogo da D-alanina e entra no lugar
dela. Não utilizada na vet.
- Usado para tratar tuberculose em humanos
(reservado).
• Vancomicina
• Bacitracina:
- inibe o transporte do precursor do
peptideoglicano pela membrana.
- Espectro reduzido, atua em cocos e
bastonetes gram positivos.
• Betalactâmicos:
- Ação nas proteínas ligadoras de penicilina
- ativação de holinas (fazem poros nas
membranas.
- Penicilinas e cefalosporinas: pequeno a
amplo espectro
- Monobactâmicos: gram negativas
- Carbepenêmicos: amplo espectro.
• Penicilinas
• Cefalosporinas
• Carbepenêmicos
• Glicopeptídeos:
- Liga-se à D-alanina do precursor, impedindo
a formação das ligações cruzadas
- ou formação linear entre os açúcares
- ou impede transporte do precursor.
- Espectro reduzido: Gram positivos.
- Uso humano.
▶ Resumo
● Bactérias gram-positivas apresentam parede
espessa.
● Através da variação de aminoácidos e
açúcares nos ácidos teicoicos e lipoteicoicos
as bactérias apresentam fenótipos
diferentes.
● Outras proteínas e glicoproteínas de
super�cie também variam entre as espécies e
são também responsáveis pelos diferentes
fenótipos.
● Várias etapas da síntese da parede são alvos
de antimicrobianos
● Dependendo do antimicrobiano e do gênero
de bactéria, varia a atividade dos
antimicrobianos.
- Tem mais aminoácidos e a sua composição é
diferente das gram positivas.
▶ Membrana externa
- barreira de passagem
- peptideoglicano não serve de barreira, é
poroso e deixa passar coisas.
- gram negativas mais resistente à passagem
de produtos químicos pois tem essa
membrana externa. Porém em relação à
perda de água ficam em desvantagem pois as
positivas tem uma parede mais espessa,
fazendo com que elas demorem mais paraperder a umidade da célula.
- formada por uma bicamada lipídica, com
parte interna rica em proteínas (porinas -
formam canais de passagem de substâncias
hidro�licas) e lipídeos e na parte externa é
rica em lipopolissacarídeos - LPS - (trás o
fenótipo do microorganismo) e fosfolipídeos.
▶ Lipopolissacarídeos
- Lipídeo A é tóxico ao hospedeiro e causa
sintomas.
- Polissacarídeo interno: rica em açúcar e
fosfato.
- Polissacarídeo O específico: varia de um
organismo pro outro.
- LPS - S: lipopolissacarídeos liso, mais
resistentes aos antimicrobianos.
- LPS - R: rugoso, mais sensíveis à
antimicrobianos. Não tem diferença de
patogenicidade com o liso, mas as vezes é
menos patogênico.
▶ Polimixinas - atuam somente contra
gram-negativas
- tem afinidade pelos fosfatos de lipideos de
membrana. Se liga nos fosfolipídeos das
membranas, causando lesão e fazendo a
célula de romper.
- Espectro reduzido: Gram negativas entéricas
e Pseudomonas aeruginosa
▶ Coloração de gram - diferença entre os dois
grupos
Álcool acetona causa alterações nas paredes, nas
gram + ele desidrata as paredes, diminuindo os
poros e dificultando sua passagem e dissolver os
corantes la de dentro. Nas gram -, as membranas
lipídicas não são barreiras para esses compostos,
pois eles causam lise dos lipídeos, e a parede é tão
fina que não impede a passagem. Então o álcool
dissolve o lugol e violeta e isso diferencia as duas. A
fucsina (contra corante) cora o que ainda não está
corado, dando coloração rosada para as gram - .
- bactérias com características especiais nos
seus envoltórios
- pela análise genética são gram positivas mas
não se colorem pelo gram.
Micobactérias
Além do peptideoglicano, a parede tem outros
filamentos de açúcares, ácidos micólicos (torna o
microorganismo impermeável) - a grande maioria
dos antimicrobianos que atuam em outros
microorganismo não funcionam com as
micobactérias.
Colônias de micobactérias
- Quanto mais lisa a super�cie, menos
patogenicidade.
Coloração de Ziehl Neelsen
Micoplasma
- não tem formato definido
- formam fungos filamentosos
- muito pequenos
- dependem de células eucariotas
- não tem parede
- possui esteróides que ajudam na
manutenção das proteínas
- possuem glicolipídeos
- não sintetiza vários aminoácidos
● Flagelos
- função de motilidade
- importante em meios mucosos e líquidos
- ligado na mem. externa
- composição proteica (flagelina - varia de
organismo pra organismo a composição de
aminoácidos)
Posição
Monotríquia = 1 flagelo; Polar = somente na
extremidade; Lofotríquia = mais de 1 flagelo;
Anfitríquia = 2 extremidades; Peritríquia = flagelos
saindo de todo entorno do organismo.
Quimiotaxia: O organismo muda o esquema de
movimento quando sente um estímulo.
Visualização da motilidade no laboratório
Quando cresce só no meio de inoculação, ele tem
motilidade negativa, porém esse resultado não é
100% confiável.
Proteus mirabilis: pode contaminar a amostra, ele
se espalha na super�cie da placa (raro), pode
atrapalhar o diagnóstico.
Fixação na super�cie das células usando os flagelos
● Endoflagelo ou filamento axial
- borrelia sp, leptospira sp e treponema sp, são
gram negativas sensíveis à primeira geração
de penicilinas.
- Não fica exposto externamente, fica abaixo
da membrana externa (bainha).
- Número variável.
● Fímbrias
- composição preoteica (pilina) - composição
de aminoácidos varia
- gram positivas: Actinomyces sp.,
Clostridium sp., Corynebacterium
diphiteriae, Enterococcus sp. ,
Streptococcus sp.
- gram negativas: Bordetella pertussis,
Citrobacter sp., Deinococcus radiodurans,
Escherichia coli, Haemophilus influenzae,
Hafnia alvei, Neisseria sp,. Proteus
mirabilis, Pseudomonas aeruginosa.
O que explica o processo infeccioso é o tipo de
receptor que o organismo consegue se ligar.
Induz nossas células à mudarem o citoesqueleto e
melhorar a adesão do microorganismo.
● Pili Sexual (�mbrias especiais)
- codificadas por plasmídeos
- adesão para troca de material genético,
adesão de bacteriófagos.
● Cápsula e Camada Limosa
Cápsula: Camada bem organizada e que não é
retirada com facilidade.
- Composição: polissacarídica, proteica ou
glicoproteica.
- Glicocálice: Cápsula composta de
polissacarídeo que envolve uma célula
Camada limosa: Camada frouxa, difusa envolvendo
a bactéria e que pode ser retirada com facilidade.
Composição: polissacarídica.
Funções da Cápsula e Camada Limosa
- Resistência à: fagocitose e ao ataque do
complemento, dessecação e bacteriófagos
- Proteção contra alguns compostos tóxicos
como detergentes
- Adesão em super�cies
- Nas mixobactérias a camada limosa auxilia
no deslocamento por deslizamento
Camada S: Camada bem organizada que envolve
algumas bactérias e arqueias. Composição proteica
ou glicoproteica.
Funções:
- Resistência: à fagocitose e ao ataque do
complemento e a bactérias predadoras
- Proteção contra alterações de pH, choque
osmótico, enzimas
- Manter a forma e rigidez celular
- Auxiliar na adesão
Bactérias que produzem cápsula e camada S
- gram-positivas: Bacillus anthracis (camada
S), Staphylococcus aureus e Streptococcus
sp.
- gram-negativas: Escherichia coli,
Haemophilus influenzae, Klebsiella
pneumoniae, Neisseria sp., Salmonella
Typhi.
Visualização da cápsula - coloração
● Esporos
Endósporos
- resistência ambiental
- interno
- 1/cél
Exósporos
- externos
- vários/célula
- reprodução
- resistência menor que endósporo
Ambos tem resistência aos raios UV, produtos
químicos e dessecação. O que diferencia os dois é
que os endósporos resistem à altas temperaturas.
Precisa de técnicas específicas para destruí-los. Os
métodos esterilizantse matam tudo, os não
esterilizantes matam as células vegetativas
(microorganismo que se multiplicam e ter
interações com o ambiente, já o esporo quando está
na fase esporulada ele fica quieto no ambiente, sem
se reproduzir, não faz trocar com o ambiente).
Bactérias formadoras de endósporos
- todos são genéticamente gram-positivos
Bactérias formadoras de exósporos
- todas geneticamente gram-positivas
- endósporo não se cora pelo gram
- endósporo
- exósporo
Importância
● Endósporos
- Alta resistência e permanência no
ambiente
- Algumas bactérias são patógenos:
Bacillus anthracis, Clostridium
botulinum, Clostridium tetani,
Clostridium perfringens
- Alguns bactérias são deterioradores
de alimentos: Desulfomaculum sp.
- Forma e posição intracelular dos
esporos auxiliam na identificação dos
microrganismos
- Algumas bactérias são produtoras de
antibióticos e inseticidas
● Endósporo
- Exósporos podem ser ativadores de
alergias
- Algumas bactérias são patógenos:
Actinomyces sp.
- Maioria dos antibióticos é produzida
pelo Streptomyces sp.
- Forma, tamanho e arranjo dos
esporos auxiliam na identificação dos
microrganismos
Produtores de antibiótico
Esporulação
A célula vegetativa (que está me multiplicando e
fazendo trocas com o ambiente) se ela tem
capacidade de produzir esporo, só irá produzi-los
em momentos de estresse (falta de água, alimento),
pois o esporo sobrevive melhor no ambiente. Só
volta a produzir cél vegetativa (germinação - 20min)
se voltar a ter condições ambientais ideais.
Estágio 0-3
- Replicação do material genético
- Uma cópia do material migra para uma
extremidade da célula onde vai ser formado
o esporo
Estágio 4-7
- esporo tem menos água e pH mais ácido que
a célula mãe
- o interior do esporo é rico em ácido
dipicolínico (que se associa ao cálcio e
protege material genético de altas
temperaturas)
- recebe 3 camadas de proteínas que protegem
da dessecação, atividade UV e produtos
químicos.
Posição e forma do endósporo variam.
Visualização dos esporos
● Presença não tolerada: maioria das
infecções, alimentos (listeria sp., salmonella
sp.)
● Presença tolerada: urina, alimentos
(coliformes, mesófilas, psicrófilas, bolores)
● Quantificação para determinar número de
viabilidade celular: produção de vacinas e
testes diagnósticos.
Precisa quantificar: carne, leite e derivados e cistite.
→ Métodosde contagem
Somente microrganismos vivos (viáveis)
● Método 1: Contagem em placa: diluições
seriadas
Técnica 1: Inoculação em profundidade.
Técnica 2: Inoculação com espalhamento em
super�cie
A primeira técnica pode-se colocar um volume
maior de amostra, sendo mais sensível. Porém
pode-se matar organismos sensíveis à temperatura.
Após incubação proceder contagens (25-250 UFCs)
Não pode usar as placas com muitas colônias
grudadas uma na outra e nem muito diluído para
não errar na contagem. Ideal é entre 25-250 ou
30-300 UFCs.
Conta as colônias nas 3 placas, soma e divide por 3 e
multiplica pela diluição da amostra.
● Método 2: Turbidimetria
- depende de um trabalho técnico com
diluição em placas.
- mede a turbidez: menos luz, mais
microrganismo.
- Cada um dos tubos diluídos vai ser medido
para controlar o crescimento do
microrganismo.
● Método 3: Filtração de amostras por
semeadura em meio específico ou coloração
que identifica células vivas.
Membrana retém os microrganismos. É colocada
em cima da placa.
É principalmente usada para amostras muito
diluídas.
● Método 4: cultivo líquido associado à
probabilidade estatística (NMP - número
mais provável)
Tem-se uma amostra (sólida ou líquida), dissolvida
e diluído no meio, sendo distribuída em 3 grupos de
frascos com concentrações diferentes do meio
nutriente, que são específicas para um determinado
grupo de microrganismo. Material é incubado,
dependendo do tipo de meio a interpretação é
diferente. No caso da foto, positivo para o
crescimento seria a formação de uma bolha de gás.
Uma vez o resultado positivo no tubo, faz-se outros
testes de confirmação. Confirmado o positivo, se faz
a interpretação do material quantificando todos os
tubos positivos.
Com a sequência de 5-3-1 tubos positivos, olha-se na
tabela, que informa 110 números mais prováveis
(em 100ml de amostra).
Contagem de microrganismos mortos
● Método 1: Medida direta em câmara de
contagem
Lâminula quadriculada que facilita a contagem de
microrganismos.
● Método 2: Filtração das amotras e coloração.
Ao invés de filtrar e colocar no meio de cultivo,
coloca-se corante.
Métodos indiretos
● Citometria de Fluxo: Aparelho que conta
células marcadas por um corante.
● Atividade metabólica: Aparelho que mede a
produção de um metabólito ou ATP
produzido
● Peso Seco: Mede o peso da massa microbiana
após retirada total da água
● Peso Úmido (cultivo centrifugado
hidratado): mede o peso da massa
microbiana após centrifugação e retirada da
água.
- aumento do número de células ou aumento
populacional.
Reprodução - não tem sexuada. Usam outros
métodos para adquirir características do ambiente.
- Fissão binária (maioria dos
microrganismos): célula dobra de tamanho e
se separa em 2 células idênticas.
Geralmente os microrganismos sempre estão
fazendo cópias do seu material para se preparar
para se dividir. Além da replicação do material
genético, se forma no centro do indivíduo um anel
FtsZ com enzimas que formam proteínas que ficam
no entorno do microrganismo uma região de
síntese de todos os componentes celulares.
- Brotamento (algumas bactérias e fungos):
podem ter crescimento em uma
extremidade. Duplicam material genético
também resultando em 2 células.
- Fragmentação de filamentos, formação de
hifas (fungos): duplicam material, que depois
é repartido em fragmentos.
Bactérias filamentosas crescendo nas extremidades
das hifas, que amadurecem e se septam formando
os exósporos que são liberados e iniciam
novamente o processo de crescimento.
Tempo de divisão
20 minutos - 2 células
40 minutos - 4 células
60 minutos - 8 células
Dependendo da espécie, para ter colônias
suficientes para um diagnóstico levam semanas.
Exemplo: Micobactéria
- Fase Lag: microrganismo encontra um meio
novo.
- Fase exponencial: começa a crescer. Nessa
fase que se usa para vacinas.
- Fase estacionária: se mantém, indica que
temos um número igual de morte e
crescimento. O meio fica tão tóxico para o
organismo que começa a ocorrer morte
celular. Nessa fase que se usa para
antibióticos.
- Fase morte:
Sistema onde ocorre renovamento dos ingredientes
presentes no meio. Promove um trabalho com
grandes volumes.